重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN抑制肝癌细胞增殖

目的用构建好的重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN感染人肝癌SMMC-7721细胞,检验其对细胞的作用。方法用构建好的重组腺病毒Ad-ING4和Ad-PTEN感染QBI-293A细胞,对病毒进行扩增并测定其效价,荧光显微镜下观察感染效果。用扩增得到的Ad-ING4和Ad-PTEN感染SMMC-7721细胞,流式细胞术及MTT检测作用效果。结果空腺病毒组的凋亡率为3.4%±1.3%,Ad-ING4组和Ad-PTEN组分别为49.7%±4.8%和11.4%±3.2%,均显著高于空腺病毒组（P〈0.01）;Ad-ING4组和Ad-PTEN组的细胞增殖在48~96 h时较正常组明显下降（P〈0.05）。结论 Ad-ING4和Ad-PTEN对SMMC-7721细胞均有显著抑制作用,尤其是Ad-ING4。

AD-ING4对MCF-7/ADR乳腺癌细胞抑制及其对化疗药物增敏机制探讨

目的探讨重组腺病毒介导的人生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因对人乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞体外抑制和化疗增敏作用及相关分子机制。方法用携带ING4基因的重组腺病毒感染MCF-7/ADR细胞,本实验分为胎牛血清(PBS)阴性对照组、Ad-GFP空载体腺病毒组、Ad-ING4重组腺病毒组、3.0μg/mL ADR组和Ad-ING4+3.0μg/mL ADR组5组,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在MCF-7/ADR细胞中的表达情况;用CCK-8法检测各组MCF-7/ADR细胞生长情况;分别用流式细胞术(FCM)PI单染法和AnnexinⅤ-PE/7-AAD双荧光标记法检测各组细胞周期和细胞凋亡情况;并使用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组MCF-7/ADR细胞中Bax、Bcl-2和Survivin等相关基因的表达情况。结果腺病毒介导的ING4基因在MCF-7/ADR细胞中成功表达;Ad-ING4和ADR对MCF-7/ADR细胞生长均有明显的生长抑制和促凋亡作用,Ad-ING4使MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,F=129.294,P<0.05。Ad-ING4联合ADR对细胞的生长抑制和促凋亡作用更明显,培养至第4天,其生长抑制率可达(73.13±3.78)%,显著高于Ad-ING4组(19.29±1.53)%和ADR组(48.39±2.96)%,F=257.397,P<0.05;其凋亡率可达(26.48±3.13)%,显著高于Ad-ING4组(11.57±1.26)%和ADR组(17.21±2.34)%,F=30.253,P=0.001。蛋白质印迹法结果分析显示,导入ING4基因和ADR处理使Bax的表达增强,Bcl-2和Survivin的表达下降。与其他组相比较,Ad-ING4联合ADR使上述效应更加显著,差异有统计学意义,P值均<0.05。结论 Ad-ING4在体外可抑制MCF-7/ADR细胞的生长,并诱导其凋亡,对ADR的细胞毒作用具有协同增敏效应,其机制可能与ING4降低Bcl-2/Bax比值和抑制Survivin的表达有关。