小柴胡汤免疫-内分泌调节药理研究概述

小柴胡汤出自东汉张仲景的《伤寒杂病论》,为中医经典名方,因其功能和解枢机,通表达里,通津液,和胃气,为后世称作和方之祖,临床应用广泛。随着现代药理研究的发展,小柴胡汤备受青睐,国内外学者对本方进行了大量的临床与实验研究。现就近年来小柴胡汤在免疫—内分泌调节方面的药理研究进展作一概述。研究显示小柴胡汤对T淋巴细胞免疫、B淋巴细胞免疫及细胞因子、NK细胞、肿瘤坏死因子、吞噬细胞均有调控作用,对垂体—肾上腺—皮质功能和糖皮质激素受体有双向调节作用,并至少发生在mRNA水平。

高密度脂蛋白亚型抗动脉粥样硬化血栓形成的作用机制

高密度脂蛋白胆固醇浓度与冠状动脉粥样硬化发生的危险性呈负相关。血浆高密度脂蛋白是一类颗粒大小不均一的脂蛋白,可分为两个大的亚型,即体大质轻的高密度脂蛋白2和小而密的高密度脂蛋白3。高密度脂蛋白及其载脂蛋白参与抗动脉粥样硬化可能涉及到的机制有:促胆固醇转运,维持内皮完整性,抑制血细胞粘附于血管内皮,抗氧化,抗炎作用,抗血栓和促纤溶等多方面作用。本文主要阐述高密度脂蛋白及其亚型抗血栓形成机制。其主要机制是通过上调内皮一氧化氮合酶表达和促进一氧化氮合酶生成来促进血管保护因子一氧化氮的合成,同时还通过激活前列环素合成,减少组织因子表达,经蛋白C途径下调凝血酶生成,直接或间接地减少血小板聚集,减少凝血和促进纤溶来对抗血栓形成。

vWFGMP-140在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者中的动态变化及意义

的了解血管性假血友病因子（vwF）与GMP-140在动脉瘤性蛛网膜下腔出血（ASAH）患者中的动态变化及意义。方法采用回顾性分析方法，将苏州大学附属第一医院神经外科2010-04-2011-04收治的动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者29例，分成迟发性脑缺血组（DCI组）和非迟发性脑缺血组（无DCI组）、脑血管痉挛组（CVS组）和无痉挛组（无CVS组）、预后良好组和预后不良组，并引入正常健康体检者20例作为对照组。分别在SAH后第1天、第4天、第10天收集静脉血，使用ELISA方法检测vWF和GMP-140水平，观察其动态变化；TCD检测大脑中动脉的血流速度（VMCA），出院时行GOS预后评分。结果①血浆vWF水平在DCI组、CVS组及预后不良组第1天、第4天、第10天均高于正常对照组，DCI组与无DCI组在第1天、第4天比较差异有统计学意义（P〈0．05）；第4天、第10天CVS组与无CVS组、预后良好组与预后不良组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。②血浆GMP一140水平在各组早期均显著升高，在第1天预后良好组与预后不良组比较差异有统计学意义。结论早期血浆vwF、GMP-140水平与预后相关，并且早期vWF水平与DCI发生相关。

凋亡抑制蛋白livin在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究一种新的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Proten,IAP)livin两种异构体livin-α和livin-βmRNA在膀胱移行细胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder,TCC)组织中的表达,及其与TCC的病理分级、临床分期的相关性。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测30例TCC患者的肿瘤组织、3例良性前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)和2例外伤所致的膀胱破裂患者的膀胱组织中livin-α和livin-βmRNA的表达。结果30例TCC组织中livin mRNA表达阳性率为16.7%,其表达阳性的病例病理分级均为Ⅲ级,肿瘤均侵及深肌层。而3例BPH患者和2例膀胱破裂患者的膀胱组织livin mRNA表达均呈阴性。结论livin可作为TCC的分子标记物,可成为对TCC恶性程度和预后判断的参考指标。

