慢性应激对大鼠肾脏水通道蛋白1的影响及机制研究

目的研究慢性应激(足底电击)对大鼠肾脏水通道蛋白1(AQP1)的影响及其机制。方法以足底电击SD雄性大鼠为慢性应激模型,分为对照组、电击组、肾交感神经切除组、肾交感神经切除+电击组、注射血管紧张素转换酶抑制剂(卡托普利)+电击组、注射抗氧化剂(Tempol)+电击组,每组6只大鼠。应用尾套法测量大鼠的血压,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定各组大鼠肾脏AQP1 mRNA的表达变化,免疫组织化学法(IHC)观察AQP1在各组大鼠肾脏中的表达及分布。结果电击组大鼠肾脏AQP1及血压与对照组比较,均差异有统计学意义(P<0.05),电击组大鼠肾脏AQP1表达明显,血压升高;肾交感神经切除组大鼠肾脏AQP1与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),AQP1表达减少,血压未见升高。肾交感神经切除+电击组、注射卡托普利+电击组、注射Tempol+电击组大鼠肾脏AQP1表达及血压与电击组比较,差异有统计学意义(P<0.05),肾脏AQP1表达均减少,血压均降低。结论交感神经可调节AQP1的表达,足底电击通过兴奋肾交感神经上调AQP1,另外,AQP1还受氧化应激及肾素-血管紧张素系统调控。AQP1在慢性应激诱导的高血压中可能起着一定的作用。

足底电击加强大鼠凝血功能的研究

目的研究足底电击对大鼠凝血系统的影响及机制。方法以SD雄性大鼠足底电击建立模型,分为对照组、电击组、假手术组、去神经电击组和注射抗氧化剂电击组,每组6只大鼠。尾套法测量大鼠的收缩压,凝血分析仪测定血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血浆凝血酶(TT),血小板聚集仪测定二磷酸腺苷(ADP)介导血小板聚集和胶原介导血小板聚集,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中脂质过氧化产物、谷胱甘肽、皮质酮浓度,观察各项指标的变化。结果足底电击大鼠7 d后,电击组和假手术组收缩压明显高于对照组(P<0.05)。足底电击14 d后,电击组和假手术组血浆中谷胱甘肽活性较对照组降低(P<0.05),电击组和假手术组血浆中脂质过氧化物、皮质酮浓度相对于对照组升高(P<0.05),与对照组比较,电击组和假手术组PT缩短,TT延长(P<0.05),电击组和假手术组的ADP和胶原介导血小板聚集率高于对照组(P<0.05),电击组和假手术组比较差异无统计学意义。与电击组比较,去神经电击组和注射抗氧化剂电击组收缩压、血浆中脂质过氧化物、皮质酮浓度、ADP和胶原介导血小板聚集率降低(P<0.05)。结论足底电击通过激活肾交感神经和增加氧化应激使大鼠凝血功能增强。

孤束核胆碱能与组胺能系统对颈动脉窦压力感受器反射调节的交互作用

脑胆碱能系统与组胺能系统影响颈动脉窦压力感受器反射(carotid sinus baroreceptor reflex,CSR)活动,然而二者是否在孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)水平相互作用,跨转调节CSR,尚不清楚。本文在麻醉Sprague-Dawley(SD)大鼠孤离的一侧颈动脉窦区,通过窦内逐级加压引发CSR和动脉血压变化,经Logistic五参数曲线拟合,求得窦内压(intracarotid sinus pressure,ISP)–平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)关系曲线及其特征参数,观察预先在NTS微量注射各选择性胆碱能受体拮抗剂[M1受体拮抗剂哌仑西平(pirenzepine,PRZ)、M2受体拮抗剂美索曲明(methoctramine,MTR)或N1受体拮抗剂六烃季胺(hexamethonium,HEX)]对侧脑室微量注射(intracerebroventricular injection,i.c.v.)组胺(histamine,HA)所致CSR变化的影响,以及预先在NTS微量注射组胺能H1受体拮抗剂氯苯吡胺(chlorpheniramine,CHL)或H2受体拮抗剂西咪替丁(cimetidine,CIM)对i.c.v.拟胆碱药毒扁豆碱(physostigmine,PHY)所致CSR变化的影响,以期解析中枢两大系统对CSR是否具有跨转调节机制。结果显示:(1)单独NTS内注射所给剂量的各选择性胆碱能受体拮抗剂或组胺能受体拮抗剂对CSR均无明显作用(P>0.05),也不引起动脉血压水平明显变动;(2)预先NTS内注射PRZ或MTR可部分翻转i.c.v.HA所致的CSR重调定,表现为ISP–MAP关系曲线在高窦压区明显左下移位(P<0.05),ISP–Gain关系曲线在中窦压区显著上移(P<0.05),反射参数平均动脉压变动范围和最大增益加大(P<0.05),最大增益时的窦内压值与饱和压减少(P<0.05),上述效应中PRZ的作用不如MTR的显著(P<0.05),但HEX对i.c.v.HA所致的CSR变化无明显作用(P>0.05);(3)预先NTS内注射CHL或CIM对i.c.v.PHY所致CSR变化的影响,类似于NTS内注射PRZ或MTR对i.c.v.HA所致CSR变化的作用,且CHL的效应强于CIM(P<0.05)。上述结果表明:侧脑室注射HA所致的CSR重调定机制可能涉及下丘脑-NTS下行组胺能通路,跨转激活NTS的胆碱能系统,经M1、M2受体尤其是M2受体介导而发挥调节作用;侧脑室注射PHY对CSR的重调定,可能通过下丘脑-NTS下行胆碱能通路,跨转激活NTS的组胺能系统,经H1、H2受体尤其是H1受体介导而生效。

