提高系统解剖学实验教学质量的点滴体会

介绍了我系系统解剖学实验教学实践,通过改善实验环境、实施教学手段多样化及重视实验考核等方面,可以提高实验教学质量。

男性生殖系畸形患儿肤纹的形态分析

目的探讨男性生殖系畸形患儿肤纹的形态特征,为该类疾病的遗传学研究提供资料。方法用油墨捺印法采集91例3岁以下男性生殖系畸形患儿的手部肤纹,通过与健康儿相对照,分析患儿肤纹的形态特征。结果患儿中桡箕出现率高于对照组,a～b嵴线数明显高于对照组,在掌褶类型、atd角、指纹总嵴线数(TFRC)方面与对照组无差异。结论男性生殖系畸形患者有独特的肤纹特征。

对提高人体解剖学教学趣味性的探讨

人体解剖学是一门重要的医学基础课,名词多,描述多,内容抽象枯燥,如何在教学中提高趣味性,以达到事半功倍的效果,是广大解剖学教育工作者长期研究的课题,笔者根据多年教学体会,总结了自己的一些做法,与同道们分享。

腹腔镜卵巢打孔和达英-35治疗多囊卵巢综合征后妊娠的效果评价

目的:探讨腹腔镜卵巢打孔术和达英-35治疗后对多囊卵巢综合征(PCOS)患者不孕的效果。方法:收集PCOS患者病例160例,分手术组和药物组,手术组80例,采取腹腔镜卵巢打孔术;药物组口服达英-35治疗。采用美国ACCESS化学发光免疫分析系统检测两组治疗前、后黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、雌激素(E2)、泌乳素(PRL)水平变化,观察1年内的妊娠率。结果:两组LH、T明显下降(P<0.05),手术组妊娠率90.1%,药物治疗组妊娠率26.25%。结论:采用腹腔镜卵巢打孔术对PCOS治疗效果高于药物组,是治疗PCOS较有效的方法。

小鼠大肠癌肝转移微创模型的建立与评价

目的:根据大肠癌肝转移模型的手术损伤程度筛选合适的建模方法。方法:以BALB/c小鼠为对象,随机分为3组,分别经直肠黏膜内、腹腔外脾内和腹腔内脾原位等方法注射0.2 mL鼠结肠癌细胞株CT26(浓度106个/mL),观察小鼠成瘤情况、肝转移率,并用酶联免疫吸附实验检测各组小鼠建模后5 d INF-γ的表达水平。结果:3种方法均能建立大肠癌肝转移模型,直肠黏膜内、腹腔外脾内和腹腔内脾原位注射法的肝转移率分别为37.5%、87.5%和87.5%;各组建模7 d后血清中INF-γ的水平分别为345.8、1 085.2和680.4 pg/mL,腹腔外脾内注射法INF-γ的表达水平较其它2组明显增高(P<0.05)。结论:脾内原位注射法是一种建立大肠癌肝转移最有效且损伤最小的一种方法,比较适合用来研究大肠癌肝转移的相关分子机制。

槲皮素对LRRK2突变转基因PD模型果蝇的治疗作用

目的研究槲皮素对富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)基因突变所致帕金森病(Parkinson s disease,PD)模型果蝇的作用及其机制。方法杂交获得的PD转基因模型果蝇Ddc-Gal4;UAS-LRRK2/G2019S能在多巴胺神经元表达G2019S突变LRRK2,使用浓度为1、10、100μmol/L的槲皮素加药标准玉米培养基饲养,PD模型组和空白对照组使用不加药培养基,观察槲皮素对PD模型果蝇寿命和运动能力的生物学效应;取果蝇脑进行TH免疫荧光染色观察多巴胺神经元存活情况;取果蝇脑组织行蛋白免疫印迹检测TH、GCLC、p-LRRK2、p-p38MAPK等蛋白的表达。结果与对照组相比,10μmol/L的槲皮素对果蝇寿命及改善果蝇运动能力效果最佳,果蝇在第6周时运动能力出现显著改变,PD模型果蝇脑内多巴胺神经元的丢失明显得到保护。和未用药对照组果蝇相比,槲皮素降低了PD转基因模型果蝇的磷酸化LRRK2的水平(P<0.05),显示了抑制PD模型果蝇LRRK2激酶活性的作用。此外,槲皮素还可以活化抗氧化信号通路和抑制p38MAPK信号通路。结论槲皮素能通过活化抗氧化信号通路和抑制LRRK2激酶活性,进一步调节MAPK信号转导通路,起到降低LRRK2突变在PD转基因模型果蝇的神经毒性,保护脑内多巴胺神经元的作用。

病毒载体介导β折叠阻断肽的表达及其对β淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用

目的:通过病毒载体转染体外培养的海马神经元,观察后者表达分泌性的β折叠阻断肽(β-sheet breaker peptide,BSB)的生物活性。方法:采用分子克隆技术构建编码神经营养素4(neurotrophin-4,NT4)信号肽-BSB融合基因的重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated vrius,r AAV)载体,AAV在包装细胞系293细胞中进行包装,蔗糖梯度离心法纯化病毒颗粒,斑点杂交法测定重组病毒滴度。MTT检测及电镜观察BSB的生物学效应。结果:成功构建p SSHG/NT4-BSB质粒载体,纯化后获得滴度为3.6×1012~1.8×1013/m L的病毒颗粒。通过病毒感染培养的神经元分泌表达的BSB有效地抑制了β-淀粉样蛋白(Aβ)的纤维化聚集,明显降低了Aβ在体外的神经元毒性。结论:采用AAV载体介导的BSB短肽的分泌表达在体外培养的海马神经元中显示了良好的生物活性。

