EPO硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后caspase-3及FasL表达与细胞凋亡的相关性研究

[目的]在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察并探讨其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡的影响。[方法]将48只体重(270±10)g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1、6、24h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射,n=18),实验组(1、6、24h组分别给与5000u/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18)。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;分别采用TUNEL法及免疫组化法检测脊髓神经细胞凋亡指数和Caspase-3,fas-fasl死亡蛋白的表达。光镜下观察统计分析结果。[结果]与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1、6、24h干预的实验组神经运动功能均有改善,脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降(P<0.01);实验组中,fas-fasl死亡蛋白较对照组表达减少。2组中神经细胞凋亡数与Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白表达细胞数呈线性正相关(P<0.01),相关系数分别为r=0.941(Caspase-3)和r=0.929(fas-fasl)。[结论]早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤具有保护作用,可明显改善神经运动功能恢复情况,此种保护作用可能与EPO能够阻断Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白途径的神经细胞凋亡有关。

肾源性细胞因子促红细胞生成素对急性脊髓损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:促红细胞生成素为肾源性细胞因子,在大鼠急性脊髓损伤后对脊髓神经功能具有保护作用。实验拟证明不同时间硬膜外腔注射后其对脊髓神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2007-01/04在苏州大学附属第二医院动物实验室完成。①实验材料:清洁级成年雄性SD大鼠48只,体质量(270±10)g;实验用人重组促红细胞生成素为日本麒麟啤酒株式会社制造,规格3000IU/支。②实验分组及处理:将大鼠随机分为正常组6只,假手术组6只(仅切除椎板),生理盐水组18只,实验组18只。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型。实验组分别于大鼠脊髓损伤后1,6,24h(每个时间点6只),于硬膜外腔注射重组人促红细胞生成素5000u/(kg·bw);生理盐水组于相同时间予以相同体积生理盐水。③实验评估:通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;苏木精-伊红染色法观察组织学改变,并采用原位末端标记法标记法检测脊髓神经细胞凋亡数。结果:①神经行为学评分:正常组、假手术组大鼠双下肢运动功能正常;与生理盐水组相比,脊髓损伤后实验组1,6及24h神经运动功能有改善;斜板角度及BBB评分均明显提高,差别有显著性意义(P<0.05)。②组织学苏木精-伊红染色结果:实验组组织学破坏改变明显较生理盐水组轻。③凋亡神经细胞及计数结果:实验组脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降,差异有显著性(P<0.05)。结论:早期应用外源性促红细胞生成素对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害具有保护作用,能明显改善脊髓损伤后的临床功能表现。此种保护作用与促红细胞生成素能够抑制神经细胞凋亡有关。

脊髓损伤后促红细胞生成素对神经生长因子、神经营养因子-3表达影响的实验研究

目的在脊髓损伤后不同时间应用促红细胞生成素(rhEPO),探讨其对神经运动功能和继发性病理改变的保护作用及对神经生长因子(NGF)和神经营养因子-3(NT-3)表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、对照组、实验组。按改良Allen打击法建立大鼠的脊髓不完全损伤模型,实验组分别于脊髓损伤后1h、6h、24h腹腔注射rhEPO,5 000ku/kg。通过动物神经运动功能评分和组织学染色评价神经损伤程度;采用免疫组织化学染色检测神经生长因子和神经营养因子-3的表达水平。结果在脊髓损伤后48h,rhEPO 1h、6h实验组神经运动功能和继发性病理损害明显改善,斜板试验角度各为43.5°±3.45°、42°±1.98°;与同期对照组相比明显提高(P<0.05);免疫组化显示脊髓神经生长因子和神经营养因子-3阳性表达明显上升,差异有显著性(P<0.01):而术后24h实验组与同期对照组相比,脊髓神经细胞神经生长因子和神经营养因子-3阳性表达上升均无显著差异(P>0.05)。结论早期腹腔注射外源性EPO对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害及继发性病理改变具有保护作用,此种保护作用可能与EPO能够增加神经营养因子-3和神经生长因子表达相关。

胰腺实性假乳头状瘤临床病理特征及预后的研究

目的探讨胰腺实性假乳头状瘤临床病理和免疫组化特征、组织起源及生物学行为。方法对20例胰腺实性假乳头状瘤手术标本进行HE和免疫组化SP法染色检查。结果 20例患者中女性18例,男性2例,年龄13-48岁,平均25．3岁。多以腹块、腹痛为首发症状。术后17例获得随访,随访时间9-120个月。其中14例生存至今,3例患者死亡。肿瘤组织学特征:有包膜,囊实性混合,镜下特征性结构为肿瘤细胞围绕纤维血管复层排列形成假乳头状突起。免疫组化α-1抗胰蛋白酶17例(85％)和波形蛋白14例(70％)弥漫阳性,突触素阳性10例(50％),嗜铬粒素A灶状弱阳性5例(25％),细胞角蛋白阳性2例(10％),胰岛素阳性2例(10％)和胰高血糖素阳性1例 (5％),S-100蛋白阳性1例(5％),孕激素受体(PR)弥漫强阳性14例(70％),雌激素受体(ER)阳性 1例(5％),pS2蛋白阳性6例(30％),癌胚抗原及胃泌素全部阴性。结论胰腺实性假乳头状瘤多发生在年轻女性,肿瘤细胞多为外分泌细胞及内分泌细胞分化,与性激素受体关系密切,是一种低度恶性肿瘤。

耐万古霉素溶血葡萄球菌对抗菌药物耐药相关基因研究

目的了解耐万古霉素溶血葡萄球菌临床分离株对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素、红霉素以及糖肽类耐药相关基因存在情况。方法采用PCR技术,对耐万古霉素溶血葡萄球菌WY05株分别扩增mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)、erm、tetM、vanA、vanB、vanC基因,并对van基因阳性扩增产物进行测序。结果从WY05菌株中检出vanA、mecA、acc(6′)/aph(2″)、erm、tetM 5种耐药基因,vanA基因扩增产物经测序、BLASTn比对分析,与屎肠球菌vanA序列一致。结论 WY05株除了携带vanA基因外,还携带mecA、acc(6′)/aph(2″)、erm、tetM基因,表型与遗传学特征均支持该菌株具有多药耐药特征;该vanA基因序列与美国纽约州耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)临床分离株所携带Tn1546转座子内vanA部分序列一致。