自噬参与老龄大鼠对Rotenone神经毒性的易感性

目的探讨自噬是否参与老龄SD大鼠多巴胺(DA)能神经元对Rotenone神经毒性的易感性。方法♂SD大鼠,分别构建3、12、20mon组,每个月龄组又随机分为自然增龄组和Rotenone处理组,以Rotenone1.0mg·kg-1.d-1背部皮下注射,连续给药30d,每周停药1d,构建SD大鼠Rotenone染毒模型。大鼠黑质连续切片,进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色;Western blot检测黑质部位微管相关蛋白轻链-3(LC3)蛋白表达水平;透射电镜观察黑质神经元中自噬体形成和溶酶体激活。结果在自然增龄组,大鼠黑质TH阳性细胞计数以12mon组为最高;Rotenone处理后各月龄组TH阳性细胞计数均比相应自然增龄组降低(P<0.01),且20mon组降低最为明显。Western blot结果显示,自然增龄组大鼠黑质部位LC3表达在20mon组比3mon组下降(P<0.01),Rotenone处理后各月龄组大鼠黑质部位LC3表达均比相应自然增龄组上调(P<0.01)。透射电镜显示Rotenone处理后大鼠黑质神经元可见自噬小体和溶酶体数目增多。结论自噬参与老龄大鼠DA能神经元对Rotenone神经毒性的易感性。

体外培养的人源神经干-祖细胞超微结构分析

目的研究神经干细胞的超微结构。方法利用无血清培养技术从人胚脑组织中分离培养神经干-祖细胞,扫描及透射电镜观察单个神经干-祖细胞及神经球的超微结构。结果所得神经干-祖细胞体外培养呈典型的神经球样生长。神经球内部由细胞以及无定形结构的物质构成,根据电子密度的不同可分明细胞和暗细胞。相邻细胞间存在细胞连接,部分相邻细胞间以及连接处的胞膜内侧可见小囊泡样结构,部分相邻细胞间还可见胞膜融合。扫描电镜下可见单个神经干-祖细胞呈球形,表面不光滑。透射电镜下可见神经干-祖细胞胞核大,胞质少,核质比高,多种细胞器不发达,多数细胞中自噬小体多见。神经干-祖细胞间存在明显的异质性,包括高尔基复合体、核糖体、溶酶体、神经微丝及微管等在不同神经干-祖细胞中的含量和分布均不一致。单个细胞的细胞核多呈球形,也可见肾形和分叶状,而神经球中细胞核欠规则。神经干-祖细胞常染色质多,异染色质少;单个核仁多见,两个或以上核仁罕见。结论人胚胎来源的神经干-祖细胞及神经球超微结构中见到的自噬小体、相邻细胞间以及相邻处的胞膜内侧的小囊泡样结构、相邻细胞间的胞膜融合现象,可为研究脑肿瘤干细胞的超微结构奠定基础。

成年哺乳动物中枢神经系统损伤后神经元轴突再生的调节(英文)

成年哺乳动物中枢神经系统损伤后修复十分困难,常导致严重的持续性神经功能障碍,因此中枢神经系统损伤修复的研究成为当今热点。最新研究证明,中枢神经系统神经元轴突再生障碍不是因为其内在的再生能力不足,而是与受伤神经元所处的状态及生长环境有关。调节损伤神经元轴突再生至少应该包括如下步骤:维持神经元存活并处于一种生长状态,防止胶质瘢痕形成,清除存在于髓鞘碎片间的神经再生阻滞因子及指引轴突再生方向。本文对近年来有关成年哺乳动物中枢神经系统神经元轴突再生及其调节的研究成果进行综述。

神经干细胞延伸于脑肿瘤干细胞的研究

1992年Reynolds首先成功地从成年小鼠纹状体中分离出神经干细胞（neural stem cells，NSCs）；1997年Mckay确立了神经干细胞能提供大量脑组织所需要的功能细胞的概念；2001年Reya提出了肿瘤干细胞理论：Singh等在人脑胶质瘤组织中分离出神经干细胞样的肿瘤干细胞，并进一步证明后者可直接生成肿瘤细胞，目前称之为脑肿瘤干细胞（brain tumor stem cells，BTSCs），由此开创了神经干细胞研究的新领域。

