人体解剖学实验室新型空气净化系统与传统空气处理系统的比较

长期以来,甲醛导致的空气污染严重影响人体解剖学实验室的空气质量,对上课师生的身心健康造成严重威胁。因为设计理念、施工技术、建设材料等原因,传统空气处理系统对甲醛的清除效果大多不太理想,因此环保改造势在必行。现以苏州大学医学部人体解剖实验室环保改造实践为例,将目前比较先进的新型空气净化系统与传统空气处理系统进行比较,旨在为人体解剖学实验室的建设与发展提供意见和建议。

复合型AD大鼠模型脑组织、血清及牙周组织中部分炎症因子的表达

目的初步探讨β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1—42）及D-半乳糖（D—gal）联合构建的复合型阿尔茨海默病（AD）模型中枢神经、血清及牙周组织的炎症因子的表达。方法采用24只2月龄雄性SD大鼠，共分2组，腹腔注射及侧脑室注射生理盐水的对照组，腹腔注射D—gal联合侧脑室注射A13—42建立的复合型AD模型组。Moms水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力，HE染色观察神经元数量和形态变化，ELISA方法检测脑组织各部分（皮质、海马）、血清及牙周组织中炎症因子（CRP，IL-1，IL-6，TNF-α。结果与对照组相比，复合型AD模型组大鼠海马、皮质中神经元形态皱缩，数量减少；CRP，IL-1，IL-6，TNF-α表达水平升高，血清和牙周组织中的CRP，IL-1，IL-6，TNF-α表达水平也升高〈0．01）。结论建立复合型AD模型，可较全面地模拟中枢神经炎症；牙周炎症可能参与了AD的发病进程。

β淀粉样蛋白1～42与D-半乳糖联合作用建立复合阿尔茨海默病样模型

目的探讨β淀粉样蛋白1～42(Aβ1-42)及D-半乳糖(D-gal)联合应用构建复合阿尔茨海默病(AD)样模型的可行性。方法采用44只2月龄雄性SD大鼠,共分4组,即腹腔及侧脑室注射生理盐水的假手术组,腹腔注射D-gal或侧脑室注射Aβ1-42分别建立的D-gal组和Aβ1-42组,腹腔注射D-gal联合侧脑室注射Aβ1-42建立的复合AD模型组。Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,尼氏染色观察神经元数量和形态变化,生物化学方法检测血浆及脑组织匀浆中总抗氧化能力(T-AOC),免疫组织化学方法检测晚期糖基化终产物受体(AGER)在脑组织中的表达。结果与假手术组、Aβ1-42组、D-gal组相比,复合模型组大鼠水迷宫实验的潜伏期延长,认知记忆能力下降;海马和大脑皮质中神经元数量减少,可见胞体缩小、胞膜皱缩、胞核固缩浓染的细胞;血浆和脑组织匀浆中T-AOC下降;大脑皮质、海马、小脑皮质和小脑核AGER阳性表达细胞增多,呈棕褐色深染。结论在应用D-gal建立记忆缺失模型的基础上,联合注射Aβ1-42可建立复合AD样模型,较全面地模拟AD行为学、组织学及生物化学特征。

大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。

不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响

目的探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑmRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达。结果体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高。血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达。结论血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用。β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义。

脂质体介导TGF-β1 shRNA转染的方法

目的探讨脂质体介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)在人肿瘤细胞株的转入效率,为研究TGF-β1信号转导在肿瘤微环境中的作用机制提供方法依据。方法化学合成TGF-β1小干扰RNA(siRNA),与脂质体转染介质混合制备转染复合物(Lip-shRNA),处理细胞24h后用流式细胞术(FCM)及人工计数法测定RD细胞的转入率;免疫荧光技术检测细胞TGF-β1蛋白表达水平。结果荧光显微镜观察硫代磷酸化修饰的寡核苷酸转入4h后,shRNA主要定位在细胞浆,8h后细胞核中有较多的shRNA;FCM测得转入细胞转入率与Lip-shRNA复合物呈剂量依赖关系,人工测得shRNA的转入率与转入复合物在低剂量呈剂量依赖关系,但在高剂量时增高不明显。转入6d后各组细胞TGF-β1蛋白表达量较转入3d时明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂质体介导的TGF-β1shRNA在常见肿瘤细胞株中的转入效率与寡核苷酸的稳定性、Lip-shRNA复合物剂量、转入时间密切相关,该转染技术可以作为RNA干扰手段研究TGF-β1信号转导的病理学机制。

