临床医学硕士生解剖学课程探讨

随着社会对诊疗技术向微创化、无痛化、透视化、窥探化、仪器化、微量化、分子化、程控化、微机化、机器人智能化等方向发展，各级医疗机构对医学人才的要求亦来越高，报考临床医学硕士生的高峰也随之出现。而对这些来自不同专业，有着不同要求的临床医药硕士生，如为他们开设同一内容的课程是不合宜的。……

远端蒂耳大神经营养血管筋膜皮瓣的应用解剖与临床应用

目的:探讨远端蒂耳大神经营养血管筋膜皮瓣修复口腔颌面部软组织缺损的临床应用。方法:在5例(10侧)灌注红色乳胶标本上解剖观察耳大神经营养血管筋膜皮瓣的血供。对4例颌面部肿瘤手术后的软组织缺损应用远端蒂耳大神经营养血管筋膜皮瓣修复,评价其临床效果。结果:4例皮瓣全部成活,其中1例远端约1/4的皮肤坏死,随访3个月至1年,外形满意、语言及咀嚼功能良好。结论:远端蒂耳大神经营养血管皮瓣血供可靠,可应用于口腔颌面部软组织缺损的修复。

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达

目的观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性。方法取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变。结果巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达。在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变。结论巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性。

内皮素-1对大鼠血管平滑肌表型转化和增殖的影响

目的:通过内皮素-1作用于大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)及对内皮素-1受体信号的阻断,探讨内皮素-1对VSMC表型转化和增殖的影响及机制。方法:取大鼠主动脉贴块培养VSMC,用内皮素-1及其受体阻断剂BQ123分别作用于一般培养的VSMC和血清饥饿培养的VSMC。用BrdU标记细胞增殖;RT-PCR检测高血压相关基因-1(HRG-1)和SM22α表达变化。结果:内皮素-1作用后VSMC增殖显著增多,HRG-1和SM22αmRNA在一般培养和饥饿培养的VSMC中表达均明显减少;而加入阻断剂BQ123后增殖细胞大大减少,HRG-1和SM22αmRNA表达明显上调。结论:内皮素-1有促进VSMC增殖作用并可使VSMC从收缩型向合成型转化,并且内皮素-1对VSMC的作用是不可逆的;受体信号途径是内皮素-1对VSMC表型转化和增殖作用的机制之一。

骨髓间充质干细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙植骨材料的体外研究

目的研究兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)在羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)植骨材料上的黏附增殖情况。方法抽取兔股骨骨髓,进行贴壁培养BMSCs。在成骨诱导液中诱导BMSCs,于7d用钙钴法检测碱性磷酸酶活性,10d进行茜素红矿化结节染色;在成脂诱导液中诱导BMSCs,于21d进行油红O染色。将BMSCs接种到HA/TCP植骨材料上,加入成骨诱导液,采用倒置显微镜、荧光显微镜及扫描电镜检测,并采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定HA/TCP植骨材料上BMSCs的增殖情况。结果BMSCs在成骨诱导液中7d碱性磷酸酶呈强阳性,10d矿化结节染色呈橘红色;在成脂诱导液中,21d油红O染色呈阳性。BMSCs在HA/TCP植骨材料上孔隙周围及孔隙内生长良好并大量增殖。MTT分析结果显示,HA/TCP对BMSCs的体外增殖无抑制作用。结论BMSCs与HA/TCP植骨材料有良好的生物相容性。

当归、阿魏酸钠对小鼠炎性肝损伤的抑制效应及其与ICAM-1和E-selectin表达的关系研究

目的探讨应用当归制剂及其单体成分阿魏酸钠对脂多糖诱导的肝组织炎症反应的影响及其分子机制。方法将50只ICR小鼠随机分为5组炎症+当归组、炎症+阿魏酸钠组、炎症+地塞米松组、炎症对照组及正常对照组,每组10只。采用脂多糖(LPS)配合卡介苗(BCG)注射法在各炎症用药组和炎症对照组小鼠体内建立炎性损伤模型,经腹腔分别给各炎症用药组小鼠注射当归制剂、阿魏酸钠、地塞米松,给炎症对照组注射等量生理盐水,采用常规组织病理学方法观察比较各组小鼠肝组织炎症反应情况,同时应用免疫组化法观察比较肝组织中粘附分子ICAM-1和E-selectin蛋白的表达。结果各炎症用药组小鼠肝脏的炎症反应明显弱于炎症对照组(P<001);各炎症用药组小鼠肝组织中粘附分子ICAM-1和E-selectin蛋白的表达明显低于炎症对照组(P<001)。结论当归、阿魏酸钠制剂均能显著抑制脂多糖诱导的肝组织炎症反应,其作用机制可能与抑制炎症组织中粘附分子ICAM-1和E-selectin蛋白的表达有关。