神经肿瘤分子外科治疗的临床前及临床研究

微创外科治疗神经肿瘤既要最大程度保护神经不受损害,又要彻底或相对彻底清除肿瘤。这是20世纪末刚发展起来的以高科技为基础的新领域,已经建立的手术平台有锁孔(Keyhole)显微、神经导航和神经内镜等,对于良性肿瘤是以肿瘤组织与正常组织为界面的清除肿瘤;对于无法找到界面、呈浸润性生长的神经胶质瘤还应辅于针对肿瘤发生、发展的分子进行治疗。我国的微创神经外科治疗相对滞后,仅有少数单位已经起步,多数单位尚处在准备阶段,期望本刊特约的专家笔谈对推动我国微创神经外科发展有所裨益。

NF-κB在中枢神经系统损伤和修复中的作用

细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)家族是B淋巴细胞核因子,它能够与免疫球蛋白κ链增强子结合并增加各种基因的表达活性。NF-κB通过典型和非典型途径的激活来控制和调节各种生理病理过程。在中枢神经系统,NF-κB调控炎症反应、神经损伤后的神经细胞凋亡等,它可以促进中风等缺血性脑损伤的脑梗死面积和神经元死亡,同时又对神经元的存活有重要影响。NF-κB激活是神经康复的重要组成部分,它能够保护神经元免于由氧化应激和脑缺血诱导的神经元凋亡和变性,阻滞NF-κB活性将影响它的神经保护机制。NF-κB这种对神经元存活和死亡的双重效应取决于NF-κB激活的亚单位类型、激活所处的损伤位置以及损伤后修复的时程。

胶质瘤SP细胞耐药靶分子ABCG2的实验研究

背景与目的:ABCG2是ATP转运蛋白(ATP binding cassette,ABC)家族中G2成员,具有编码乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)功能,在肿瘤研究中又可作为SP细胞标志蛋白来筛选肿瘤干细胞,本研究旨在逆转其耐药作用。方法:尼卡地平(NCDP)、尼莫司汀(ACNU)分别和联合作用于人脑多形性胶质母细胞瘤(GBM)体外细胞系和裸小鼠脑移植瘤。体外实验:用MTT比色法检测药物作用后GBM细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率;体内实验:观察荷瘤裸小鼠的生存期及移植瘤病理。结果:体外实验中,AC-NU+NCDP组对肿瘤抑制和促进凋亡作用都显著高于ACNU组(P<0.01)。体内实验中,ACNU+NCDP组的生存期比ACNU组明显延长(P<0.01)。结论:随着胶质瘤恶性程度增高而表达率增加的ABCG2耐药基因功能因被NCDP抑制后增强了ACNU对胶质瘤细胞的杀伤、促进凋亡和延长荷瘤鼠生存期的作用。