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖和骨架蛋白表达的影响

目的：研究去甲。肾上腺素（NE）对血管平滑肌细胞（VSMC）骨架蛋白表达与增殖之间的关系，探讨神经因素对VSMC的调控作用。方法：体外培养大鼠主动脉VSMC，用BrdU标记增殖的细胞；免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白SM α—actin、β-tubulin和desmin的表达。结果：血清培养对VSMC有明显促增殖作用，而血清饥饿则能可逆性抑制VSMC增殖；NE能明显促VSMC增殖和下调sM22α的表达；随血清培养SMα-actin表达减少，血清饥饿培养可使SMα—actin表达可逆性上调；β-tubulin和desmin随血清培养其表达减少更明显，第6代基本不表达，而血清饥饿也不能上调其表达，NE对SMα-ac—tin、β-tubulin和desmin的表达有下调作用。结论：NE可促进VSMC增殖和下调SMα-actin、β-tubulin和Desmin骨架蛋白的表达作用。

CT辅助导航经皮骶髂螺钉内固定路径

目的:探讨CT辅助导航经皮骶髂螺钉内固定术的定位和路径。方法:60个成年健康志愿者行S1～3多层螺旋CT扫描,由计算机重构图像后测量通过椎弓根狭窄处中心点与正中矢状面之间的角度、椎弓根高度和宽度等参数,根据这些数据确定体表进钉点、进钉角度和螺钉长度。结果:S1进针点距离后正中线(91.03±10.62)mm,同侧髂嵴后部(41.16±8.80)mm,位于通过髂后上棘连线的骶骨层面头侧(11.29±5.87)mm,进钉方向与水平面夹角(30.76±5.34)°,矢状面(48.76±9.43)°,最佳长度(84.59±5.29)mm。S2体表进针点距离后正中线(127.82±15.63)mm,同侧髂嵴后部(59.34±9.03)mm,位于通过髂后上棘连线的骶骨层面尾侧(15.35±5.50)mm,进钉方向与水平面夹角(30.76±5.34)°,矢状面(61.15±8.38)°,最佳长度(64.04±6.65)mm。仰卧位和俯卧位骶骨倾斜度差别无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)经多层螺旋CT扫描图像分析确立的体表进钉点、进钉角度和螺钉长度可直接引导经皮骶髂螺钉内固定术;(2)分析确立的由CT扫描导航经皮骶髂螺钉内固定手术定位和路径为临床骶髂关节修复手术提供了一种快速、准确、安全的方法。

硫化氢对蛛网膜下腔出血大鼠额顶叶脑区神经损伤的保护作用

目的探讨外源性硫化氢对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的保护作用及可能机制。方法30只清洁级SD大鼠随机分成3组:对照组、SAH模型组、硫化氢作用组,每组各10只。后两组大鼠应用大脑中动脉穿刺法制作SAH模型,硫化氢组于模型制作成功后立即腹腔注射100mg/kg硫氢化钠。各组大鼠24h后进行神经功能评分,取额顶叶脑组织,用免疫荧光和Western blotting等方法检测额顶叶脑区神经细胞GFAP、S-100b、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Caspase-3、c-Fos、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果硫化氢组与SAH组相比神经功能评分有明显改善(P<0.01)。硫化氢组神经评分得3分以上的只有2只动物,而SAH组有8只。免疫荧光结果显示,SAH组GFAP、S-100b蛋白表达较对照组明显增高(P<0.05);硫化氢作用后两者表达较SAH组明显下降(P<0.05)。SAH组Bcl-2、Caspase-3均有表达,硫化氢作用后Bcl-2表达明显增加,而Caspase-3则明显下降(P<0.05)。Western blotting结果进一步显示,SAH组c-Fos、MMP-9表达较对照组均明显增高(P<0.05);硫化氢作用后两者表达则明显下降(P<0.05)。结论硫化氢对SAH后脑损伤有明显保护作用,其机制可能与改善胶质细胞的功能及与凋亡机制有关。

