Ad-ING4抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长的体内实验研究

目的研究携带ING4基因的重组腺病毒(Ad-ING4)对人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用及其潜在的分子机制。方法将扩增的Ad-ING4感染SMMC-7721细胞,Western blot法检测Ad-ING4在SMMC-7721细胞中的转录。用SMMC-7721细胞建立裸鼠人肝癌移植瘤模型,予Ad-ING4(1×109pfu/ml)50μl对移植瘤瘤体注射治疗,观察肿瘤生长变化;3周后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;免疫组化法检测p21、COX-2、Fas、Bcl-2、Bax、Caspase-3、VEGF、CD34等因子的表达。结果 Ad-ING4在SMMC-7721细胞中成功表达;Ad-ING4对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,Ad-ING4组瘤体显著减小(P<0.01),抑瘤率达41.64%;免疫组化检测显示,Ad-ING4抑癌的分子机制可能与上调p21、Fas、Bax和Caspase-3的表达及下调COX-2、Bcl-2、VEGF和CD34的表达有关。结论 Ad-ING4能有效抑制SMMC-7721裸鼠人肝癌移植瘤的生长,其机制可能通过抑制肿瘤细胞生长、血管形成和激活细胞凋亡等多个途径共同发挥抑癌效应。

腺病毒介导的ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

1研究背景前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率都很高,目前首选的治疗方法仍然是手术治疗,但效果尚不理想。基因治疗作为肿瘤治疗的一种新模式,越来越受到人们的重视。

骨髓瘤细胞对骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响

目的检测骨髓瘤细胞对骨髓间充质干细胞成骨潜能的影响,探讨骨髓瘤细胞在骨髓瘤骨病发病机制中的作用。方法分离培养骨髓间充质干细胞,鉴定其生物学特性。采用midiMACs阳性免疫磁珠分选系统分离多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD138+细胞,与骨髓间充质干细胞行Transwell成骨共培养,两周后进行定时定量PCR检测间充质干细胞成骨指标骨特异性碱性磷酸酶(ALP)和Cbfa1的mRNA表达量,Von Kossa染色鉴定其钙质沉积程度改变。结果骨髓CD138+细胞可以抑制骨髓间充质干细胞ALP和Cbfa1的mRNA表达量,间充质干细胞钙质沉积也相应减少。结论骨髓瘤细胞可抑制骨髓间充质干细胞的成骨潜能,这种抑制作用可能参与了骨髓瘤骨病的发生。

Ad-ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的研究腺病毒介导的ING4基因(简称Ad-ING4)体外对人前列腺癌细胞PC-3的生长抑制作用。方法将携有绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒空载体Ad(简称Ad-GFP)及Ad-ING4分别感染PC-3细胞,RT-PCR检测ING4基因的转录;荧光显微镜观察Ad-ING4对PC-3细胞的细胞毒作用;用MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞仪(FCM)检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;Hoechst 33258核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR显示Ad-ING4能在PC-3细胞内转录;MTT结果提示Ad-ING4感染72 h和96 h后对细胞生长抑制率达39.29%和50.00%;FCM检测Ad-ING4感染细胞72 h后凋亡率为76.19%;核荧光染色结果进一步证明Ad-ING4对PC-3细胞可呈现典型的细胞凋亡核形态学改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制PC-3细胞的生长,并诱导细胞凋亡。

腺病毒介导的ING4基因对SMMC-7721人肝癌细胞生长的抑制效应

目的研究腺病毒介导的ING4(Ad-ING4)基因对体外SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法将腺病毒空载体Ad-GFP及重组腺病毒Ad-ING4分别感染SMMC-7721细胞,采用RT-PCR法及间接免疫荧光检测ING4基因的转录和表达;荧光显微镜观察Ad-ING4对SMMC-7721细胞的细胞毒作用;MTT比色法绘制细胞生长曲线,计算生长抑制率;流式细胞术(FCM)检测Ad-ING4对细胞凋亡的影响;DAPI核荧光染色检测细胞凋亡的核形态学变化。结果 RT-PCR及间接免疫荧光显示Ad-ING4能在SMMC-7721细胞内稳定表达;Ad-ING4感染72h和96h后对细胞的生长抑制率达33.82%和50.70%;FCM检测有明显的凋亡峰,凋亡率可达46.7%;DAPI染色结果显示SMMC-7721细胞胞核呈现核深染、固缩、断裂等细胞核凋亡的形态改变。结论 Ad-ING4能够明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导其凋亡。

腺病毒介导的E1A对PC-3人前列腺癌细胞生长的抑制效应

1研究背景前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率都很高,目前首选的治疗方法仍然是手术治疗,但效果尚不理想。当今,基因治疗作为肿瘤治疗的一种新模式,越来越受到人们的重视。

裂瘤型腺病毒Ad-E1A对小鼠腹水型肝癌的基因治疗及免疫功能影响

目的研究裂瘤型腺病毒Ad-E1A对BALB/c小鼠腹水型肝癌的基因治疗效果,并检测其对免疫功能的影响。方法将Ad-E1A进行多轮扩增获得高效价病毒子,采用RT-PCR法鉴定E1A基因在小鼠肝癌H22细胞内的转录。将BALB/c小鼠分为非致瘤组(正常组)和皮下注射H22细胞转移瘤的致瘤组,其中致瘤组又分为PBS组、Ad-E1A组、5-Fu组进行抗肿瘤试验,检测各组的抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数等。结果获得了达7×109pfu/ml的高滴度Ad-E1A。致瘤组的抗肿瘤试验中,Ad-E1A组与5-Fu组的抑瘤率分别为66.7%和68.8%,二者差异无统计学意义(P>0.05);Ad-E1A组和PBS组间的胸腺指数和脾脏指数变化无统计学意义,而5-Fu组显著降低(P<0.01和P<0.05);同时Ad-E1A组和PBS组间的白细胞总数变化不大,但5-Fu组显著降低(P<0.01),其中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞均明显降低(P<0.05)。结论 Ad-E1A可以抑制小鼠腹水型肝癌的生长,且对小鼠的免疫功能未见明显毒副作用。

腺病毒介导的PTEN与ING4基因的体外抗肿瘤作用

1研究背景肿瘤是当今社会影响人类健康的主要疾病之一。肿瘤基因治疗的原理是将目的基因转移导入靶细胞,使其获得特定的功能,继而执行或介导对肿瘤的杀伤和抑制作用,或保护正常细胞免受化学治疗与放射治疗的严重伤害。