抗菌肽的分子生物学研究进展

抗菌肽是具有广谱杀菌、抑病毒、抑杀肿瘤细胞等作用的一类膜活性多肽,广泛存在于从细菌到哺乳动物的生物界。本文就抗菌肽在天然免疫中的地位、抗菌作用机制、抗肿瘤作用机制等研究进展进行综述。

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究

目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性。结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%。其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带。结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值。

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^+CD25^(+high)调节性T细胞对免疫状态的影响

目的探讨CD4+ CD25+high调节性T(Tr)细胞在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血的变化及其对免疫状态的影响。方法用流式细胞仪技术分析比较42例CHB患者及20例正常健康人外周血中CD4+CD25+highTr细胞,同时检测CD4+T细胞和CD8+T细胞。结果与健康对照组相比,CHB组CD4+CD25+highTr细胞百分率显著升高(P<0.05),而CD4+T细胞显著下降(P<0.05);CD8+T细胞虽有增加趋势,但无差异(P>0.05)。CHB组CD4+CD25+highTr细胞百分率与HBV DNA载量有一定的关系,但与血清ALT水平无相关(P>0.05)。结论CHB患者外周血CD4+CD25+highTr细胞升高可能是导致机体免疫功能下降的原因之一。

粉螨性哮喘发病机制研究进展

抗原暴露作为哮喘病因,是近几十年来许多学者争论的焦点,并提出全球粉螨性哮喘发病率增高归因于粉螨抗原暴露的增加。粉螨及其抗原暴露相关知识对干预粉螨性哮喘至关重要。该文就目前的研究进展做一综述,包括粉螨性哮喘的流行概况、粉螨性哮喘的发病机制及粉螨性哮喘的免疫治疗。

弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达

目的 在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表达 ,以SDS -PAGE和Westenblotting进行鉴定 ,用GST亲和层析柱纯化表达产物。 结果 1 在我们所比较的 336个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。 2 得到一分子量为 49kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 2 5 55 % ,通过Westenblotting证实 ,该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。 结论 1 弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致 ;2 在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白 ;3 该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别 。

居室内粉螨孳生及分布情况

目的研究居室粉螨孳生及分布情况。方法于2005年4—7月收集张家港市过敏性哮喘患者(40名)及同一居住区域内居住条件相似,无任何变应性疾病的健康者(40名)居室床面、地面、家具、空调隔尘网及空气中的灰尘样本各1份,用直接镜检法分离、鉴定粉螨。结果共收集样本400份,其粉螨孳生率为52.25%(209/400)。共检获粉螨2746只,隶属于7科15种。以麦食螨科的孳生率(46.25%,185/400)和相对丰度(54.26%,1490/2746)最高;其次是粉螨科(孳生率和相对丰度分别为34.5%,23.89%)及食甜螨科(孳生率和相对丰度分别为19.25%,18.14%)。健康者居室各部位粉螨孳生密度较高,与过敏性哮喘患者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论张家港市部分居室粉螨孳生情况较严重,健康者居室各部位粉螨孳生密度高于过敏性哮喘患者,螨过敏性哮喘患者发病可能主要取决于个体特异性。

复式PCR用于闽南疟疾监测的效果评价

目的 评价复式PCR在闽南疟疾监测中的应用效果。方法 采集流行区发热病人及疫点居民血样用复式PCR一次扩增同时检测恶性疟原虫 (P f)和间日疟原虫 (P .v)。结果 2 49例发热病人PCR测阳性率为 8 0 2 % ,敏感性为10 0 % ,特异性 99 5 6 %符合率 99 5 9% ,镜检阳性率为 7 6 3% ,抽查疫点居民 70 1人检测疟原虫 ,未发现阳性样本 ,复式PCR检测大批样本平均费用不高于传统镜检方法。结论 该复式PCR检测系统用于闽南现场疟疾监测具有敏感、特异、快速等特点 ,可用于分子流行病学调查。