流式细胞术检测血小板相关IgG的临床应用

目的 :研究流式细胞术 (FCM)检测血小板相关免疫球蛋白 G(PAIg G)的特点及在特发性血小板减少性紫癜 (ITP)诊断中的意义。方法 :用 FCM检测了 47例 ITP、13例非免疫性血小板减少、10例自身免疫溶血性贫血、18例其它免疫系统疾病患者以及 31例健康志愿者的 PAIg G,并与 EL ISA竞争法检测结果比较。结果 :FCM检测 ITP患者 PAIg G的平均荧光强度和阳性血小板百分率均明显高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,11例有峰形异常。ITP患者 FCM检测的阳性率 (87.2 % )比 EL ISA法 (83.0 % )稍高 ,两种方法的符合率为 85 .1%。但两种方法都存在特异性不高的问题。结论 :FCM检测 PAIg G具有快速、简便和灵敏等特点 ,可作为免疫性血小板减少实验诊断的新方法。

抗人B细胞淋巴瘤噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B细胞淋巴瘤单链抗体(ScFv)库。方法从人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞中提取mRNA,RT-PCR扩增重、轻链可变区基因片断,连接成ScFv基因并扩增,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中,构建成单链噬菌体抗体库。结果抗体库容量为3.4×106,约100%的噬菌体基因中有ScFv基因的插入。结论成功构建了抗人B细胞淋巴瘤噬菌体单链抗体库,方便进一步筛选抗人B细胞淋巴瘤抗体。

恶性淋巴瘤单克隆抗体的制备和初步鉴定

采用人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞作为免疫原免疫BALB/C小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA法筛选 ,成功地制备了 1株抗Raji细胞单克隆抗体 (MAb) ,命名为SZ1 38。用琼脂糖双扩散鉴定其为IgG1 类 ,ELISA法测定其腹水效价为 1 :3.2× 1 0 4。MAb流式细胞仪检测表明 ,该抗体与Raji和Daudi呈阳性反应 ;与外周红细胞、白细胞 (包括淋巴细胞和中性粒细胞 )、未活化血小板、内皮细胞株ECV呈阴性反应。免疫组化SP法显示 ,MAbSZ1 38识别的抗原在胃肠道的腺体和肝脏有所表达 ,而在心、脑、扁桃体、脾、脂肪组织、动脉血管壁、神经节、横纹肌、平滑肌等组织不表达或表达很低。Westernblotting分析显示 ,MAbSZ1 38可特异识别还原条件下相对分子量为 1 70kD的蛋白多肽。结果提示 :MASZ1 38对恶性淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的临床意义。

初治儿童及成人伴T系抗原CD2表达的B-ALL的免疫表型分析

目的了解儿童及成人伴CD2阳性表达B系急性淋巴细胞白血病(CD2+B-ALL)的免疫表型特征,为临床的诊断、治疗及预后判断提供依据。方法 应用流式细胞术及多种单克隆抗体检测了21例儿童及22例成人的CD2+B-ALL免疫表型,并对结果进行分析比较。结果 儿童及成人的CD2+B-ALL病例没有明显的性别差异;两者的免疫标记比较,成人CD2+B-ALL的CD10表达明显高于儿童,且差异显著(P<0.01),CD34表达则明显低于儿童,有显著差异(P<0.01);且不管是儿童还是成人CD2+B-ALL都高表达CD34;但两组伴髓系抗原及CD34阳性率均没有显著差异(P>0.05)。结论 儿童及成人CD2+B-ALL主要来源于造血干/祖细胞的恶性转化且儿童病例CD34的表达高于成人,其细胞抗原的异质性表达可能与它的早期起源有关。

子宫内膜癌患者与白蛋白、转铁蛋白的关联分析

分析子宫内膜癌患者白蛋白、转铁蛋白的含量,探讨子宫内膜癌患病与白蛋白、转铁蛋白的关联和预测价值。方法:选取苏州大学附属第一医院子宫内膜癌患者32例,非子宫内膜癌患者96例,测量其年龄、身高、体重、ALB、TRF、UREA、hs-CRF等指标。结果:(1)子宫内膜癌患者ALB水平显著低于非子宫内膜癌患者(Z=-2.595,P=0.009);子宫内膜癌患者TRF水平显著低于非子宫内膜癌患者(Z=-3.080,P=0.002);(2)多因素logistic回归结果显示,ALB是子宫内膜癌的独立预测指标;(3)联合ALB和TRF判断子宫内膜癌的曲线下面积(AUC)最高,达到0.6888。结论:ALB对预测子宫内膜癌有一定的临床价值。

