干预ERRα的表达对体外培养的多发性骨髓瘤细胞MM.1S的凋亡诱导作用

目的:探讨两种不同的干预ERRα基因的表达和活性策略对人多发性骨髓瘤细胞株MM.1S凋亡的影响。方法:第一种策略是设计并构建靶向人ERRα基因的sh RNA慢病毒载体,利用293T细胞包装慢病毒后感染骨髓瘤细胞株MM.1S,经嘌呤霉素筛选得到敲低ERRα的稳转细胞株。另一种策略是使用ERRα的特异性反向激动剂XCT790处理细胞。流式细胞术分析敲低ERRα对MM.1S细胞凋亡的影响,Western blot检测敲低ERRα后凋亡相关蛋白的表达情况。结果:成功构建敲低ERRα的sh RNA表达载体,获得ERRα敲低的稳转细胞株;靶向ERRα的sh RNA病毒感染和特异性反向激动剂均能显著下调ERRα在骨髓瘤细胞MM.1S中的表达水平;敲低ERRα能诱导MM.1S细胞发生显著凋亡并且使凋亡相关蛋白cleaved PARP表达水平升高;ERRα的特异性反向激动剂XCT790处理骨髓瘤细胞MM.1S与敲低ERRα导致的效应一致。结论:通过sh RNA靶向敲低ERRα或使用特异性反向激动剂XCT790抑制ERRα的表达均能诱导MM.1S细胞发生显著凋亡,提示ERRα对骨髓瘤细胞的生存有重要影响。

生物类实验室安全管理探索

21世纪以来,生物技术得到大力发展,在此过程中大量的生物类实验室建立起来。实验室安全是科研活动顺利进行的基本保障,但目前实验室存在的安全隐患多、易发生安全事故,实验室各类试剂与药品都会对环境产生污染,部分化学试剂易燃易爆。该文将从实验室的安全管理制度、人员的安全培训、试剂药品的保存与使用、仪器使用规范、实验室环境污染防治等方面进行探讨。

hnRNP U在急性髓系白血病中临床意义及致病机制研究

目的研究RNA结合蛋白核不均一核糖核蛋白U(hnRNP U)在急性髓系白血病(AML)中临床意义及致病机制。方法基于数据库(GEPIA)和本中心数据比较hnRNP U在AML患者及健康对照者中表达情况;通过Cbioportal数据库下载Beat AML数据集(158例), 按照hnRNP U表达水平分为高表达组(89例)和低表达组(69例)并对两组临床特征进行比较;选择hnRNP U高表达的Kasumi-1和MOLM-13细胞系, 敲低hnRNP U后通过CCK-8检测细胞增殖能力, 利用Annexin Ⅴ-APC/7-AAD抗体检测细胞凋亡情况, 通过定量分析DNA含量(PI染色)检测细胞周期变化及克隆形成实验检测细胞集落形成能力等方面研究hnRNP U对人AML细胞系生物学行为的影响;利用Western blot法研究敲低hnRNP U后对DDR(DNA Damage Response)通路蛋白cleaved-PARP、p-H2A.X表达的影响。结果①泛癌分析发现hnRNP U在AML中高表达, AML患者外周血单个核细胞中hnRNP U mRNA表达水平显著高于健康对照者(0.0315±0.0042对0.0195±0.0006, P<0.01);②hnRNP U高表达组中位发病年龄为56(2~87)岁, hnRNP U低表达组中位发病年龄为65(8~85)岁, hnRNP U高表达组较低表达组发病年龄更早(t=-2.681, P=0.007), 且合并FLT3突变比例更高(χ^(2)=4.069, P=0.044);③敲低hnRNP U后Kasumi-1、MOLM-13细胞增殖受抑, 细胞凋亡率增高, 集落形成能力减弱, 细胞周期阻滞在G2/M期, 与对照组比较, 差异均有统计学意义(P值均<0.05);④敲低hnRNP U可引起DDR通路上cleaved-PARP、p-H2A.X蛋白表达上调。结论 hnRNP U在AML中高表达, 敲低hnRNP U后可抑制AML的发生发展, 其可能是通过激活DDR通路发挥作用。