幼年大鼠青霉素点燃后慢性认知功能缺陷的分子机制研究

在建立发育期大鼠青霉素点燃模型的基础上,探讨点燃后至成年期不同发育阶段空间学习记忆能力改变,以及对海马记忆分子钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)、突触可塑性相关基因3(PRG-3)、抗惊厥脑肠肽胆囊收缩素(CCK)、锌离子转运体1(ZnT-1)和3(ZnT-3)表达的远期影响.生后29天(P29)的SD大鼠随机分为青霉素点燃模型组(RS组,n=39)及生理盐水对照组(NS组,n=21).RS组隔日腹腔注射青霉素,按体重5.60×106U/kg,连续6次,NS组以同样方法腹腔注射生理盐水.于末次惊厥后1.5、3、6和12h透射电镜观察海马凋亡及自噬,于末次惊厥后1h进行脑电记录,于末次惊厥后24h原位末端标记凋亡法(TUNNEL)检测海马凋亡细胞.分别于P51～P56、P81～P84、P92～P95进行3次Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆能力.最后,采用Timm染色观察海马苔藓纤维发芽,实时定量RT-PCR测定海马CaMKⅡα、PRG-3、CCK、ZnT-1和ZnT-3的表达.结果如下:a.电镜显示末次惊厥后1.5～12h可见大鼠海马本部神经元内溶酶体被激活,自噬小体形成,12h自噬和凋亡同时存在;TUNNEL显示凋亡细胞明显增多(P<0.05).b.RS组末次惊厥后3～5min脑电图记录显示额叶丛集放电,棘波和尖波阵发.c.Morris水迷宫实验显示,第1次测试各组逃避潜伏期均呈逐渐下降趋势,但RS组第5天潜伏期明显高于NS组,具有显著性差异(P<0.05),RS组第2次水迷宫测试中第1天潜伏期明显高于NS组,具有统计学意义,第3次水迷宫第2天的潜伏期仍明显高于NS组,具有统计学意义.d.在Morris水迷宫搜寻策略分析中采用秩和检验,第1次水迷宫对照组在第4天和第5天成绩明显优于RS组,具有统计学意义(P<0.01),第2次和第3次水迷宫中对照组3天成绩均明显优于RS组,具有统计学意义(P<0.05).e.Morris记忆实验显示:3次记忆测试平台象限路径与总路径之比,RS组3次记忆测试均明显低于NS组,有显著性差异(P<0.05).f.Timm染色显示,RS组海马齿状回内分子层和CA3区锥体细胞层可见明显异常增生苔藓纤维,对照组未见发芽.g.在实时定量RT-PCR试验中,方差分析显示RS组海马CaMKⅡα和ZnT-1表达明显低于NS组(P<0.05),聚类分析和相关分析表明,NS组CaMKⅡα、PRG-3、CCK、ZnT-3这4个基因具有共聚特征,并且各个基因之间具有显著相关性,而RS组仅海马CaMKⅡα和ZnT-1具有明显的共聚现象且呈正相关.本研究表明,幼年大鼠青霉素点燃后不仅能够造成海马神经元早期损伤(包括自噬和凋亡增加),而且产生远期的学习和记忆功能损害,并可能与海马记忆分子CaMKⅡ及ZnT-1表达下调有关.

新生期反复惊厥对认知和海马CaMKⅡ表达的远期影响及干预研究

新生期惊厥活动可造成严重的神经后遗症,如成年期大脑对惊厥的易感和易损性提高,严重者产生认知功能损害.对发育期惊厥性脑损伤远期预后的研究,尤其是分子机制及其干预的研究具有重要的临床意义.探讨了新生期大鼠单次长程或反复惊厥对学习、记忆能力和海马突触后致密物质钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的远期影响及运动训练的干预作用.生后6天(P6)的SD大鼠随机分成单次长程惊厥组(SS)、反复惊厥组(RS)和对照组,每组12只.3组大鼠分别于P27～P31、P58～P61、P80～P82采用Morris水迷宫检测学习、记忆功能.P51～P56对SS组和RS组进行踏转轮训练.最后脑组织切片观察CaMKⅡ mRNA在海马的表达.结果显示,第一次Morris水迷宫测试RS组第1天～第4天潜伏期明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05),第二次水迷宫RS组第1天～第2天的逃避潜伏期较对照组仍显著延长,具有显著性差异(P<0.05),第三次测试各组之间差异无统计学意义.搜寻策略显示,在第一次Morris测试时RS组第3天～第4天边缘式搜寻比例明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.01),同时RS组第3天～第4天趋向式搜寻比例明显低于对照组,具有显著性差异(P<0.01),而第二次和第三次水迷宫测试3组间趋向式和直线式搜寻策略无明显差异.在记忆实验中,原平台象限游泳距离与总距离的比值,RS组第三次较对照组显著降低,有统计学意义(P<0.05);另外RS组1～3天趋向式搜寻比例均明显低于对照组,有显著性差异(P<0.05).CaMKⅡ原位杂交显示,各组CaMKⅡ mRNA在海马均有明显表达,但是在齿状回和门区RS组表达明显低于对照组,具有统计学意义(P<0.01).研究表明,新生期反复长程惊厥能够对学习和记忆功能产生远期的损害,可能与海马记忆分子CaMKⅡ表达下调有关,而单次长程惊厥对学习记忆无明显影响.早期运动训练能够明显改善反复惊厥所致的学习能力损害,但对记忆能力效果仍较差.