应用VKORC1和CYP2C9基因多态性准确评估患者使用华法林的剂量

目的探讨根据维生素K环氧化物还原酶复合物亚单位1基因(VKORC1)和细胞色素P450酶2C9基因(cytochrome P-450 2C9,CYP2C9)评估患者使用华法林抗凝剂量的准确性。方法收集临床口服华法林患者37例,应用基因测序的方法检测VKORC1及CYP2C9基因的第3,7外显子,设定国际标准化比率(INR)在2.0～3.0,根据药理学公式(www.warfarindosing.org)包括VKORC1和CYP2C9基因型、年龄、性别、体重、身高、目标INR值、胺碘酮使用情况、吸烟史及华法林应用指征等因素计算华法林剂量,并比较其与临床治疗剂量间的差异。结果 37例VKORC1基因型检测89.2%为敏感型(AA型),10.8%为杂合子AG型,未发现不敏感型(GG型)。CYP2C9基因中的CYP2C9*2基因型100%为野生型(CC型);CYP2C9*3基因型91.9%为野生型(AA型),8.1%为杂合子(AC型),未发现型(CC型)。有VKORC1 AA和CYP2C9*3 AC型患者的华法林剂量明显低于其他基因型,并且根据遗传药理学公式计算的华法林剂量与临床治疗剂量之间无显著性差异(P=0.6)。结论应用基因测序方法检测VKORC1及CYP2C9基因多态性为根据药理学公式准确预测华法林的治疗剂量奠定了基础。

敲除Sema4D导致血小板功能缺陷并使心肌缺血梗死面积减小

目的缺血心肌再灌注早期血小板即被激活,可加重缺血/再灌注损伤。我们最近发现除T细胞外,血小板也表达轴突导向分子Sema4D。Sema4D为细胞表面蛋白,其受体在B细胞、单核细胞、内皮细胞及血小板表达。小鼠Sema4D表达缺失,导致血小板胶原受体(GPVI)下游信号受损,其血小板功能在体内、体外均受到抑制,并降低血小板在血脂异常环境中的高反应性。鉴于血小板、白细胞及内皮细胞在再灌注损伤中所起的作用,本研究拟证明Sema4D表达缺失是否可减小心肌缺血的损伤程度,保护心脏。方法小鼠麻醉后,结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注48 h后,再度麻醉小鼠并注射2,3,5-三苯基氯化四氮唑以评估损伤面积。荧光微球体用来划定危险区域。Sema4D(-/-)敲除鼠和野生型小鼠均由Sema4D(+/-)杂合子繁殖而来,用于缺血心肌再灌注损伤面积的对比性研究。结果尽管Sema4D(-/-)鼠与野生鼠在心脏大小及危险区域方面无明显差别,但我们发现Sema4D缺失小鼠(n=7)心肌缺血再灌注损伤面积与野生型小鼠(n=9)相比减少了57%(P<0.05)。由于Sema4D在活化的血小板表面及T细胞上均被非金属蛋白酶ADAM17切割,产生具有生物活性的可溶性细胞外片段,因此,我们接下来证明Sema4D敲除对缺血再灌注损伤的这种保护作用是由于缺乏细胞相关性Sema4D还是缺乏可溶性Sema4D所致。理论上,Sema4D切割酶ADAM17敲除小鼠是证明该问题的最佳动物模型,然而ADAM17敲除小鼠不能存活,因此,我们制备了ADAM17嵌合小鼠,即造血系统无ADAM17功能,而在体内其他组织ADAM17功能正常。其方法为Se-ma4D(+/+)小鼠接受幅照后,移植无ADAM17功能的小鼠胎肝细胞,重建其造血系统,从而得到ADAM17缺陷嵌合小鼠。我们进行了ADAM17缺陷和ADAM17正常嵌合小鼠的缺血再灌注损伤的对比研究,结果发现ADAM17缺陷嵌合小鼠与AD-AM17正常嵌合小鼠的梗死面积无明显差异。结论本研究证明抑制小鼠Sema4D的表达可保护心肌的缺血再灌注损伤;阻止具有生物活性的可溶性Sema4D的生成,对心肌的缺血再灌注损伤无保护作用;对Sema4D心肌缺血再灌注损伤保护作用机制的进一步研究将使其有可能成为治疗和干预的重要靶点。