脑室注射哌仑西平减弱应激所致颈动脉窦压力感受器反射的重调定

目的探讨中枢胆碱能M_1受体在应激条件下对颈动脉窦压力感受器反射(CSR)的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分成非应激组(n=12)和应激组(n=12),后者接受不可逃避的足底电击,每日2次,每次持续2h。应激1周的SD大鼠,经筛选、麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic曲线拟合,求得ISP-MAP、ISP-增益(Gain)关系曲线及其特征参数,观察侧脑室微量注射选择性胆碱能M_1受体拮抗剂哌仑西平(PRZ)对CSR的影响。结果侧脑室注射PRZ(1.0 mmol/L,5μl)导致应激大鼠ISP-MAP关系曲线后半程明显下移(P<0.05),ISP-Gain关系曲线中部明显上移(P<0.05),反射参数中饱和压和最大增益时的窦内压值减少(P<0.05),而反射最大Gain加大(P<0.05);侧脑室注射相同剂量、容积的PRZ对非应激大鼠CSR的各项指标均无明显影响(P>0.05);侧脑室注射PRZ不能使应激的CSR水平恢复到非应激水平(P<0.05)。结论中枢胆碱能M_1受体参与应激对CSR功能抑制性重调定;除此之外,应激调节中尚有其他神经机制因素的参与。

大鼠肾交感神经与氧化应激在足底电击引发的高血压中的作用

为了探讨大鼠肾交感神经与氧化应激在慢性足底电击诱导的高血压中的作用，本研究将90只Sprague-Dawley大鼠随机平均分为6组：对照组、电击组、去肾交感神经组、去肾交感神经＋电击组、Tempol＋电击组、去肾交感神经＋Tempol＋电击组，对大鼠进行周期为14天的慢性足底电击，每天上、下午各给予一次足底电刺激，每次2 h，电流强度为2~4 mA，电压输出为75 V，脉冲间隔5~30 s，波宽50~100 ms。行肾交感神经去除术以去除大鼠双侧肾交感神经（术后休养一周）。抗氧化剂Tempol于每日电击前1 h腹腔注射。于电击第0、3、7、10、14天测量大鼠的血压，14天后经腹主动脉取血并经离心以收集血浆，测定血浆中的各项氧化应激指标、肾素和血管紧张素II浓度。结果显示：与对照组相比，电击组大鼠血压从第7天开始出现显著性升高，去肾交感神经及Tempol处理均抑制了电击引起的血压升高。在氧化应激指标中，电击组大鼠血浆中的硫代巴比妥酸反应物（thiobarbituric acid reactive substance, TBARS）水平显著高于对照组，而去肾交感神经＋电击组及Tempol＋电击组与电击组相比均有显著性降低；电击组、去肾交感神经＋电击组及Tempol＋电击组血浆中的谷胱甘肽过氧化物酶（gluta-thione peroxidase, GSH-Px）浓度显著低于对照组；电击组大鼠血浆中的肾素和血管经张素II浓度显著高于对照组，而去肾交感神经及Tempol处理后肾素和血管经张素II浓度均显著低于电击组。以上结果提示：肾交感神经在慢性足底电击诱导的高血压的发生过程中起着重要作用；肾交感神经可直接或间接影响肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone sys-tem, RAAS）的活动和氧化应激反应，从而使大鼠血压长期保持在高水平状态，最终形成高血压。

^(60)Co γ射线照射正常人淋巴母细胞诱导CDKN1A基因mRNA表达水平的变化

目的探讨不同剂量60Coγ射线在不同培养时间后对人淋巴母细胞AHH-1细胞CDKN1A基因mRNA表达的影响。方法用不同剂量(0、0.2、1、3、5、10Gy)的60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞AHH-1细胞,在不同维持存活培养时间(0、4、24、48、72、96 h)内收集细胞,抽提总RNA,用实时PCR方法检测细胞中CDKN1A基因mRNA表达水平,观察其随辐照剂量和培养时间的变化。结果 AHH-1细胞中CDKN1A基因mRNA的表达水平随辐照剂量的加大而增加,在0～5 Gy之间具有一定剂量依赖性关系(P<0.05);辐照后培养24 h时基因表达达到峰值,24 h之后呈现下降趋势。结论不同剂量γ射线照射人AHH-1细胞会导致CDKN1A基因表达水平在培养24 h内随辐射剂量增加而升高,这种剂量依赖性关系可能适用于电离辐射剂量的估算。