ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响

目的探讨上调可诱导共刺激分子(ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠CD28/CD86的表达及Th1/Th2极化的影响。方法建立ICOS转基因(ICOS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术分析感染前(0周)和感染后(4～20周)小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上CD28与脾CD19+B淋巴细胞上CD86的表达水平。应用免疫组化法检测同期小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞上CD28、CD86表达水平变化。取同期小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72 h后,采用ELISA法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-13)细胞因子表达水平。采集同期小鼠的血清,应用ELISA法检测血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果ICOS-Tg小鼠脾CD4+T细胞上CD28和脾CD19+B细胞上CD86的水平与同期野生型FVB/NJ小鼠相比明显升高,且分别在感染4周后(50.57±7.54 vs 40.38±5.43,P<0.05)及在感染12周后(76.46±10.55 vs 65.10±10.17,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿的CD28、CD86表达亦高于野生型FVB/NJ小鼠的水平,且分别在感染7周后(0.485±0.094 vs 0.357±0.078,P<0.05)及感染12周后(0.649±0.072 vs 0.537±0.064,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13)水平从感染7周后比野生型FVB/NJ小鼠显著升高(皆P<0.05);ICOS-Tg小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著高于野生型FVB/NJ小鼠的水平(P<0.05、0.01、0.001不等);ICOS-Tg小鼠Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦高于野生型小鼠,分别在感染7、12、16、20周后(P<0.05、0.001)及12、16周后(皆P<0.05)具有显著性差异。在整个病程中,ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型FVB/NJ小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠CD28、CD86表达及其Th2免疫应答显著上调,并伴随肝虫卵肉芽肿病变增强,表明ICOS信号对CD28-CD86信号通路具有一定的调控作用,且在介导Th2极化及肝虫卵肉芽肿的发生、发展中发挥重要作用。

He—Ne激光联合甲苯胺蓝O对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌杀菌作用的体外研究

目的研究光动力疗法（PDT）对体外培养金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及其生物膜的杀菌作用，并初步探讨PDT的作用机制。方法采用甲苯胺蓝O（TBO）为光敏剂，He-Ne激光为照射光源，通过菌落计数来研究PDT对体外培养细菌的杀菌作用与TBO浓度的关系，及PDT对生物膜中细菌的杀菌作用；采用荧光分光光度法测定细菌对TBO的吸收来初步探讨PDT的作用机制。结果当激光照射剂量固定时，PDT对体外培养细菌的杀伤作用随光敏剂浓度的增加而增加，采用优化的光动力反应条件，可使PDT对两种实验菌的杀菌率达到90％以上，且尽管大肠埃希菌对TBO的吸收多于金黄色葡萄球菌，但PDT对金黄色葡萄球菌杀菌作用强于大肠埃希菌。PDT对两种试验菌成熟和未成熟的生物膜中细菌的杀菌率作用差异不大，为20％-30％。结论He—Ne激光联合TBO对体外培养细菌具有较强的杀菌作用，对生物膜中的细菌有一定的杀菌作用，且金黄色葡萄球菌对光动力作用更敏感，而这种光动力作用与细菌对光敏剂的吸收无关。