EGCG对富亮氨酸重复激酶2活性的影响及其作用机制

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对富亮氨酸重复激酶2(leucine rich repeat kinase 2,LRRK2)活性的影响及其分子机制。方法:选用Ddc-LRRK2-G2019S品系果蝇,分为7组,对照组用标准玉米培养基饲养,各实验组果蝇分别用含LRRK2抑制剂GW5074、N-乙酰半胱氨酸(NAC)及浓度为0.1、1、10和100μmol/L的EGCG加药培养基饲养,检测并统计果蝇生命周期和运动能力,筛选出药物作用的最佳浓度与最适时间点;用蛋白质印迹法检测果蝇脑组织中p-LRRK2、p-p38 MAPK、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、p-ERK1/2和酪氨酸羟化酶(TH)等蛋白的表达。结果:与对照组相比,10μmol/L EGCG延长果蝇寿命、改善果蝇运动能力的效果最为突出,1μmol/L EGCG效果较好(P<0.05);各组果蝇第5周时行为学变化最显著(均P<0.05);与对照组相比,10μmol/L和1μmol/L EGCG组Nrf2、p-ERK1/2、TH表达均明显增加(均P<0.05),p-LRRK2、p-p38 MAPK表达明显降低(P<0.05)。结论:EGCG可能通过Keap1-Nrf2-ARE、MAPK等信号通路有效抑制LRRK2激酶活性。

肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2、p75^(NTR)在非小细胞肺癌组织的表达及其生物学意义

目的探讨肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2及p75NTR在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法,检测44例NSCLC组织、17例癌旁组织、17例非肿瘤组织中的CD133、ABCG2及p75NTR蛋白的表达并对结果进行分析。结果 (1)CD133、ABCG2及p75NTR蛋白在44例NSCLC组织中的阳性表达率分别为68.2%(30/44)、31.8%(14/44)、47.7%(21/44),在17例癌旁组织中分别为5.9%(1/17)、0(0/17)、11.8%(2/17),在17例非肿瘤组织中分别为47.1%(8/17)、11.8%(2/17)、17.6%(3/17),差异均有统计学意义(P<0.05);其中NSCLC组织中p75NTR蛋白的阳性表达与肿瘤的远处转移密切相关(P<0.05);(2)随肿瘤恶性度的增加,CD133蛋白的阳性表达率也明显增加,差异接近统计学意义(P=0.07)。结论 NSCLC组织中CD133、ABCG2及p75NTR的表达明显高于癌旁及非肿瘤组织,或许这三者与NSCLC恶性演进有关;肿瘤干细胞标记物CD133的表达与NSCLC的分化密切相关,CD133蛋白或许能成为NSCLC的肿瘤干细胞标记物。

抗坏血酸体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化

目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学染色,鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。结果抗坏血酸诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,诱导第3周时分化率达(85.2±1.8)%,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。诱导后细胞形态变成梭形,4周时细胞突起相互连接成条索状,且排列方向趋于一致;诱导后1周即开始出现GATA-4弱表达,第3周时表达最强;诱导后2周,细胞内开始表达cTnT,3周强阳性表达,4周表达明显增强。结论抗坏血酸能够促进hEGC向心肌细胞分化,可用以建立体外诱导hEGC分化为心肌细胞的方法 。

人胚胎生殖干细胞移植及心肌再生

目的探讨直接注射移植人胚胎生殖(EG)细胞对大鼠心肌梗死的影响。方法40只SD大鼠经缝扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死(AMI)模型,分干细胞移植组和对照组。取5～10周人胚胎生殖腺嵴,组织块体外培养,生物学鉴定证实为人EG细胞,将其直接注入大鼠急性心肌梗死区边缘。移植后1 d,1、2、4周处死大鼠,采用免疫组化法观察心肌形成转录因子Nkx 2.5在移植细胞的表达。结果移植组鼠抗人细胞核抗体MAB1281检测阳性,心肌形成转录因子Nkx2.5在移植细胞阳性表达。结论人EG细胞直接注入移植大鼠心肌梗死处,细胞能存活并呈现向心肌细胞分化的表型。

人脑胶质瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因表达研究

目的研究ATM、ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生的关系。方法采用SYBR^TMGreen实时定量PCR技术检测35例人原发脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中的ATM、ATR、Chk1和Chk2的表达水平。结果ART、Chk1和Chk2基因在各级脑胶质瘤中表达较正常脑组织升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。其中，ATR和Chk2基因表达在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤组织之间差异均无统计学意义（P〉0．05），而Chk1在Ⅳ级胶质瘤中的表达较Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。ATM基因表达量在正常脑组织和各级脑胶质瘤中差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中表达上调，说明这些基因可能与人脑胶质瘤的发生有关。其中，Chk1表达与肿瘤恶性程度有关，可作为判别胶质瘤病理级别的辅助指标。

肌萎缩性脊髓侧索硬化症相关蛋白SOD1的氨基酸突变对其聚集的影响

目的探讨肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)发病过程中超氧化物歧化酶1(SOD1)氨基酸突变对其聚集的影响。方法收集全部已知SOD1氨基酸错义突变106个,运用AGGRESCAN、PASTA、TANGO3种生物信息学方法和工具,预测错义突变对蛋白质聚集倾向的作用。结果3种生物信息学工具预测结果基本一致,共有39个对蛋白质聚集有促进作用的突变,占所有突变的37%。结论氨基酸突变导致蛋白质聚集并非是导致ALS发病的唯一途径,ALS发病机制是一个多因素的复杂过程。