抗人胰腺癌细胞单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的制备抗人胰腺癌细胞单克隆抗体(McAb),并对其特性进行鉴定。方法以胰腺癌细胞系Patu8988免疫Balb／ c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合,经选择培养,筛选及克隆化后,建立杂交瘤细胞系。以ELISA flow cytometry等方法研究抗体特性。以MTT法研究细胞毒作用。结果得到一株能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系 A7。用琼脂糖双扩散鉴定其为IgG1亚类,ELISA测定其腹水效价为:1:16000。流式细胞仪检测表明:该抗体与Patu8988 细胞呈阳性反应(>90％),与肝癌、结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌呈阴性反应(<5％)。MTT法示该抗体对胰腺癌细胞的杀伤率明显高于对照组。结论 McAbA7对胰腺癌的诊断和治疗可能具有一定的临床意义。

骨癌痛大鼠脊髓NF—κB、IL-6和TNF—α表达的变化

目的评价骨癌痛大鼠脊髓NF，κB、IL-6和TNF-α表达的变化。方法雌性健康SD大鼠72只，体重150～180g，随机分为3组（n=24）：对照组（C组）、假手术组（S组）和骨癌痛组（BP组）。BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256（1×10^5）乳腺癌细胞制备骨癌痛模型，S组左胫骨上端注射Hank液5μl。分别于肿瘤细胞接种前、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21d时测定机械阈值。分别于肿瘤细胞接种后6、12和18d时，处死3只大鼠，取L4-6脊髓组织，采用RT-PCR法测定NF—KBp65mRNA、IL-6mRNA和TNF—dmRNA的表达；另处死3只大鼠，取L4-6。脊髓组织，计数NF-κB阳性细胞，采用免疫组化法测定NF-κB p65表达。结果与C组和S组比较，BP组机械痛阈降低，脊髓NF—κB p65及其mRNA、IL-6mRNA和TNF—α mRNA的表达上调，NF—κB p65阳性细胞计数增加（P〈0．05或0．01）；C组和s组间上述指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大鼠胫骨骨髓腔内注射肿瘤细胞通过激活脊髓NF-κB，导致炎性细胞因子IL-6和TNF-α大量释放，从而诱发骨癌痛。

儿童急性淋巴细胞白血病染色体结构异常的融合基因检测

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)染色体结构异常的融合基因与WHO分型的关系。方法采用多重逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chainreaction,RT-PCR)结合染色体R带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测技术对62例儿童ALL进行分析。结果62例ALL患儿中23例(37.1%)具有13种染色体畸变产生的融合基因。在前体B-ALL中检测到融合基因:TEL/AML13例、E2A/PBX11例、E2A/HLF1例、TLS/ERG1例、MLL/AF41例、MLL/AF91例、MLL/AF101例、伴MLL/AFX-MLL/AF6-MLL/ELL1例、伴MLL/AF6-MLL/ELL1例、dupMLL1例、HOX11基因活化6例。在前体T-ALL中检出TAL1D4例,其中有1例伴HOX11,检出HOX11基因活化2例。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为69.4%(43/62)。结论多重套式RT-PCR结合染色体核型、免疫表型技术是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据,也是WHO分型的基础。