miRNA-411对乳癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-411(miRNA-411)对人乳癌细胞株MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR方法检测高转移性乳癌细胞MDA-MB-231与低转移性乳癌细胞MCF-7中miRNA-411的表达。采用LipofectamineTM2000将miRNA-411成熟子(Mimic)转染至MDA-MB-231细胞中,通过采用实时定量PCR方法检测miRNA-411 Mimic的转染效率,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫蛋白印迹法检测E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,MTT实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力。结果 miRNA-411在MDA-MB-231细胞中的表达水平显著低于MCF-7细胞(t=7.45,P<0.01)。miRNA-411Mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞后,其迁移和侵袭能力均受到明显的抑制(t=7.24、6.62,P<0.01),而且经转染的细胞E-cadherin表达升高,而Vimentin表达下降。然而,miRNA-411Mimic对MDA-MB-231细胞增殖能力无明显影响(P>0.05)。结论 miRNA-411在高转移性乳癌细胞中低表达,转染miRNA-411 Mimic后乳癌细胞MDAMB-231迁移和侵袭能力明显减弱,其迁移和侵袭能力的下降并非通过降低MDA-MB-231细胞的增殖能力所致,而是可能通过逆转MDA-MB-231细胞的上皮-间质转化过程实现的。

交感神经系统内一氧化氮合酶对血管平滑肌增殖的影响

目的探讨交感神经系统中的一氧化氮合酶(NOS)对血管平滑肌增殖的影响及调控。方法用三氯化铁(FeCl3)损伤颈总动脉建立大鼠平滑肌增殖模型,实验分为假手术组、术后存活1d组、5d组,在5d组中加设注射抑制剂N-硝基-L精氨酸(LNNA)组,每组6只大鼠,采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学染色和荧光金(FG)逆向追踪双标,观察颈交感神经节和脊髓中间外侧核神经细胞一氧化氮合酶的变化;苏木素-伊红(HE)染色观察血管平滑肌增殖变化。结果血管损伤后1d、5d组的颈交感神经节中有较多NADPH-d染色阳性细胞表达,尤其5d组更明显;手术侧的T1～T3脊髓侧角NADPH-d阳性细胞数也增多,而抑制剂组的NADPH-d阳性细胞数明显减少;HE染色可见血管损伤后有平滑肌增殖,而抑制剂组增殖更明显。结论损伤颈总动脉后颈交感神经节和T1～T3脊髓侧角内的NOS活性增强,可能参与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控。

血管一氧化氮神经调控颈总动脉血管平滑肌增殖

目的：探讨血管交感神经的NO神经对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：用FeCl3诱导大鼠颈总动脉平滑肌增殖模型，实验分为假手术组，术后存活1d组、5d组，切除交感神经组和用抑制剂N-硝基-L精氨酸（LNNA）组，每组6只动物，采用荧光金（FG）逆向追踪和免疫组织化学显色标记技术，证实颈血管NO通路。H-E染色和免疫印迹检测血管平滑肌增殖变化。结果：通过FG示踪表明颈总动脉主要由颈上神经节支配，颈中、下神经节也有少量支配，NOS免疫组织化学标记证实交感神经中的NO神经支配颈血管，H-E染色可见血管损伤后有平滑肌增殖，抑制剂组和切除交感神经组增殖更明显；免疫印迹结果也显示5d组与假手术组相比细胞增殖核抗原（PCNA）表达明显上调，而LNNA组和神经切除组PCNA上调更明显。结论：支配颈总动脉的交感神经含N0神经，NO神经参与了VSMC增殖的调控。

TGF-β_1介导NF-κB信号通路抑制横纹肌肉瘤的肌分化

目的:探讨TGF-β1介导NF-κB信号通路抑制横纹肌肉瘤肌分化的分子机制。方法:将构建的TGF-β1siRNA质粒表达系统转染横纹肌肉瘤RD细胞株,通过免疫荧光染色法检测Caspase-3的表达;TUNEL试剂盒检测RD细胞的凋亡;透射电镜检测RD细胞的分化情况;细胞免疫荧光法检测外源性TGF-β1对RD细胞中NF-κB家族成员p65、p50、p52和Rel B表达水平的影响;免疫组化S-P法分别检测横纹肌肉瘤石蜡组织中NF-κB家族成员的表达水平。结果:与对照组比较,TGF-β1沉默RD细胞中Caspase3的表达和TUNEL法检测的阳性细胞数量明显增加(P<0.05);电镜结果显示肌丝结构明显增加;在外源性TGF-β1(2 ng/m L)作用6 h后,RD中p65、p50的阳性率和阳性强度均明显高于对照组(P<0.05);p65、p50的表达率在TGF-β1高表达横纹肌肉瘤石蜡组织中明显高于TGF-β1低表达组(P<0.05)。结论:横纹肌肉瘤的分化抑制可能与TGF-β1介导的NF-κB家族成员p65、p50上调有关。