ABCG2在胶质瘤组织中的表达及意义

背景与目的:三磷酸腺苷结合盒转运体成员ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member2)是源于造血干细胞的标志物之一,其在神经胶质瘤发生发展相关组织和细胞中的表达情况还不清楚。本研究检测ABCG2在不同恶性程度人脑胶质瘤组织标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体和胶质瘤干细胞球体中的表达情况并分析其意义。方法:制作布有不同恶性程度人脑胶质瘤组织标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体和胶质瘤干细胞球体等的组织芯片,用免疫组化方法检测ABCG2在组织芯片中的表达情况。结果:在71例人脑胶质瘤组织标本中ABCG2的阳性率为26.8%,其中Ⅰ级11.1%,Ⅱ级8.0%,Ⅲ级43.5%,Ⅳ级42.9%;Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级相比差异具有统计学意义(%2=10.710,P=0.001)。在神经干细胞、裸小鼠移植瘤、胶质瘤干细胞球体表达率为100%。在多种正常组织中亦有不同程度的表达。在胶质瘤临床标本中ABCG2阳性细胞呈亲血管分布。结论:ABCG2在胶质瘤干细胞、恶性程度高的胶质瘤组织标本和移植瘤组织中高表达,并且呈亲血管分布。

姜黄素抗内皮细胞缺血/再灌注损伤的机制研究

目的探讨姜黄素（curcumin,Cur）抗人脐静脉内皮细胞（HUVEC）缺血/再灌注（I/R）损伤的作用机制。方法建立缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤模型,MTT法检测不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用及Cur对HUVEC的保护作用;预先给予Cur（5μmol.L-1）,用免疫荧光和Western blot法检测H/R对HUVEC微管相关蛋白LC3、溶酶体酶cathepsin B、L及促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。结果Cur（1.25~5μmol.L-1）可剂量依赖性的保护H/R的HUVEC;H/R能增加LC3、cathepsinB、Bax/Bcl-2的表达,并且使cathepsin L发生核转位;而用Cur预处理后,在进一步增强LC3表达的同时,明显抑制ca-thepsin B和Bax/Bcl-2的表达及cathepsin L的核转位现象。结论Cur能有效提高HUVEC在缺血/再灌注损伤中的存活率,并通过诱导其自噬活性、抑制cathepsins以及Bax/Bcl-2的表达保护内皮细胞。

纳豆激酶对急性血瘀模型大鼠血液流变学及血小板聚集的影响

目的:观察从纳豆杆菌中获得纳豆激酶对急性血瘀模型大鼠血液流变学及血小板聚集的影响。方法:以肾上腺素附加冰浴制备大鼠急性血瘀模型,观察纳豆激酶对大鼠血液流变学的影响;分别采用ADP、凝血酶和花生四烯酸诱导大鼠血小板聚集,用比浊法测定不同时间点的聚集率及最大聚集率。结果:纳豆激酶能明显降低血瘀大鼠的全血低、中、高切黏度,血浆黏度,红细胞压积,纤维蛋白原,红细胞聚集指数及电泳指数;明显抑制ADP、凝血酶、花生四烯酸诱导的血小板聚集,其ED50分别为1 431.9 IU/kg、1 055.3 IU/kg、1 390.8 IU/kg。结论:纳豆激酶能明显改善血瘀大鼠的血液流变学指标,具有显著的抗血小板聚集作用。

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对实验性大鼠肺纤维化的干预作用及可能的作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组和EGCG大、中、小剂量组。通过气管内注入博莱霉素(BLM)复制大鼠肺纤维化模型,于造模后d 2各治疗组开始给药,给药后d7、14、28处死大鼠,取肺组织,观察形态学变化,并测定生化指标。结果EGCG能减少实验性肺纤维化大鼠肺组织中胶原沉积及降低肺系数(P<0.05,P<0.01),提高T-AOC、SOD水平(P<0.05,P<0.01),减轻肺部的病理损害。结论EGCG对BLM诱导产生的大鼠肺纤维化有一定的抑制作用。

氯胺酮成瘾机制的研究进展

氯胺酮为苯环己哌啶(PCP)衍生物,是非竞争性N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂。除作为临床上常用的静脉麻醉药外,氯胺酮还具有一定的致幻作用和成瘾性,非法滥用氯胺酮的人数呈现快速增长趋势。本文根据氯胺酮的药理及毒理学特性与目前公认的药物成瘾机制,从与药物成瘾机制有关的强化效应和奖赏系统、解剖结构、相关受体及个体差异等方面,对氯胺酮成瘾的可能机制作一综述。

