李斯特菌诱导宿主细胞骨架重排与磷脂酶D

无论是免疫细胞对病原体的主动吞噬,还是病原体诱导非吞噬细胞的被动吞噬,均是不同细胞膜受体介导的细胞肌动蛋白骨架重排过程,受到单体G蛋白和肌动蛋白骨架相关蛋白的精密调控。细胞内重要信号蛋白,磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D(PLD)的活性变化与细胞肌动蛋白骨架重排密切相关,其参与调节了由抗体受体(FcγR)及补体受体(CR3)介导的免疫细胞的主动吞噬,而细胞肌动蛋白骨架解聚蛋白cofilin被磷酸化后可与PLD结合并激活PLD,进而调节肌动蛋白骨架重排。另一方面,cofilin磷酸化状态严格调控李斯特菌感染细胞过程中的肌动蛋白骨架重排。因此,阐明PLD是否在李斯特菌感染细胞过程中被激活并参与调节肌动蛋白骨架重排,将有助于揭示PLD激活对感染发生的调控作用,对透彻理解细菌感染宿主细胞的分子机制具有重要意义。

病原真菌感染与TOLL样受体

TOLL样受体(TLR)是参与天然免疫的主要模式识别受体之一,与许多微生物病原体及其产物的病原相关分子模式PAMP结合后通过MyD88依赖性或非依赖性途径启动宿主胞内信号传导途径,引发一系列生物学效应。白色念珠菌表面的特征性糖磷脂甘露聚糖可被TLR2、TLR4识别,诱导前炎性细胞因子的释放及促进中性粒细胞的聚集等来介导宿主的抗真菌免疫反应。烟曲霉则可能利用表型转换(酵母样与菌丝态),通过不同TLRs逃避宿主天然免疫系统的识别。新型隐球菌的多糖荚膜成分葡糖醛氧化甘露聚糖GXM可与TLR2、TLR4、CD14结合,在单核细胞、巨噬细胞对GXM的内化、吞噬中起重要作用,而不是诱导细胞因子的分泌;酿酒酵母胞壁成分酵母多糖则可激活TLR2、TLR6异源二聚体。总之,TLR与真菌配体相互作用的具体机制及其活化后胞内信号传导调控机制的深入研究与分析,对临床真菌病的免疫调节及治疗具有重要意义。

Toll样受体在烟曲霉侵染宿主细胞过程中作用的研究进展

烟曲霉侵染宿主细胞时伴有明显的细胞肌动蛋白骨架重排,而重要模式识别受体PRRs(pattern recognition receptors)之一,Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)参与调节病原细菌诱导的宿主细胞肌动蛋白骨架重排,其中TLR2和TLR4两亚型可以识别烟曲霉的病原相关分子模式PAMP(pathogen-assosiated molecular patterns),并诱发炎症因子表达等一系列效应信号,在宿主细胞抗烟曲霉天然免疫中发挥重要作用,但在烟曲霉内化侵入过程中TLR能否特异性介导细胞肌动蛋白骨架重排尚不清楚。因此,研究揭示TLR激活在烟曲霉侵入宿主细胞的调控作用,对寻找可能的抗真菌药物作用靶点具有重要意义。

骨髓细胞来源的树突状细胞体外刺激T淋巴细胞增殖的研究

分离骨髓单核细胞 ,在一定的培养条件下将其诱导成树突状细胞 ,通过混合淋巴细胞反应检测这些树突状细胞的体外刺激T淋巴细胞增殖的能力。

细菌外膜泡与致病性的关系

多种革兰阴性菌在其对数生长期可产生外膜泡。它是外膜的最新合成部分,不含肽聚糖、内膜和细胞质成分。其主要化学成分是脂多糖,外膜泡的形成与脱落实质是活菌释放内毒素的一种方式。此外,它还能作为一些细菌毒素的载体。外膜泡具有蛋白水解酶活性,能增强细菌的粘附力,并赋予细菌抵抗宿主血清杀菌的能力。它还具有防御作用,细菌通过释放外膜泡可摆脱吸附的噬菌体。外膜泡的多种生物学活性使细菌的致病性大大增强,是一种重要的毒力因子。

结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学检测

目的构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32（culture filtrate protein32，CFP32）的重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化重组蛋白CFP32，探讨其对结核病的诊断价值。方法通过聚合酶链反应技术从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增出Rv0577基因，将其克隆到pMDl8一T载体后，再亚克隆到表达载体pET21a，在大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，经纯化及复性后，通过Western blot分析，并以酶联免疫吸附试验检测160例血清抗体，其中肺结核患者97例、非结核肺部疾病患者25例，正常对照38名。结果构建了CFP32重组质粒，并在大肠杆菌中进行了高效表达，表达蛋白经SDS—PAGE分析，在约相对分子质量30000处有表达条带，镍柱纯化后的重组蛋白占总蛋白的90％以上。Western blot证实重组蛋白可以与结核患者血清特异结合。并以此蛋白进行160份血清结核抗体检测，结果敏感度为63．9％（62／97），特异度为96．8％（2／63）。结论成功构建pET21a—CFP32表达载体，并在大肠杆菌中高效表达CFP32蛋白，对其血清抗体检测证明重组的CFP32蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一。