转录因子T-bet/GATA-3在复发性口疮患者免疫失衡中的作用

目的:探讨复发性口疮(RAU)患者免疫失衡中,T细胞特异转录因子T-bet和GATA-3的失衡表达。方法:密度梯度离心法分离RAU患者和对照组外周血单个核细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法和Westernblot法分别检测RAU患者和对照组外周血单个核细胞中T-bet和GATA-3基因和蛋白的表达。结果:对照组和RAU患者外周血单个核细胞中,T-betmRNA表达分别为(0.73±0.14)和(0.12±0.04),T-bet蛋白表达分别为(0.73±0.18)和(0.24±0.09),两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);对照组和RAU患者外周血单个核细胞中,GATA-3mRNA表达分别为(0.89±0.11)和(1.30±0.13),GATA-3蛋白分别为(1.09±0.16)和(1.80±0.16),两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);对照组T-bet/GATA-3mRNA表达量的比值(0.82±0.12),明显高于RAU组(0.09±0.03,P<0.01),对照组T-bet/GATA-3蛋白表达量的比值(0.75±0.13),高于RAU组(0.13±0.05)(P<0.01)。结论:失衡表达的转录因子T-bet/GATA-3在RAU免疫失衡中可能起重要作用。

人乳头瘤病毒11型L1 DNA疫苗质粒的构建和鉴定

目的:构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1DNA疫苗质粒。方法:从尖锐湿疣病变组织中提取DNA制备模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增HPV11-L1基因,将L1基因经双酶切后克隆到pcDNA3 1(+)中,测序鉴定。结果:从病变组织中扩增出了全长HPV11-L1基因,并正向插入表达载体pcDNA3 1(+)中,转化JM109扩增后经酶切和测序鉴定,证实克隆成功。结论:HPV11-L1DNA疫苗质粒的构建为今后进行防治尖锐湿疣的动物实验和临床实验奠定了基础。

人乳头瘤病毒11型E7与共刺激分子CD80嵌合DNA疫苗质粒的构建及鉴定

目的:构建人乳头瘤病毒11型(HPV ll)E7与共刺激分子CDS0嵌合DNA疫苗质粒。方法:从尖锐湿疣病变组织中提取DNA制备模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增HPV ll-E7基因,经双酶切后定向克隆到pcDNA3.1(+)中,获得pcDNA3.1(+)/HPV llE7,测序鉴定后,再用PCR方法扩增去除终止密码子的E7基因片段,按上述方法插入质粒pcD-NA3.1(+)/CD80中CD80上游,构建pcDNA3.1(+)/HPV llE7-CD80融合基因真核表达质粒。结果:去除终止子的E7基因片段成功正向插入CD80上游,双向测序分析显示序列无误,pcDNA3.1(+)/HPV llE7-CD80嵌合真核表达质粒构建成功。结论:HPV ll-E7/CD80嵌合DNA疫苗质粒构建成功,为研究该疫苗在尖锐湿疣防治中的作用奠定了基础。

CD80作为分子佐剂增强HPV11 E7免疫效果的观察

构建的人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）11型E7基因DNA真核表达质粒，在真核细胞获得有效表达。为增强其作为尖锐湿疣治疗性疫苗的免疫效果，现将E7基因与协同刺激分子CDS0（B7-1）进行连接重组，构建HPV11E7-CD80嵌合DNA真核表达质粒，并将其免疫小鼠，研究其诱导的免疫效应。

黄芪治疗复发性阿弗他溃疡疗效分析及作用机理探讨

目的:观察黄芪治疗复发性阿弗他溃疡(RAU)的临床疗效,并探讨黄芪对RAU患者失衡表达转录因子T-bet/GATA-3的调节作用。方法:健康对照组25例,RAU患者65例随机分为RAU常规治疗组和黄芪治疗组,观察治疗后1年溃疡复发情况;酶联免疫吸附测定法检测血清中白细胞介素(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量;Westernblot法检测外周血单个核细胞中T-bet和GATA-3蛋白表达。结果:黄芪治疗组总有效率为90.91%,显著高于常规治疗组25%(P<0.01)。血清IL-4含量,对照组(25.45±3.69)pg/ml,显著低于RAU常规治疗组(42.32±4.47)pg/ml,(P<0.01),治疗组(32.35±5.24)pg/ml显著高于对照组(P<0.01)。血清IFN-γ含量,对照组(24.53±2.69)pg/ml显著高于常规治疗组(17.57±0.68)pg/m(lP<0.01),黄芪治疗组(21.60±3.03)pg/ml显著低于对照组(P<0.01),显著高于常规治疗组(P<0.01)。外周血单个核细胞中T-bet蛋白表达,健康对照组(0.75±0.17),显著高于常规治疗组(0.21±0.09)(P<0.01),黄芪治疗组(0.56±0.23),显著高于常规治疗RAU组(P<0.01),显著低于对照组(P<0.01);外周血单个核细胞中GATA-3蛋白表达,健康对照组(1.06±0.20),显著低于常规治疗组(1.82±0.17)(P<0.01),黄芪治疗组(1.04±0.27),显著低于常规治疗组(P<0.01),与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:黄芪通过调节转录因子T-bet和GATA-3的平衡表达,纠正RAU患者Th1/Th2细胞亚群失衡的免疫异常,有效治疗RAU溃疡复发。

人乳头瘤病毒11型DNA疫苗协同CD80基因诱导小鼠特异性免疫反应

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)11E7、L1-E7 DNA疫苗质粒协同共刺激分子CD80诱导的特异性免疫反应。方法将所构建的pcDNA3.1(+)/HPV11E7、E7-CD80、L1-E7 DNA疫苗质粒分别经肌内注射免疫小鼠,并设L1-E7质粒与CD80质粒共同注射组,PCR和RT-PCR检测质粒DNA的组织分布和目的基因RNA转录,MTT法测脾淋巴细胞增殖活性,ELISA检测脾淋巴细胞培养上清细胞因子的表达水平及血清抗体的水平。结果免疫小鼠后,质粒主要分布在注射部位。DNA疫苗诱导机体产生特异性脾淋巴细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ增加,产生HPV11E7 IgG/L1 IgG抗体;与CD80基因嵌合后,脾淋巴细胞增殖和分泌活性显著增强;与CD80联合免疫组所诱导的细胞免疫反应和体液免疫均显著强于L1-E7单独免疫组。结论HPV11 DNA疫苗能诱导小鼠产生特异性免疫反应,CD80可加强其免疫效果。