自噬在神经胶质瘤放化疗中的作用及其分子调控机制研究进展

自噬是真核细胞中广泛存在的降解和再循环系统,近年研究发现,放疗和化疗不仅可引起神经胶质瘤细胞凋亡,还可以诱导自噬。细胞自噬可能导致细胞自噬死亡,也有可能导致自噬保护,显示双重效应,可见自噬与神经胶质瘤的发生、发展以及治疗密切相关。其分子调控机制可能与雷帕霉素靶蛋白,beclin 1,磷脂酰肌醇-3-激酶,第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶以及微管相关蛋白1轻链3等内容有关。

熊果酸诱导肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡及其机制

目的研究熊果酸(UA)对人肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡的影响及其作用机制。方法应用MTT法检测UA对SPC-A-1细胞增殖的作用。透射电镜观察细胞形态学变化。流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率。RT-PCR探讨UA对SPC-A-1细胞GDF15和p21基因表达的影响。结果UA抑制SPC-A-1细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察UA作用的SPC-A-1细胞,出现胞质大量空泡变性、细胞核凝集等细胞凋亡形态学改变。流式细胞术检测到凋亡峰。30、40、50μmol/L的UA作用SPC-A-1细胞48h后,其凋亡率分别为1.83%、18.6%、22.6%,细胞周期阻滞于S期,且呈浓度依赖性。RT-PCR证实UA能使SPC-A-1细胞GDF15、p21基因表达上调。结论UA对SPC-A-1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与上调GDF15和p21基因表达相关。

壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响

目的:观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和治疗的应用。方法:以浓度为50,100和200 mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2)和β3GalT7的表达水平。结果:肝癌细胞株中pp-GalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显;肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达,加入不同浓度的壳聚糖之后,ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制,且随着壳聚糖浓度的增加,抑制作用越明显。结论:肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同,壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达,从而抑制了糖基化作用,对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。

小鼠IL-1α多克隆抗体的制备及应用

目的:构建小鼠白细胞介素-1α原核表达载体,表达并纯化IL-1α蛋白,制备兔抗鼠IL-1α多克隆抗体,并对抗体特性进行初步的鉴定。方法:利用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠脾脏cDNA中扩增出IL-1α的全长基因,酶切后连接至pET32a(+)原核表达载体,重组载体测序正确后转化至BL21(DE3)大肠杆菌。利用蛋白质原核表达自动诱导方案成功表达重组蛋白。重组蛋白经电洗脱纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得了抗小鼠IL-1α的多克隆抗体,ELISA检测抗体效价。Western blot和流式细胞术(FCM)检测抗血清的特异性。结果:成功构建了重组表达载体pET32a(+)-IL-1α,表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可达1∶25 600。Western blot和FCM分析该抗体能特异性结合IL-1α。结论:利用重组的IL-1α蛋白成功制备了高效价、高特异性的兔抗IL-1α抗体,为进一步研究IL-1α的生物学功能奠定了基础。

吡咯喹啉醌对γ射线照射后AGS细胞抗氧化力的影响

目的:探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)对60Coγ射线照射细胞清除自由基能力。方法:培养AGS细胞至对数期,实验分为6组:正常培养未照射组、单纯照射组、PQQ培养12 h未照射组、PQQ培养4 h未照射组、PQQ培养12 h后照射组、PQQ培养4 h后照射组。60Coγ照射,剂量8Gy。照射后6,12,24 h测定细胞总抗氧化力(T-AOC),SOD,MDA含量。结果:与正常未照组比较,照射后6,12,24 h单纯照射组SOD,T-AOC显著降低(P<0.05),MDA显著升高(P<0.01);与单纯照射组比较:PQQ培养的照射组SOD,T-AOC显著升高(P<0.01),除照射后6 h外MDA显著降低(P<0.05)。结论:PQQ可通过增强细胞抗氧化能力,降低氧化水平,从而对辐射细胞起保护作用。

β3Gn-T8对胃癌AGS细胞增殖能力的影响

目的:研究β1,3-N-乙酰葡萄糖胺转移酶8(β3Gn-T8)对胃癌细胞及胃癌移植瘤生物学行为的影响。方法:将β3Gn-T8正义表达载体pEGFP-C1-β3Gn-T8转染人胃腺癌AGS细胞,通过MTT法和活细胞计数检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。建立AGS细胞皮下移植瘤模型,检测移植瘤的生长情况。结果:转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的AGS细胞活力明显增加(P<0.05),但是凋亡率无明显变化。转染pEGFP-C1-β3Gn-T8的移植瘤生长速度及最终体积均较对照组明显增加(P<0.05)。结论:β3Gn-T8可以促进胃癌AGS细胞的活力,明显促进AGS细胞移植瘤的生长。