大鼠大脑置管方法的改良及其在PD模型制作中的应用

目的：探索改良大鼠大脑置管给药方法,并应用于帕金森氏病（PD）大鼠模型以消除中枢神经即刻给药引起的应激反应和实现重复给药.方法：大鼠随机分成2组（墨水组,6-羟基多巴胺组）,自制套管,植入大鼠大脑,墨水组使用微量给药针通过套管注射蓝墨水以确认是否成功到达目的部位（侧脑室,纹状体部位）.6-羟基多巴胺组通过套管注射6-羟基多巴胺于大鼠纹状体制作PD大鼠模型.通过旋转行为学实验检测PD模型是否建立成功,Nissl染色观察PD模型神经元形态及数量的变化,采用免疫组织化学标记检测黑质及纹状体酪氨酸羟化酶（TH）的表达.结果：利用简单廉价材料制作大鼠大脑给药套管,蓝墨水可以通过套管到达目的部位,体积较大部位的成功率为100％;行为学实验、Nissl染色及TH免疫组织化学显色证明通过套管可以成功制作PD模型.结论：大鼠大脑置管的方法改良成功,便于在神经退化性疾病模型中应用.

复合型AD模型鼠中硫氧还蛋白及凋亡蛋白的研究

目的：初步探讨β淀粉样蛋白1～42（Aβ1～42）及D-半乳糖（D-gal）联合构建的复合型阿尔茨海默病（AD）模型，以及模型中硫氧还蛋白与凋亡相关蛋白的研究。方法采用44只2月龄雄性SD大鼠，共分4组，腹腔注射及侧脑室注射生理盐水的假手术组，腹腔注射D-gal及侧脑室注射Aβ1～42分别建立的D-gal组和Aβ1～42组，腹腔注射D-gal联合侧脑室注射Aβ1～42建立的复合AD模型组。免疫组织化学检测脑组织中Trx，细胞色素c（Cyto-c）及Caspase-9表达。结果与对照组相比，Aβ1～42组、D-gal组和复合模型组皮质、海马中Trx的表达下降，Cyto-c和Caspase-9的表达上升。与Aβ1～42组、D-gal组相比，复合模型组皮质、海马中Trx的表达下降；Cyto-c和Caspase-9的表达上升。结论在复合AD模型中神经细胞凋亡，Trx表达下降，而Cyto-c和Caspase-9表达上升。Trx参与神经细胞的凋亡过程。

肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织和60例乳腺良性肿瘤组织中CD133的表达,分析其与乳腺癌亚型及临床病理参数间的关系。结果109例乳腺癌组织中,CD133表达的阳性率为46.8%(51/109),60例乳腺良性肿瘤的阳性率为0.33%(2/60),两者差异具有高度统计学意义(P<0.01);109例乳腺癌组织中,CD133蛋白的表达随病理级别的增加而升高(P<0.05),随临床分期升高及肿瘤直径增大呈下降趋势(P>0.05);乳腺癌4种亚群中,Basal-like亚群中CD133蛋白的阳性率最高,为69.2%,显著高于其他亚群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论早期低分化或未分化癌更富于干细胞,可能与肿瘤细胞恶性演进有关;CD133蛋白的表达具有区分不同乳腺癌亚型作用以及在乳腺癌的预后预测具有重要作用。

大强度耐力训练对中枢神经系统的影响

目的了解大强度耐力训练对中枢神经系统(CNS)的影响,提出预防CNS损伤的观点。方法雄性SD大鼠16只,随机分成对照组和大强度耐力训练组。耐力训练6周,训练后取材,采用HE染色、TUNEL法细胞凋亡检测、免疫组化染色及图像分析方法,观察12个CNS部位。结果(1)大强度耐力训练后CNS凋亡细胞的类型主要为神经胶质细胞,长期大强度耐力训练后CNS各部位细胞凋亡百分率显著增加(P<0.01)。(2)大强度耐力训练后CNS各部位HSP70表达均显著增加(P<0.01),nNOS表达变化不明显(P>0.05),iNOS的表达均显著增加(P<0.05或<0.01)。结论大强度耐力训练对CNS有一定的损伤,运动训练后须考虑足够的恢复时间。