严重肺挫伤患者冯·维勒布兰德因子，白介素8的动态变化及其意义

目的通过检测严重肺挫伤患者血中冯·维勒布兰德因子（vwF），白介素8在受伤后不同时点的含量，揭示其动态变化规律及其临床价值。方法将63例严重肺挫伤患者分成ARDS组和非ARDS组、生存组和死亡组、ISS评分〈20分和ISS评分≥20分组，并引入正常对照组，使用ELISA法分别检测伤后24h内、第3天、第5天、第7天时的血浆vwF和血清IL．8水平，观察其动态规律，并进行相关因素分析。结果严重肺挫伤患者在各时点，血浆vWF和血清IL-8均高于正常对照组。严重肺挫伤并发ARDS组血浆vWF含量各时点逐渐升高，ARDS组在第5天、第7天血浆vwF含量显著高于非ARDS组（P〈0．05），血清IL-8含量在第5天达到高峰后开始下降，两组之间在各时点差异具有统计学意义（P〈0．05）；死亡组血浆vwF与血清IL-8含量均显著高于生存组（P〈0．05）；ISS评分／〉20分组血浆vWF和血清1L-8水平均在第5天达到高峰后开始回落，ISS评分〈20分组在第3天达到高峰后回落。血浆vWF含量与血小板计数呈正相关，与氧合指数呈负相关。血清IL-8含量与白细胞计数、ISS评分呈正相关，与氧合指数呈负相关。结论严重肺挫伤患者血中vWF和IL一8含量呈动态变化，反映了肺损伤的程度，并可以作为严重肺挫伤后并发ARDS的预测及预后判断指标。

血管性假血友病因子与ADAMTS13在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者中的动态变化及意义

目的了解血管性假血友病因子（vwF）与ADAMTS13在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者（aneurysmaXsubarachnoidhemorrhage，aSAH）中的动态变化及意义。方法采用回顾性分析方法，将苏州大学附属第一医院神经外科2010年4月至2011年4月收治的动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者29例，分成迟发性脑缺血组（DCI组）和非迟发性脑缺血组（无DCI组）、脑血管痉挛组（CVS组）和无痉挛组（无CVS组）、预后良好组和预后不良组，并引入正常健康体检者20例作为对照组。所有入选患者均行CT、DSA和（或）CTA确诊为颅内动脉瘤破裂致蛛网膜下腔出血。排除标准：（1）入院时发病已超过72h或即将死亡患者；（2）在外院已接受手术、介入或内科保守治疗患者；（3）正在使用抗血小板药物如阿司匹林、氯吡格雷，或其他抗凝药物如华法林等；（4）有血液系统疾病、肝肾功能不全、近期有感染性疾病、孕期患者。分别在SAH后第1天、第4天、第10天收集静脉血，使用ELISA方法检测vwF抗原和ADAMTS13活性，观察其动态变化，TCD检测大脑中动脉的血流速度（VMCA），出院时行GOS预后评分。使用SPSS13．0统计软件进行统计学处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，并行t检验，多组比较采用方差分析。以P〈0．05为差异有统计学意义。结果血浆vWF水平在DCI组、CVS组及预后不良组第1天、第4天、第10天3个时间点均高于健康对照组，DCI组与无DCI组相比在第1天、第4天时间点组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05），在第4天、第10天，CVS组与无CVS组，预后良好组与预后不良组组间比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。DCI组与预后不良组在T1时间点血浆ADAMTS13活性显著下降；而在是否发生CVS患者之间血浆ADAMTS13活性差异无统计学意义。结论早期血浆vWF水平升高、ADAMTS13活性下降与DCI发生有关，并且早期ADAMTS13活性下降与预后相关。

内皮抑素基因转移联合电离辐射对肺腺癌移植瘤生长的影响

目的探讨内皮抑素(endostatin)基因转移联合电离辐射对肺腺癌移植瘤生长的抑制作用。方法以逆转录病毒为载体,转导内皮抑素基因至肺腺癌A549细胞,获得含内皮抑素基因的A549/Endo细胞。20只裸鼠平均分为4组(A549、A549/Endo、A549+辐照、A549/Endo+辐照组),A549、A549+辐照组裸鼠皮下种植A549细胞,A549/Endo、A549/Endo+辐照组裸鼠皮下种植A549/Endo细胞,建立移植瘤模型。A549、A549/Endo组裸鼠用于观察成瘤时间,并计算抑瘤率;另2组裸鼠于种植瘤细胞后第28天,用直线加速器电离辐照移植瘤体,剂量为20Gy,3d后重复照射20Gy;照射后继续饲养荷瘤鼠,定期观察移植瘤体积变化。于瘤细胞移植后第42天(照射后第14天)处死荷瘤鼠,用免疫组化法测定4组裸鼠瘤体的微血管密度(MVD)。结果聚合酶链测定(PCR)法证实,A549/Endo细胞基因组中整合有内皮抑素基因。裸鼠成瘤时间A549组(78±16)d、A549/Endo组(122±17)d,两组比较差异有显著性(P<005);瘤细胞移植后42d,移植瘤体积A549组(9278±2692)mm3、A549/Endo组(2175±815)mm3,两组比较差异有显著性(P<001),抑瘤率为765%。电离辐照后第14天,移植瘤体积A549+辐照组为(1577±490)mm3,A549/Endo+辐照组为(46±29)mm3,两组比较差异有显著性(P<001)。裸鼠移植瘤组织MVDA549组3578?

