Taq RecA蛋白的克隆表达及其在SNP基因分型中的应用

目的研究克隆表达的Taq RecA蛋白作为一种添加剂在单核苷酸多态性(SNP)基因型分析中的作用。方法构建pET-28a-Taq RecA表达质粒,在BL21(DE3)菌株中诱导表达,用热变性和饱和硫酸铵沉淀法去除部分杂蛋白,再经Ni-NTA亲和层析柱纯化分离Taq RecA蛋白;用PCR和等位基因特异性PCR(AS-PCR)方法研究其增强特异性和在SNP基因分型中提高分型准确性的作用。结果成功构建了表达质粒,表达纯化得到较高纯度蛋白,用于SNP基因分型中减少了非特异性产物,提高了分型准确性。结论 Taq RecA蛋白作为一种PCR中的添加剂,在ATP辅助作用下,适量添加能提高AS-PCR介导的SNP基因分型的准确度。