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外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究
被引量:
3
1
作者
方强
夏惠
+5 位作者
王雪梅
陆凤
陶志勇
曹俊
孙新
高琪
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期318-321,共4页
目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0...
目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L),SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L,SNP+硫酸亚铁(FeSO4)0.15mmol/L,SNP+L-半胱氨酸(L-cyst)1.00mmol/L,SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。结果SNP0.02mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(0.84±1.69)%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用(P>0.05);SNP0.05mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(12.26±3.04)%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用(P<0.01)。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00mmol/LSNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP1.00mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自(85.40±2.90)%下降为(5.90±2.90)%、(25.86±4.02)%、(30.16±2.75)%和(16.71±2.30)%。结论外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO4可以逆转这种杀伤作用。
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关键词
外源性NO
间日疟原虫
红内期
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职称材料
日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析
2
作者
柯雪丹
余传信
+9 位作者
宋丽君
菊池三惠子
平山谦二
王玠
殷旭仁
金一
沈双
姚媛
高玒
高琪
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2013年第12期1082-1088,1092,共8页
目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片...
目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卵可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,采用RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264.7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫调节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNase T2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1︰200 000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卵及虫卵外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论 rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化。
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关键词
血吸虫
日本
核糖核酸酶T2
表达
功能分析
免疫调节
原文传递
题名
外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究
被引量:
3
1
作者
方强
夏惠
王雪梅
陆凤
陶志勇
曹俊
孙新
高琪
机构
苏州大学基础医学系寄生虫学教研室
蚌埠
医学
院病原生物
学
教研室
、安徽省感染与免疫重点实验室
江苏省
寄生虫
病防治研究所、卫生部
寄生虫
病预防与控制技术重点实验室
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期318-321,共4页
基金
国家传染病科技重大专项(No.2008ZX10004-011)
卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放课题(No.WK008-002)~~
文摘
目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L),SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L,SNP+硫酸亚铁(FeSO4)0.15mmol/L,SNP+L-半胱氨酸(L-cyst)1.00mmol/L,SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。结果SNP0.02mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(0.84±1.69)%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用(P>0.05);SNP0.05mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(12.26±3.04)%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用(P<0.01)。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00mmol/LSNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP1.00mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自(85.40±2.90)%下降为(5.90±2.90)%、(25.86±4.02)%、(30.16±2.75)%和(16.71±2.30)%。结论外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO4可以逆转这种杀伤作用。
关键词
外源性NO
间日疟原虫
红内期
Keywords
Exogenous nitric oxide
Plasmodium vivax
Blood-stage
分类号
R382.311 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析
2
作者
柯雪丹
余传信
宋丽君
菊池三惠子
平山谦二
王玠
殷旭仁
金一
沈双
姚媛
高玒
高琪
机构
苏州大学基础医学系寄生虫学教研室
江苏省血吸虫病防治研究所 卫生部
寄生虫
病预防与控制技术重点实验室
日本长崎
大学
热带
医学
研究所分子免疫遗传室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2013年第12期1082-1088,1092,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.30671833
30972581)
+2 种基金
江苏省自然科学基金项目(No.BK2008110)
国家传染病重大专项(No.2012ZX10004220)
江苏省博士后科研工作站无锡市人力资源和社会保障局资助项目
文摘
目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卵可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,采用RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264.7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫调节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNase T2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1︰200 000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卵及虫卵外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论 rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化。
关键词
血吸虫
日本
核糖核酸酶T2
表达
功能分析
免疫调节
Keywords
Schistosorna japonicum
RNase T2
expression
functional analysis
immunoregulation
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究
方强
夏惠
王雪梅
陆凤
陶志勇
曹俊
孙新
高琪
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
下载PDF
职称材料
2
日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析
柯雪丹
余传信
宋丽君
菊池三惠子
平山谦二
王玠
殷旭仁
金一
沈双
姚媛
高玒
高琪
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2013
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