冠心病与肺炎衣原体感染及C反应蛋白的关系研究

目的探讨肺炎衣原体(Cpn)感染与冠心病(CHD)、冠脉狭窄程度及C反应蛋白(CRP)的关系。方法选择冠状动脉造影(CAG)确诊的冠心病患者和健康者为研究对象,用ELISA检测样本Cpn特异性IgG及IgM抗体。应用乳胶凝集法检测CRP。结果冠脉轻度狭窄组和重度狭窄组Cpn IgG抗体阳性率均显著高于正常组,轻度狭窄组与重度狭窄组之间无显著性差异。3组Cpn IgM抗体阳性率无显著性差异;稳定性心绞痛(SAP)组和急性冠脉综合征(ACS)组Cpn IgG抗体阳性率均高于正常组,ACS组与SAP组之间差异无显著性。3组Cpn IgM抗体阳性率无显著性差异;ACS组CRP阳性率显著高于正常组和SAP组,正常组和SAP组之间无显著差异性。Cpn IgG抗体阳性组的CRP阳性率显著高于Cpn IgG抗体阴性组。结论Cpn感染所介导的炎症反应可能在冠心病的发生与发展中起一定作用,但因果关系尚待确定。

检出携带vanA基因耐万古霉素溶血葡萄球菌

目的了解本院万古霉素敏感性减低葡萄球菌的流行情况,探讨其耐药机制。方法分别采用菌谱分析法、万古霉素脑心浸液平板筛选法从临床分离菌株中筛选万古霉素敏感性减低葡萄球菌,并以琼脂稀释法、E-test法检测其最低抑菌浓度(MIC),以PCR方法检测耐药基因(van,mecA)。结果检出32株异质性万古霉素耐药葡萄球菌(h-VRS),1株万古霉素耐药溶血葡萄球菌(VRSH),对替考拉宁和万古霉素MIC分别为256μg/mL和128μg/mL。33株万古霉素敏感性减低葡萄球菌均检出mecA基因,32株h-VRS中均没有检出van基因;从VRSH菌株中检出vanA基因,该菌株从临床标本中检出,比较罕见。结论万古霉素耐药葡萄球菌在我国已经出现,应当引起足够重视。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2在不同肿瘤组织中mRNA的表达差异

目的 :观察三种不同肿瘤组织中ppGalNAc T2的表达差异 ;方法 :本文采用RT PCR方法从mRNA水平上研究其表达 ,同时在同一反应管中进行内对照 β 微球蛋白的扩增以进行半定量分析 ;结果 :ppGalNAc T2在不同肿瘤组织中 ,其在肿瘤部分、癌旁部分与正常部分的表达水平不具有一致性 ;结论 :ppGalNAc T2具有组织特异性 ;不同肿瘤组织的糖基转移酶作为肿瘤标志基因有待进一步的研究。

人β-NGF基因在CHO细胞中表达的生物学活性及分离纯化

目的 :检测人 β NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的 β NGF的生物学活性及分离纯化。 方法 :采用脂质体介导的真核细胞转染 ,运用形态学观察和MTT法进行检测做定性定量分析 ,蛋白观察用SDS PAGE电泳。结果 :转染 β NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性 β NGF ,且可透过血脑屏障。 结论 :转染 β NGF基因的CHO细胞所分泌的 β NGF ,接近自然合成的蛋白 ,具有较高生物学活性 ,为NGF的生物制药奠定了实验基础。

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的比较研究

目的 比较用SpragueDawley(SD)大鼠和Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)模型的差异。 方法 选用SD大鼠和Wistar大鼠 ,随机分为实验组和对照组 ,免疫抑制诱导建立动物模型 ;收集肺组织和支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,分别制成肺印片和BALF涂片 ,作Giemsa染色 ,镜检卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。结果 共收集实验组SD大鼠和Wistar大鼠的肺组织及BALF标本各 2 8份 ,经Giemsa染色后 ,在肺印片中查见Pneumocystiscarinii(Pc)虫体的阳性率分别为 89.2 9%和10 0 % ,两者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;BALF阳性率分别为 6 0 .71%和 78.5 7% ,两者之间亦无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而同种大鼠的肺印片与BALF涂片 ,其阳性率之间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,且肺印片的检出率均显著高于BALF涂片。同种大鼠不同肺叶的肺印片 ,其阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

Northern杂交检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在不同肿瘤细胞中的表达水平

目的:从mRNA水平检测五种不同肿瘤细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的表达情况。方法:采用Northern杂交方法。结果:Northern杂交结果显示了两条区带,并且pp-GalNAc-T2在不同肿瘤细胞中存在表达差异。结论:pp-GalNAc-T2基因在不同细胞存在差异表达并可能存在着剪切现象。

EPO硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后caspase-3及FasL表达与细胞凋亡的相关性研究