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠表达动力学研究

目的 构建汉滩病毒DNA疫苗 ,考查小鼠鼻内接种DNA疫苗后的基因组织定位及表达动力学 ,为进一步研究汉滩病毒DNA疫苗粘膜免疫的疗效作前期准备。方法 采用PCR法从PJSA1175 S质粒扩增汉滩病毒的S基因片段后装入PcDNA3 1B(- )载体 ,并以此候选DNA疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组DNA和组织总RNA ,用PCR及RT PCR检测质粒的分布和表达动力学。结果 构建了汉滩病毒DNA疫苗PcDNA3 1B S1 3 。免疫接种该疫苗第 1天后在小鼠鼻咽、肺、肾、肝、脾、小肠等组织中均有质粒分布 ;第 1周内上述组织中均可检测到特异mRNA ,第 2周起小肠、肝及肾中特异mRNA消失。结论 成功构建了PcD NA3 1B S1 3 DNA疫苗 ,构建的疫苗滴鼻免疫后在小鼠体内得到广泛的分布及表达。

天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因的表达及产物抗菌活性测定

目的 研究天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因 [CA(1～ 8) -MA(1～ 12 ) ]抗菌肽的抗菌活性。方法 将天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体 pTYB12上 ,并在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1(DE3 )中进行表达 ;表达产物用几丁质树脂进行了亲和吸附 ,自切割后洗脱得到抗菌肽 ,进行透析以去除盐类物质 ,最后用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行活性检测。结果 天蚕素A—蛙皮肽杂合肽 [CA(1～ 8) -MA(1～ 12 ) ]对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性。结论 天蚕素A—蛙皮肽杂合肽具有抗菌活性 。

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠效果的实验

目的 观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法 用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应。结果 免疫小鼠血清IgG及粪便IgA明显增高 (P <0 0 1) ,且IgA增幅较大 ;实验组淋巴细胞增殖反应明显 ,刺激指数 (SI)显著增大 (P <0 0 5 ) ;免疫后CD+ 4 、CD+ 8T细胞均增加 (P <0 0 1) ,而CD+ 4 /CD+ 8T细胞比值无显著变化 (P >0 0 5 )。结论 汉滩病毒重组质粒滴鼻免疫能诱导机体产生了特异的系统免疫和较强的粘膜免疫 ,滴鼻的疫苗免疫途径有着潜在的应用价值。

红内期间日疟原虫浓集纯化及免疫反应性研究

目的:建立白细胞滤器(Plasmodipur)联合Percoll密度梯度离心浓集纯化红内期间日疟原虫(P.v)的方法。分析和比较皂素与冻融两种处理方法制备的P.v抗原与P.v感染者混合血清免疫反应性的差别。方法:P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,经60%Percoll浓集其中的感染红细胞(iRBC)。采用皂素法和冻融法从iRBC中释放疟原虫,经超声粉碎,所获P.v可溶性抗原和同样处理的正常红细胞(nRBC)成分经SDS-PAGE电泳分析其组分差别,并应用P.v感染者、正常对照混合血清与相应的抗原进行免疫印迹分析,确定具有免疫原性的抗原组分。结果:115例P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,每10个油镜视野中WBC残留≤5个99例(86.1%),经60%Percoll浓集的35例样本中,共有30例(85.7%)能提高iRBC比例至60%以上。SDS-PAGE电泳分析,皂素处理与冻融处理的P.v抗原分别显示出6条和2条P.v特异性蛋白条带。免疫印迹分析表明,P.v感染者混合血清能特异性地识别22、24.5、29、35、36 kDa皂素处理的P.v抗原,26、49、59、63、115、120 kDa冻融处理的P.v抗原。结论:血样中疟原虫皂素与冻融两种处理方法制备的P.v抗原与P.v感染者混合血清免疫反应性存在明显差异,其中皂素处理的22 kDa抗原组分具有较强的免疫原性,其作为P.v特异性诊断抗原的价值有待进一步研究。

云芝糖肽镇痛抗炎作用的实验研究

以健康成年小鼠建立内脏扭体模型和局部二甲苯致炎模型。探讨云芝糖肽(PSP)对小鼠的急性内脏性疼痛的镇痛作用,实验用PSP(1 g／kg)给小鼠连续4 d灌胃之后,用乙酸溶液对小鼠空腹注射致痛和二甲苯致小鼠耳肿,测定其痛阈及耳肿值。结果表明,PSP对急性(刺激腹腔、二甲苯致炎)炎症性疼痛有明显的镇痛抗炎作用。提示PSP对急性炎症性内脏疼痛有明显的镇痛抗炎作用。

