EPHA10促进肺腺癌H1975奥希替尼耐药细胞增殖、耐药和迁移的实验研究

目的研究EPHA10在H1975奥希替尼耐药细胞增殖、耐药和迁移中的作用及机制。方法通过Western Blot检测EPHA10在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)敏感和耐药细胞株中的表达情况,选取EPHA10高表达细胞株作为研究对象。利用小RNA干扰技术降低高表达株中EPHA10表达,分别采用CCK-8,Transwell实验检测对照组和干扰组中细胞的增殖、耐药及迁移能力,再利用Western Blot检测干扰EPHA10后对细胞增殖和迁移关键蛋白的影响。结果EPHA10在H1975奥希替尼耐药细胞中表达最高;在该细胞中干扰EPHA10后,细胞的增殖、耐药及迁移能力下降,且细胞增殖相关的关键蛋白p-ERK、PCNA、Cyclin D1以及迁移相关蛋白ZEB1、Slug、MMP9、Vimentin表达均下调。结论敲低EPHA10抑制了肺腺癌H1975奥希替尼耐药细胞的增殖、耐药和迁移,其作用机制可能与抑制细胞中ERK通路激活和细胞转移有关。

Moesin调控肺癌A549细胞增殖、侵袭的实验研究

目的研究Moesin在非小细胞肺癌中的作用及其机制。方法通过数据库分析发现Moesin高表达在非小细胞肺癌患者中与不良预后相关。利用Western Blot检测Moesin在肺癌细胞株内表达情况。选取Moesin表达量中等A549细胞株进行实验。将A549细胞分为对照组和Moesin干扰组,分别利用CCK-8,Transwell检测细胞增殖、转移的作用,利用Western blot检测干扰Moesin对细胞增殖、上皮间充质转移(EMT)信号通路蛋白的影响。结果干扰Moesin后,增殖信号通路p-AKT,p-ERK,EMT信号通路E-cadherin,N-cadherin,Vimtein等蛋白都有明显变化,并且肺癌细胞表型如增殖,转移、侵袭能力也有明显下降。结论Moesin在非小细胞肺癌中表达上调,其高表达与不良预后相关。并且,通过影响下游增殖、转移信号通路蛋白,Moesin可促进肺癌细胞增殖转移。

CPNE3调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及其相关机制研究

目的 探讨CPNE3对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞株A549增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 通过癌症和肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)的公共数据分析CPNE3在NSCLC中的表达及其与患者预后的关系。利用Western blot方法检测CPNE3在正常支气管上皮细胞株BEAS-2B和肺癌细胞株中的表达。在A549细胞中转染CPNE3的干扰序列,利用CCK-8、克隆形成、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法检测下游增殖、转移相关蛋白水平的变化。构建CPNE3过表达稳转细胞株,取10只雌性BALB/c nude小鼠分为对照组和过表达CPNE3组(n=5),构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察过表达CPNE3对A549细胞成瘤能力的影响。结果 NSCLC组织中CPNE3表达升高(P<0.05),其高表达与患者的不良预后相关(P<0.01),CPNE3在肺癌细胞株中表达升高(P<0.01),干扰CPNE3后细胞的增殖能力、克隆形成能力下降(P<0.001,P<0.01),迁移和侵袭能力下降(P<0.01,P<0.01),并伴随着p-AKT、p-ERK和p-EGFR蛋白的下调(P<0.001,P<0.001,P<0.01)。过表达CPNE3在体内促进移植瘤的生长(P<0.001),并伴随着p-AKT、p-ERK和p-EGFR蛋白的上调(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论 干扰CPNE3可以抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,过表达CPNE3可以增强A549细胞在体内的增殖能力,其作用机制与EGFR信号通路及其下游的AKT/ERK信号通路相关。

诊断学临床技能教学改革探索

诊断学是一门衔接基础医学与临床医学的重要学科,临床技能是医学生走向临床岗位所必须掌握的技能。提高临床技能教学质量对培养优秀的临床医生有非常重要的意义。优化课程设置、合理配置师资力量、整合各种教学方法和资源,以及加强人文素养教育有助于学生掌握理论知识,提高技能操作水平及培养临床思维能力。

miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P<0.001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P<0.001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P<0.01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P<0.001)。结论miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。

甲基双加氧酶对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨甲基双加氧酶(TET2)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法通过在线数据库分析TET2与NSCLC患者预后的相关性;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测人正常支气管上皮细胞及非小细胞肺癌系中TET2的表达;瞬时转染si-TET2干扰序列,运用CCK8、克隆形成法检测细胞的增殖;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测上皮间质转化(EMT)标志物以及N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Cyclin D1蛋白水平。结果TET2高表达的患者总体生存率差,相比于人正常肺上皮细胞,TET2在NSCLC细胞株中高表达。敲低TET2可显著抑制A549、H1299细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.001),并将细胞周期阻滞于G 0/G 1期。Western blot结果显示,N-cadherin、Vimentin和Cyclin D1蛋白表达显著下调,E-cadherin表达显著上调(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论TET2可能通过影响细胞周期以及EMT的关键蛋白促进NSCLC的增殖、迁移和侵袭。

去整合素金属蛋白酶15通过AKT/ERK通路和MMP9影响肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨去整合素金属蛋白酶15(ADAM15)对肺癌细胞系H460细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法收集20对非小细胞肺癌和癌旁组织标本,用RT-PCR检测各组织中ADAM15的mRNA表达水平(P<0.05)。通过Western blot测定ADAM15在正常支气管上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞株(A549、H1299、SPC、H460)中的表达,以及AKT/ERK信号途径相关蛋白的表达水平。通过CCK-8法分析细胞增殖的活力(P<0.001)。通过划痕实验和transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001)。结果ADAM15在非小细胞肺癌中高表达,并与预后有关;沉默ADAM15后H460细胞的增殖,迁移和侵袭能力明显下降,伴随着磷酸化AKT,磷酸化ERK和基质金属蛋白酶9(MMP9)的下调(P<0.001)。结论沉默ADAM15可抑制NSCLC的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制AKT/ERK通路和MMP9有关。

miR-124对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨miR-124对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及其机制。方法采用CCK8法和克隆形成实验评估miR-124对细胞增殖能力的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测miR-124转染后细胞内PIM3的表达水平。通过双荧光素酶报告系统检测miR-124对PIM3荧光素酶活性的影响,证实miR-124可靶向作用于PIM3的3’UTR区。采用qRT-PCR和Western blot检测si-PIM3转染后细胞内PIM3的表达情况,采用CCK8法和克隆形成实验检测沉默PIM3后对细胞增殖能力的影响。结果①miR-124模拟物组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;miR-124模拟物组的克隆形成数明显少于其对照组。②miR-124模拟物组的miR-124过表达后,其PIM3表达低于其对照组,差异有统计学意义。③含野生型结合位点(PIM3 3’UTR区完整片段)的miR-124模拟物组的荧光素酶活性低于其对照组,差异有统计学意义;含突变型结合位点(PIM3 3’UTR区突变片段)的两组无明显差异。④si-PIM3组的PIM3被沉默后,其表达水平明显低于其对照组,差异有统计学意义;si-PIM3组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;si-PIM3组的克隆形成数明显少于其对照组。结论miR-124可通过靶向作用于PIM3的3’UTR区下调后者的表达而抑制NSCLC细胞的增殖。

免疫卡控点分子PD-1／PD-L1在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

目前，治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的有效手段主要包括手术切除、放疗、化疗以及分子靶向治疗。这些手段确有实效的同时也存在着局限性以及随后接踵而来的多种风险，包括复发，转移，耐药及严重的副作用等。