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制。方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22α和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达。结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下调,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R-)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调。而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达。结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用。其作用机制主要通过肾上腺素受体α1和β1来实现的。

降钙素基因相关肽对血管平滑肌表型转化和增殖的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响以及它们之间的关系。方法取大鼠主动脉先体外培养8d后再贴块培养(VSMCs);对照组直接用贴块法培养细胞。实验分为CGRP作用组和无CGRP作用组。用5-BrdU标记平滑肌细胞增殖变化;RT-PCR检测HRG-1和SM22α表达变化。结果血管经体外培养8d后再贴壁培养的平滑肌细胞可见大量棕黄色标记增殖的细胞核,HRG-1和SM22αmRNA表达明显减少;而CGRP作用组标记的血管平滑肌增殖细胞明显减少,HRG-1和SM22αmRNA表达明显上调。结论CGRP对VSMCs增殖有抑制作用并同时可使VSMCs从合成型向收缩型转化。

蛋白脂蛋白在两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达

目的:探讨蛋白脂蛋白(PLP)在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达。方法:用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测PLP在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达情况。结果:在O-2A谱系来源的成熟2型星形胶质细胞和少突胶质细胞中PLP抗体标记为阳性,而在T1A谱系来源的成熟1型星形胶质细胞中则未检测到PLP的表达,从而在蛋白质水平验证本室研究两型星形胶质细胞基因表达谱差异基因芯片结果中PLP mRNA在T2A中高表达,而在T1A中低表达的现象。结论:PLP等脂代谢相关基因可能在O-2A谱系发生和分化过程中起重要作用,O-2A谱系与神经髓鞘发生以及脑内脂质代谢内在机制密切相关。

流式细胞术检测眼部镰刀菌对两性霉素B和氟康唑的药物敏感性

目的探讨流式细胞术测定眼部镰刀菌对抗真菌药物敏感性的可行性。方法用流式细胞术药敏试验（FCST）和标准药敏试验（肉汤稀释法M38-A）法检测24株镰刀菌对两性霉素B（AMB）和氟康唑（FCZ）的敏感性,比较2种方法所得结果的一致性。结果FCST法检测AMB的最低抑菌质量浓度（MIC）为2~8μg/mL,FCZ的MIC除1株为32μg/mL外,其余均≥64μg/mL。2种检测方法的一致性在1个稀释度范围内为83.3%（AMB）和87.5%（FCZ）,在2个稀释度范围内为91.6%（AMB）及100%（FCZ）,差异均无统计学意义（P=0.568,0.257）。结论FCST法是一种快速、敏感、准确的药敏试验方法,可用于检测镰刀菌对抗真菌药物的敏感性。

丹参醇提取物对培养内皮细胞T-AOC、LPO、NO、SOD变化的影响

目的探讨丹参醇提取物对内皮细胞的抗氧化作用。方法以不同浓度的丹参醇提取物分别作用于培养的内皮细胞,收集上清液检测其总抗氧化能力(T-AOC)、脂质过氧化物(LPO)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化。结果丹参醇提取物对内皮细胞T-AOC、NO和SOD含量变化有上调作用;而对丙二醛(MDA)的变化则有下调作用(P<0.05)。结论丹参醇提取物对培养内皮细胞有提高抗氧化能力的作用,为丹参的临床应用积累了实验数据。

胸腰椎爆裂骨折损伤机制及手术治疗

胸腰椎爆裂骨折常伴有脊髓神经损伤,主要由瞬间脊髓神经受到暴力及复合骨折块突入椎管引起脊髓压迫所致。随着影像学、生物力学及解剖学研究的进展,近年对胸腰椎爆裂骨折的损伤机制和形态学表现有了更深入的认识,为临床治疗提供了很好的理论依据,手术治疗得到长足发展。该文就胸腰椎爆裂骨折损伤机制及手术治疗研究近况作一综述。

