新生大鼠大脑O-2A细胞系的分离纯化和双向分化培养

目的 在体外培养条件下获取纯度较高的O - 2A细胞系细胞并探索其分化规律。方法 根据星形胶质细胞、O - 2A祖细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同 ,采用振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液 ,培养、分离纯化O - 2A祖细胞。结果 纯化的O - 2A祖细胞胞体呈椭圆形 ,具有典型的双极突起 ;经免疫细胞化学染色鉴定 ,细胞的纯度达 90 %。在有血清的情况下 ,O - 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞 ;在无血清的情况下 ,定向分化为少突胶质细胞。结论 通过振荡法和差速贴壁法 ,结合 1型星形胶质细胞条件培养液分离纯化培养的O - 2A祖细胞具有双分化潜能。

脊髓半切损伤后脊髓与大脑部分核团c-fos蛋白表达的实验研究

目的 :探索脊髓半切损伤后 ,脊髓、下丘脑室旁核 (PVN)和视上核 (SON)的c -fos蛋白表达的规律。方法 :将 5 6只大鼠随机分为脊髓损伤组 2 4只、假手术组 2 4只和正常组 6只 ,损伤组行左侧半脊髓横断术 ,损伤后 1,6,12 ,2 4h取脊髓、PVN和SON行冰冻切片 ,免疫组化法标记c -fos阳性细胞。结果 :脊髓半切损伤后 ,各时间点损伤侧脊髓灰质中有明显的c -fos阳性表达。PVN和SON在损伤后各时间点均有c -fos表达阳性细胞的增加 ,与假手术组、正常组比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :脊髓损伤后脊髓、PVN和SON可产生明显反应 ,PVN和SON以不同的反应特点影响着神经递质的改变。

波形蛋白和S-100β在T1A系和T2A系细胞分化中的表达差异

目的:观察波形蛋白和S-100β在T1A和T2A系细胞分化中的表达差异。方法:根据T1A、O2A祖细胞的生长时间差异及细胞的黏附特性不同,采用振荡法和差速贴壁法,分别纯化T1A系细胞(T1A前体细胞和T1A)和T2A系细胞(O2A祖细胞、未成熟T2A和成熟T2A);免疫细胞化学法观察波形蛋白和S-100β在T1A系和T2A系细胞中的表达情况。结果:T1A前体细胞、T1A和O2A祖细胞均表达波形蛋白和S-100β;未成熟T2A只表达S-100β,成熟T2A不表达波形蛋白和S-100β。结论:在星形胶质细胞的发育过程中,波形蛋白和S-100β的表达可能存在时间和谱系间的差异。

星形细胞条件培养液对PC12细胞生长的影响

目的 观察 1、2型星形细胞 (T1A ,T2A)条件培养液对PC12细胞生长情况的影响 ,探讨T1A ,T2A在神经再生过程中的作用。方法 利用分离纯化的T1A和T2A制备条件培养液 ,观察条件培养液对PC12细胞生长情况的影响 ,观察PC12细胞突起生长情况 ,并用MTT法检测PC12细胞活力。结果 对照组PC12细胞未见明显突起生长 ,TIA条件培养液作用组和T2A条件培养液作用组PC12细胞突起生长明显 ,OD值分别由 0 .2 78提高到0 .5 12 (P <0 .0 0 1)和 0 .5 6 6 (P <0 .0 0 1)。结论 T1A ,T2A条件培养液对PC12细胞有刺激生长作用 ,说明T1A 。

外周血树突状细胞的诱导及其对T细胞的激发效应

目的 建立外周血树突状细胞 (DendriticCell,DC)的分离和培养方法 ,研究DC对T细胞的刺激效应。方法 首先从外周血分离出非T细胞 ,再经贴壁和Metrizamide分离纯化去除巨嗜细胞、单核细胞及B细胞等 ,加入GM -CSF、TNF -α和IL - 4培养。收获DC与异体T细胞混合培养。用MTT法检测T细胞的增殖 ,ELISA法测定培养上清中IL - 2、IL - 6及IFN -γ的分泌量。结果 来源于外周血的DC前体细胞经细胞因子诱导培养后 ,其总量可扩增 18.34± 6 .2 6倍 ,可促进异体T细胞的增殖及细胞因子分泌。结论 来源于外周血的DC ,其数量和浓度均较高 ,而且是一种功能性DC。

AD模型海马结构中iNOS表达及作用

目的 建立Alzheimer病 (AD)大鼠动物模型 ,探讨iNOS在AD动物模型脑组织海马中的表达情况及其作用。方法 海人藻酸 (KA)毁损Meynert基底核建立AD大鼠模型 ,通过Y型迷宫实验及 β -APP的表达判断AD动物模型是否建立成功 ,检测动物模型海马中iNOS的表达情况。结果 迷宫实验发现 ,KA毁损NBM后大鼠短期学习记忆能力和手术前 (P <0 .0 0 1)和对照组 (P <0 .0 0 1)相比明显下降。免疫组化发现 ,β -APP和iNOS的表达明显增多 (P <0 .0 0 1) ,两者均以CA1和齿状回区最多。结论 海人藻酸毁损Meynert基底核可建立简便可靠的AD动物模型 ;AD动物模型中 ,iNOS高表达 。

硫氧还蛋白还原酶在大鼠阿尔茨海默病模型海马结构中的表达

目的 :探讨硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxinreductase,TR)在阿尔茨海默病 (Alzheimer′sDisease,AD)大鼠模型发生中的作用。方法 :注射海人藻酸 (Kainicacid ,KA)毁损Meynert基底核建立AD大鼠模型 ,通过Y形迷宫判断动物模型成功与否 ,采用原位杂交方法检测AD大鼠模型中TRmRNA的表达。结果 :AD模型组大鼠短期学习记忆能力与对照组相比明显下降 (P <0 0 0 1 ) ,说明AD动物模型建立成功 ;TRmRNA原位杂交检测显示模型组大鼠海马各区TRmRNA杂交信号显著增强 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 0 0 1 )。结论