快速高效构建小鼠体内成像肿瘤模型的方法学平台

目的建立小鼠肿瘤模型,并用体内成像的方法进行检测,降低传统方法中的系统误差与人为测量错误,提高模型的准确性与客观性。方法构建萤火虫素酶的慢病毒表达载体,体外包装能表达萤火虫素酶的慢病毒颗粒。用病毒颗粒转染目标细胞,筛选出稳定表达萤火虫素酶的目标细胞系。体外运用双荧光素酶分析系统进行质控检测,通过后建立小鼠肿瘤模型,最后使用活体成像的方法对小鼠肿瘤模型中肿瘤的大小进行定量分析,以评估小鼠肿瘤模型的恶化程度。结果成功构建含有萤火虫素酶基因的慢病毒质粒;包装能正确表达具有功能活性萤火虫素酶的慢病毒颗粒;使用病毒颗粒感染目标细胞并筛选出能表达萤火虫素酶的稳转细胞系;建立小鼠皮下肿瘤模型,并利用活体成像的方法对肿瘤大小进行定量分析。结论通过该种方法可以建立表达萤火虫素酶的稳转细胞系,利用体内成像的检测方法可以准确的对肿瘤模型的发生发展进行评估。

小鼠白细胞介素15慢病毒载体的构建和表达

目的:克隆小鼠白细胞介素15(IL-15)基因,并构建可表达小鼠IL-15基因的重组慢病毒。方法:根据小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭载体相应的酶切位点设计合成PCR引物;提取小鼠脾脏总RNA,逆转录PCR扩增小鼠IL-15基因的编码区;克隆小鼠IL-15基因的编码区,并进行基因测序;构建含有IL-15基因的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG,Western Blot检测IL-15基因在MEG细胞中的表达。结果:含有小鼠IL-15基因编码区的慢病毒穿梭质粒构建成功,基因测序结果完全正确;含有小鼠IL-15基因的慢病毒载体包装成功;所得病毒上清可成功感染MEG细胞,流式细胞术检测阳性率可达98%;Western Blot结果证明小鼠IL-15基因在MEG细胞中正常表达。结论:成功扩增、克隆了小鼠IL-15基因,并建立其慢病毒表达系统,从而为后续的基础及应用研究工作奠定了基础。