降钙素基因相关肽对内皮细胞细胞间黏附分子1、NOS 和组织金属蛋白酶抑制剂2表达的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对内皮细胞的保护作用机制。方法：用 CGRP 分别作用于培养的正常内皮细胞和经联胺诱导的内皮细胞后,收集细胞用免疫细胞化学和 RT-PCR 方法检测细胞间黏附分子1 (ICAM-1)、一氧化氮合酶(NOS)和组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达。结果：联胺诱导的内皮细胞可使 ICAM-1的表达增强,而使 NOS 和 TIMP-2的表达下降。当 CGRP 作用于正常内皮细胞和联胺诱导后的内皮细胞,对 ICAM-1的表达有明显的下调作用,对 NOS 和 TIMP-2的表达则有明显的上调作用。结论：CGRP 对内皮细胞的保护调节作用可通过下调 ICAM-1和上调 NOS 和 TIMP-2的表达来实现,提示 CGRP 在动脉粥样硬化防治方面可能发挥重要作用。

星形胶质细胞的基因表达谱差异

目的研究1型和2型星形胶质细胞的基因表达谱差异,为深入研究T1A和T2A生物学特性及功能方面的异同打下基础。方法以振荡法和差速贴壁纯化培养1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A),提取总RNA,分别以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP标记T1A和T2A的mRNA,进行基因表达谱芯片检测分析。结果基因芯片上检测点4096个,4次结果交集显示共有差异表达基因138条(60条在T1A中高表达,78条在T2A中高表达),其中生物学功能较为明确的差异表达基因为99条(42条在T1A中高表达,57条在T2A中高表达)。结论通过该研究获得了大鼠大脑T1A和T2A的基因表达谱,T1A和T2A之间存在99条生物学功能较为明确的差异表达基因。

增殖型血管平滑肌细胞模型的培养改良

以往使用的血管平滑肌细胞（VSMC）模型是直接用正常血管贴壁培养传代细胞，并认为传至第5代以后即为分泌型。但我们通过检测特异性表型表达基因SM22a发现，按以往传代培养的VSMC仍有表达。因此，有必要探讨一种在原有基础上更为可靠培养VSMC模型的方法。为此我们利用本实验室建立VSMC增殖器官模型的方法，用于改进以往VSMC的培养方法，并探讨其应用价值，为研究增殖性血管疾病提供一个更为理想的实验平台。

新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养

目的 在体外培养条件下获取纯度较高的O - 2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法 根据星形胶质细胞、O - 2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同 ,采用振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液 ,培养、分离纯化O - 2A祖细胞。结果 纯化的O - 2A祖细胞胞体呈椭圆形 ,具有典型的双极突起 ;经免疫细胞化学染色鉴定 ,细胞的纯度达 90 %。在有血清的情况下 ,O - 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞 ;在无血清的情况下 ,定向分化为少突胶质细胞。结论 通过振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O - 2A祖细胞具有双分化潜能。

小鼠海马组织中cAMP含量和AC活性的昼夜变化

目的 观察小鼠海马组织中cAMP含量和AC活性的昼夜变化。方法 采用放射免疫和酶学方法。结果 小鼠海马组织中cAMP含量和AC活性具有昼夜节律性 ,cAMP含量高峰在CT10和CT2 2 ,低谷在CT4和CT16。AC活性高峰在CT13和CT1,低谷在CT7和CT19。

川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用

目的观察川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元,培养基中加入1mmol/L的盐酸川芎嗪溶液共同孵育12h后,加入1mmol/L谷氨酸损伤海马神经元20min。采用MTT法检测细胞活性;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化;细胞免疫组化检测各组细胞表达AchE。结果川芎嗪可提高谷氨酸损伤后海马神经元的存活率,抑制因谷氨酸损伤引起的细胞内LDH的释放,可促进谷氨酸损伤细胞中AChE的表达。结论川芎嗪对谷氨酸诱导海马神经元损伤有保护作用。