人胚胎生殖细胞的传代培养

目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数。结果在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多。原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化。结论人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法。

SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达

目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.

转录因子Oct-4和端粒酶在人胚胎生殖细胞的表达

目的体外培养人胚胎生殖细胞（EGC），通过检测培养的细胞中转录因子Oct-4、端粒酶的表达，鉴定EGC。方法取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜，进行组织块体外培养，采用免疫细胞化学检测Oct-4、端粒酶表达。结果组织块体外培养得到的细胞，经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落，均阳性表达转录因子Oct-4、端粒酶。结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞（PGCs），为未分化的EGC。

LPS诱导的急性炎性肝损伤中HIF-1α的表达

目的观察急性炎性肝损伤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其可能机制。方法采用卡介苗(BCG)配合LPS建立小鼠急性炎性肝损伤模型;肝组织石蜡切片HE染色法观察肝脏炎症反应情况;免疫组化染色法检测HIF-1α和VEGF的表达;ELISA检测小鼠血清中TNF-α的水平。结果炎症组小鼠HIF-1α、VEGF和TNF-α的表达均显著增加(均P<0.01)。结论急性炎性肝损伤时高表达HIF-1α及其靶基因VEGF,炎症组织中VEGF表达水平的上调与HIF-1α表达的增加可能相关,而HIF-1α表达的增加可能与TNF-α的水平升高有关。

人胰腺癌裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究

目的 建立荷人胰腺癌裸小鼠模型 ,研究其生物学特性 ,观察 8988胰腺癌细胞株在移植前后的形态学变化。方法 将人胰腺癌细胞株 8988接种于裸鼠腋窝处皮下 ,每周测量肿瘤大小 ,第 42d处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查 ,放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养 ,HE染色。结果 肿瘤生长较快 ,成功率高 ,病理及电镜检查符合人胰腺癌细胞特征。肿瘤组织细胞及培养细胞形态学未见显著差异。结论 荷人胰腺癌细胞株 8988裸小鼠模型建立方法较简便 ,细胞形态无明显差异 。

野生型和突变型RASSF1A基因对人肝癌细胞生长的影响

目的 探讨野生型 /突变型RASSF1A基因的表达对人肝癌细胞株QGY 770 3在体内外生长的影响。方法 构建突变型RASSF1A基因的真核表达载体 ,通过脂质体介导的基因转染法将野生型 /突变型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染肝癌细胞株QGY 770 3 ,G418筛选稳定表达株 ,并以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Westernblot进行鉴定。通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验和裸鼠致瘤性试验对各稳定表达株的生物学行为进行检测。结果 成功建立稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的肝癌细胞株。以转染空载体的QGY 770 3细胞为对照 ,野生型RASSF1A基因的表达可明显抑制肝癌细胞在体外的生长 ,显著降低肝癌细胞在软琼脂中形成的克隆数目 (P <0 .0 1)和大小 ,显著减慢裸鼠皮下瘤的生长速度和重量 (P <0 .0 1)。突变型RASSF1A基因的表达对肝癌细胞的生长影响不大。结论 野生型RASSF1A的重表达有助于QGY 770 3恶性表型的逆转 ;野生型RASSF1A基因是一个肝癌相关的抑癌基因。