丙型肝炎感染途径与肝损害程度的相关性

目的探讨丙型肝炎(丙肝)感染途径及其对肝脏病变程度的影响。方法应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术、酶联免疫吸附方法(ELISA)和自动生化速率法分别检测90例输血后丙肝患者(PTHC组)和33例献血查体发现的丙肝患者(DHC组)血清丙型肝炎病毒HCV-RNA、抗-HCV及ALT水平。结果PTHC组HCV-RNA阳性率和ALT异常率均显著高于DHC组(P均<0.0 l);HCV-RNA阳性患者中,PTHC组HCV-RNA水平均显著高于DHC组(P<0.01);ALT异常患者中,PTHC组ALT水平均显著高于DHC组(P<0.01)。HCV-RNA水平与ALT水平呈正相关(r=0.797,P<0.01)。结论丙肝患者肝损害程度与感染途径有关,输血后丙肝患者肝损害程度重于其他途径感染的丙肝患者,原因为输血后丙肝感染HCV量大。

居室粉螨抗原与螨过敏性哮喘相关性研究

目的:检测张家港市部分居室粉螨抗原及浓度,探讨其与螨过敏性哮喘发作的相关性。方法:收集过敏性哮喘患者及健康者居室床面、地面、家具、空调隔尘网及空气中的灰尘样本,用PCR法检测Der f1、Der f2、Der p1、Der p2阳性率,并用ELISA分别定量检测Der f1、Der p1及Der变应原含量。结果:共收集样本400份,过敏性哮喘患者与健康者居室Der f1、Der f2、Der p1、Der p2基因阳性率无显著性差异(P>0.05),但过敏性哮喘患者居室样本中这些变应原浓度>10μg/g者所占比例显著少于健康者(P<0.05)。对过敏性哮喘患者进行问卷调查结果显示,近期哮喘发作者Der f1、Der f2、Der p1、Der p2浓度>2μg/g所占比例明显高于近期哮喘未发作者(P<0.01)。结论:个体特异性是螨过敏性哮喘患者患病的重要因素,居室粉螨抗原浓度<2μg/g较安全。

血吸虫病诊断抗原的研究进展

血吸虫抗原在血吸虫病的免疫诊断、疫苗研究和致病机理方面有重要作用,按其来源可分虫体抗原、纯化抗原、重组抗原等。纯化抗原和重组抗原因敏感性高,特异性强,有望解决血吸虫病的诊断问题。本文就血吸虫病诊断抗原的国内外研究进展进行了综述。

人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克隆、表达及纯化

目的 从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素α亚基 (HCGα)cDNA ,构建表达载体并进行了表达、纯化 ,为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用作前期准备。方法 提取新鲜人绒毛膜组织总RNA ,利用RT -PCR技术扩增出HCGαcDNA ,克隆于表达载体PGEX4T - 1,酶切鉴定后测序 ,测序证实序列正确 ,并转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导表达融合蛋白GST -HCGα。超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化 ,沉淀包涵体经变性、透析复性等处理 ,用SDS -PAGE电泳、Western印迹分析产物。结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示RT -PCR扩增片段大小约 2 80bp ,同预计片段相符。SDS -PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有 36kd左右的一条明显新增条带 ,与预期分子量相符 ,Western印迹证实此结果。融合蛋白主要以包涵体形式存在。结论 成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGαcDNA ,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达 。

3种方法对日本血吸虫感染家兔的疗效评价

目的用聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和环卵沉淀试验(COPT)3种方法评价吡喹酮治疗日本血吸虫感染家兔的疗效。方法家兔感染日本血吸虫尾蚴后7周和8周,分别给予吡喹酮治疗,治疗前后每周采血1次,分别用3种方法检测感染家兔治疗前后的血清DNA、IgG和环卵沉淀率(COPR)水平。结果ELISA检测法在动物模型治疗6个月后,其血清抗体仍维持在一定水平;COPT检测法于治疗后5个半月在家兔血清中找不到阳性虫卵;PCR法在治疗后3个月的家兔血清中未扩增出DNA。结论PCR法的疗效考核价值优于常规ELISA法和COPT法。

汉坦病毒与肾综合征出血热

汉坦病毒在世界上分布广泛,肾综合征出血热是由汉坦病毒属的汉滩型、汉城型、Puumala型和Dobrave型病毒引起的流行性疾病,分别由携带有不同型病毒的鼠类感染人。临床症状分五个时期。本文主要对我国流行的汉坦病毒及其引发的肾综合征出血热做一综述。