大鼠脑外伤后溶酶体酶Cathepsin-B和D的表达

目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免疫荧光、双标和激光共聚焦检测,结果用SPSS10.0软件处理。结果脑外伤后1hcathepsin-B表达即增加,4～8d达高峰,脑外伤后32d仍处于高表达水平;cathepsin-D的表达于脑外伤后12h增加,4～8d达高峰,32d的表达仍然高于12h的表达水平。脑外伤初期,cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后6h开始增加,32d仍然有很多阳性细胞重叠。结论脑外伤后cathepsin-B和-D被激活,其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活,之后(6h后)则与caspase-3起协同作用,共同促进细胞死亡;cathepsin-B和-D表达的时程变化对于脑外伤的法医学诊断和中晚期的时间推断有参考意义。

姜黄素对白血病K562细胞增殖抑制作用的研究

目的:探讨姜黄素(curcumin)对白血病K562细胞增殖抑制的作用机制。方法:采用MTT法测定curcumin对K562细胞增殖的抑制作用;分别应用AO/EB和MDC荧光染色观察给药后凋亡和自噬的发生;检测LDH漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-MA后curcumin抑瘤作用的变化。结果:Curcumin可显著抑制K562细胞生长,诱导其发生自噬和凋亡;给药后阻断自噬其细胞毒性作用减弱。结论:curcumin能诱导白血病K562细胞的自噬和凋亡从而提高了抗癌的敏感性。

沙苑子黄酮及表没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠慢性肝损伤的保护作用

沙苑子为补益肝肾的传统中药，主要含有黄酮类、三萜苷类、有机酸、氨基酸、多肽、蛋白质、鞣质、甾醇、微量元素等成分。其中的沙苑子黄酮（flavonoids from astraKalus complanatus，FAC）具有明显的保肝和抗脂质过氧化作用^[1]。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是茶多酚中的重要活性成分，

wnt信号转导通路与肝纤维化

肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏对各种慢性肝损伤的代偿反应所形成的一种肝脏疤痕组织,并导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、细胞群和细胞因子的复杂改变。肝星状细胞(HSC)的激活并转化为肌成纤维细胞(MFB)是肝纤维化发生的中心环节,而HSC的激活需要通过细胞内的信号转导才能实现,研究发现HSC激活过程中存在wnt信号转导通路。近年来,针对wnt信号转导通路在肝纤维化进程中的作用正成为新的研究热点。

氯胺酮致小鼠产生类精神分裂症的行为改变

目的对氯胺酮单次或连续给药后小鼠所产生的类似精神分裂症症状进行观察,以评价不同剂量氯胺酮造模的可行性。方法40只雄性昆明种小鼠,随机分为生理盐水对照组、氯胺酮小剂量(25mg/kg)、中剂量(50mg/kg)和大剂量(100mg/kg)组,腹腔注射给药,1次/d,连续7d。观察小鼠的行为学变化。结果单次注射氯胺酮后,大剂量组小鼠有明显的运动亢进、刻板行为及共济失调现象(P<0.01);连续注射7d氯胺酮后,中剂量组小鼠出现了运动亢进、刻板行为及共济失调(P<0.05),大剂量组小鼠刻板行为及共济失调现象更为显著(P<0.01)。结论单次或连续注射氯胺酮均可诱导小鼠产生类似精神分裂症的症状,且大剂量时症状更为显著,连续注射后症状更为稳定。

泛素-蛋白酶体通路在细胞生存和肿瘤发生中的作用

泛素-蛋白酶体通路在正常细胞和病变细胞的蛋白降解中起着十分重要的作用。在肿瘤的发生发展中,该通路与肿瘤细胞周期失控和自噬等方面有着紧密的内在联系。该文综述了最近几年在肿瘤发生和发展中与泛素—蛋白酶体通路相关的最新研究进展,通过对泛素—蛋白酶体通路某些异常蛋白的深入探讨,为肿瘤的药物治疗提供新的思路,为抗肿瘤新药研发提供更多的分子理论依据。