胫骨癌痛大鼠脊髓Toll样受体4及其下游细胞因子表达的变化

目的评价胫骨癌痛大鼠脊髓Toll样受体4（TLR4）及其下游细胞因子（TNF-α和IL-1β）表达的变化，探讨TLR4信号转导通路在骨癌痛中的作用。方法健康雌性SD大鼠72只，体重150—180g，随机分为3组（n=24）：正常对照组（C组）、假手术组（S组）和胫骨癌痛组（BP组）。BP组于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μl Walker 256（1×10^5）乳腺癌细胞制备胫骨癌痛模型，S组仅左侧胫骨上端注入Hank液5μl.于接种前（基础状态）、接种后2、4、6、9、12、14、16、18和21d时行痛行为学评分，测定机械痛阈。于接种后6、12、18d时行胫骨X线摄片，观察胫骨破坏情况，并于各时点取3只大鼠，处死后取L4-6脊髓，测定TLR4、TNF—α和IL-1β的mRNA表达，各时点另取3只大鼠，处死后取L4-6脊髓，计数TLR4阳性细胞；测定TLR4蛋白表达。结果与基础值比较，BP组接种后6—21d时痛行为学评分逐渐升高，机械痛阈逐渐降低（P〈0．05），C组和S组各时点痛行为学评分差异无统计学意义（P〉0．05）。与C组和S组比较，BP组痛行为学评分升高，机械痛阈降低，TLR4 mRNA和蛋白、TNF—α mRNA和IL-1β mRNA表达上调，TLR4阳性细胞计数增多（P〈0．05或0．01）。BP组接种后6d即可见左侧胫骨上端骨小梁轻微缺损，12d时多处骨小梁缺损，骨皮质破坏，18d时胫骨上端双侧骨皮质明显破坏，大片骨质缺损。结论大鼠胫骨骨髓腔内肿瘤细胞通过激活脊髓TLR4，导致其下游细胞因子大量释放，而诱发骨癌痛。TLR4可能是胫骨癌痛潜在治疗靶点。

TLR4/NF-κB信号转导通路在大鼠骨癌痛形成及维持中的作用

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）/NF-κB信号转导通路在大鼠骨癌痛形成及维持中的作用.方法 健康雌性SD大鼠81只,5～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为8组,骨癌痛组（BCP组）18只,其他7组每组9只,对照组（C组）不作任何处理；骨癌痛组大鼠胫骨注射l×105 Walker 256乳腺癌细胞；Ⅴ1组、TLR4siRNA1组和TLR4msiRNA1组分别于造模后4d（预注射）鞘内注射溶媒、TLR4小干扰RNA （TLR4siRNA）和TLR4错义siRNA（TLR4msiRNA）,Ⅴ2组、TLR4siRNA2组和TL-R4msiRNA2组分别于造模后9d（后注射）鞘内注射溶媒、TLR4siRNA和TLR4msiRNA.TLR4siRNA和TLR4msiRNA 2μg用5％葡萄糖和jetPEITM稀释到5μl,1次/d,连续3d,最后1次注射后24 h处死大鼠,BCP组分别于造模后7、12d处死大鼠,取L4-6脊髓,采用RT-PCR法检测NF-κBp65 mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA表达,采用免疫组化法和Western blot法检测NF-κBp65表达.结果 预注射TLR4siRNA可完全抑制骨癌痛大鼠脊髓组织NF-κBp65 mRNA、TNF-α mRNA和NF-κBp65表达上调,而后注射TLR-4siRNA可部分抑制骨癌痛大鼠脊髓组织NF-κBp65 mRNA、IL-6 mRNA、TNF-α mRNA和NF-κB表达上调（P＜ 0.05或0.01）.结论 TLR4/NF-κB信号转导通路介导了大鼠骨癌痛的形成和维持.