[目的]在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察并探讨其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡的影响。[方法]将48只体重(270±10)g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1、6、24h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射,n=18),实验组(1、6、24h组分别给与5000u/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18)。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;分别采用TUNEL法及免疫组化法检测脊髓神经细胞凋亡指数和Caspase-3,fas-fasl死亡蛋白的表达。光镜下观察统计分析结果。[结果]与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1、6、24h干预的实验组神经运动功能均有改善,脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降(P<0.01);实验组中,fas-fasl死亡蛋白较对照组表达减少。2组中神经细胞凋亡数与Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白表达细胞数呈线性正相关(P<0.01),相关系数分别为r=0.941(Caspase-3)和r=0.929(fas-fasl)。[结论]早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤具有保护作用,可明显改善神经运动功能恢复情况,此种保护作用可能与EPO能够阻断Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白途径的神经细胞凋亡有关。

抗幽门螺杆菌单克隆抗体与人血小板交叉识别的实验研究

目的:研究抗幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(ureB)单克隆抗体与血小板膜糖蛋白(GP)的结合情况。方法:运用Western blot、流式细胞术(FCM)和免疫放射法(IRMA)分析血小板膜GP成分与幽门螺杆菌ureB成分的相关性。结果:抗幽门螺杆菌ureB单抗1F11与血小板成分GPⅢa、P-选择素有一定程度结合,但与GPⅠb、GPⅡb及GPⅥ无结合。结论:血小板成分GPⅢa、P-选择素与幽门螺杆菌ureB存在交叉识别的共同抗原表位,提示Hp感染与部分特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机理有关。

人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达

目的:拟构建人血管生成素1和血管内皮生长因子165腺病毒载体,观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。方法:通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因,PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模板扩增VEGF165基因,分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上,构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和pTrack-CMV-VEGF165,经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165,经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞,收获重组腺病毒Ad-Ang-1及Ad-VEGF165。结果:PCR﹑双酶切和测序鉴定结果证实成功构建pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165重组转移质粒,PmeI线性化后重组腺病毒载体获得成功包装。脂质体转染QBI-293A细胞后光镜下可见由腺病毒引起的细胞圆缩、聚集呈菌落状的典型细胞病理性改变;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,且荧光强度随培养时间延长而逐渐增强;经多轮感染、扩增后,病毒效价可达(2.0～5.0)×1010pfu/mL。转染48h后,293A细胞中的血管生成素1与血管内皮生长因子含量均明显提高(F=427.93,17.93,P<0.05)。结论:成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组腺病毒,血管生成素1与血管内皮生长因子165均能在靶细胞中有效表达。

沙苑子黄酮对^(60)Coγ射线损伤作用的影响

目的研究沙苑子黄酮(FAC)对辐射小鼠的保护作用。方法雌性昆明小鼠随机分为6组进行饲养,其中3个实验组分别给予不同浓度的FAC,阳性对照组给予升白药利血升,辐射对照组和正常对照组给予去离子水,共17 d。饲养第7天,除正常对照组外各组小鼠均接受6 Gy 60Coγ射线一次性全身照射,观察FAC对辐射损害的保护效应及对抗氧化及免疫功能的影响。结果FAC可提高受照射小鼠21 d存活率,延长受辐射小鼠的存活时间;可升高受辐射小鼠外周血中的白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白数;可促进辐射小鼠胸腺细胞和脾脏细胞的增殖;可升高超氧化物歧化酶和降低丙二醛的含量。结论FAC对辐射小鼠有保护作用,这与其提高抗氧化能力及增强免疫功能有关。

低剂量照射离体血的刺激效应研究

研究受过低剂量照射的离体人血能否对正常血细胞或辐射损伤的血细胞产生刺激效应。将受过10cGy低剂量照射的离体人血,分别与未受照射或受过1000cGy大剂量照射的同一人血,以不同组合方式共培养,72h后收获细胞,测定各实验组的H?TdR掺入值。结果表明,接受低剂量照射的人血能够对受大剂量照射的3人血细胞产生明显的刺激增殖效应。受低剂量照射血的血浆中存在着引起刺激效应的物质。

阿魏酸对H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞表达P-选择素的影响

目的:探讨阿魏酸对H_2O_2刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达P-selectin的影响。方法:应用培养的HUVECs经H_2O_2刺激,用FTTC标记抗P-选择素单抗SZ-51-1gG和FCM测定HUVECs表面表达的P-se-lectin,同时观察了阿魏酸对其表达的影响。结果:实验显示正常HUVECs表面表达少量的P-selectin,H_2O_2能刺激培养的HUVECs表面P-selectin表达增高,其中最适的H_2O_2刺激浓度在250-300μmol/L,最适的刺激时间为1.5-2 h;随着阿魏酸浓度增加,阿魏酸明显地抑制H_2O_2刺激HUVECs表面P-selectin的表达。结论:H_2O_2能刺激培养的HUVECs表面P-selectin表达增高,阿魏酸明显地抑制其表达。

特异性抗原幽门螺杆菌尿素酶B的体外表达

目的:建立自患者体内分离的幽门螺杆菌菌株及其抗原尿素酶B(ureB)体外表达的方法。方法:分离培养胃病患者感染的幽门螺杆菌,采用基因体外重组技术分离ureB基因,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Westernblot进行鉴定。结果:测序结果证实克隆的基因与GeneBank中的序列相符,经Westernblot证实获得ureB的重组蛋白。结论:获得了高表达的重组抗原蛋白,为ureB检测及Hp感染的诊断提供了物质基础。

胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达

目的比较胰甘油三酯脂酶在1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A)中的表达情况。方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养纯化的T1A和T2A,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR))技术检测胰甘油三酯脂酶mRNA在两型星形胶质细胞中的表达差异,并且通过激光共焦免疫荧光双标技术从蛋白水平进一步证实。结果胰甘油三酯脂酶在T1A中不表达或低表达,主要定位于细胞核中;而在T2A中表达水平较高,分布广泛,在胞浆、胞核及细胞突起中均有表达。结论胰甘油三酯脂酶在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,胰甘油三酯脂酶在T2A中高表达,提示T2A在中枢神经系统脂代谢方面起重要的作用。

外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L),SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L,SNP+硫酸亚铁(FeSO4)0.15mmol/L,SNP+L-半胱氨酸(L-cyst)1.00mmol/L,SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。结果SNP0.02mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(0.84±1.69)%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用(P>0.05);SNP0.05mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(12.26±3.04)%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用(P<0.01)。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00mmol/LSNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP1.00mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自(85.40±2.90)%下降为(5.90±2.90)%、(25.86±4.02)%、(30.16±2.75)%和(16.71±2.30)%。结论外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO4可以逆转这种杀伤作用。

肾源性细胞因子促红细胞生成素对急性脊髓损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:促红细胞生成素为肾源性细胞因子,在大鼠急性脊髓损伤后对脊髓神经功能具有保护作用。实验拟证明不同时间硬膜外腔注射后其对脊髓神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2007-01/04在苏州大学附属第二医院动物实验室完成。①实验材料:清洁级成年雄性SD大鼠48只,体质量(270±10)g;实验用人重组促红细胞生成素为日本麒麟啤酒株式会社制造,规格3000IU/支。②实验分组及处理:将大鼠随机分为正常组6只,假手术组6只(仅切除椎板),生理盐水组18只,实验组18只。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型。实验组分别于大鼠脊髓损伤后1,6,24h(每个时间点6只),于硬膜外腔注射重组人促红细胞生成素5000u/(kg·bw);生理盐水组于相同时间予以相同体积生理盐水。③实验评估:通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;苏木精-伊红染色法观察组织学改变,并采用原位末端标记法标记法检测脊髓神经细胞凋亡数。结果:①神经行为学评分:正常组、假手术组大鼠双下肢运动功能正常;与生理盐水组相比,脊髓损伤后实验组1,6及24h神经运动功能有改善;斜板角度及BBB评分均明显提高,差别有显著性意义(P<0.05)。②组织学苏木精-伊红染色结果:实验组组织学破坏改变明显较生理盐水组轻。③凋亡神经细胞及计数结果:实验组脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降,差异有显著性(P<0.05)。结论:早期应用外源性促红细胞生成素对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害具有保护作用,能明显改善脊髓损伤后的临床功能表现。此种保护作用与促红细胞生成素能够抑制神经细胞凋亡有关。

幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(ureB)单克隆抗体并鉴定。方法:以Hp重组纯化蛋白ureB为抗原,运用杂交瘤技术制备ureB单克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体免疫学活性,用双抗夹心的IRMA法检测不同单抗是否识别相同的表位,并用于检测Hp感染。结果:获得两株识别不同表位的ureB单抗杂交瘤细胞,可测得Hp感染的相关抗原。结论:抗ureB单抗可特异性与Hp结合,可用于建立幽门螺杆菌现症感染的检测方法。

白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织VEGF表达水平的影响

目的 探讨白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响及其对哮喘模型气道重塑的预防和治疗作用 ,提供哮喘防治新途径的可靠实验依据。方法 10 8只健康雄性豚鼠随机分为 3组 :哮喘发作组、治疗组、对照组 ,每组 36只。以卵蛋白 (OVA)致敏和激发建立豚鼠哮喘模型。肺组织病理切片以SP法免疫组化标记VEGF ,图像分析VEGF表达水平。结果 OVA激发后 4周 ,哮喘发作组肺组织VEGF表达水平显著高于治疗组及对照组 (P <0 0 5 ) ,白三烯受体拮抗剂治疗哮喘使肺组织VEGF的表达水平降低。结论 白三烯受体拮抗剂可以降低哮喘豚鼠肺组织VEGF表达水平 ,从而减少血管增生 ,延缓哮喘气道重塑的发生。

日本血吸虫染色体核型分析及C带和G带的制备

收集日本血吸虫成虫,常规气干法制备血吸虫染色体,改进的BSG法制备C带,胰酶消化法制备G带,分析其染色体核型和C带、G带带型特征。研究表明其核型公式为2n=4m+6Sm+4St+2性染色体,C带带型公式为2n=5CI++4CI++3CI+2CT+2CT+,各对染色体显示出特征性的G带。