肺癌放疗抵抗相关长链非编码RNA差异表达谱的筛选及功能研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在肺癌放疗抵抗中的作用, 并观察lncRNA微小RNA(miR)-4453对肺癌放疗抵抗的影响。方法 H460细胞(大细胞肺癌细胞)购自上海中国科学院细胞研究所。应用梯度增加X射线剂量法对H460细胞反复照射, 剂量分别为前3次4 Gy, 中4次6 Gy, 后3次8 Gy, 累积剂量60 Gy。照射完成后放疗抵抗株命名为H460R细胞。通过高通量测序, 筛选出亲本株H460细胞与抵抗株H460R细胞差异表达的lncRNAs。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术, 对H460细胞与H460R细胞差异表达的lncRNAs和mRNAs进行验证。对放疗抵抗细胞株H460R细胞分别转染干扰序列[小干扰RNA(siRNA)-miR-4453]和对照序列(siRNA-NC)。采用Transwell法分析H460细胞、H460R细胞、siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞的迁移能力。采用流式细胞术分析siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞凋亡比例。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测H460细胞、H460R细胞、siRNA-NC细胞和siRNA-miR-4453细胞放疗剂量的半数抑制浓度(IC50)值。组间比较采用t检验。结果放疗抵抗株H460R细胞的IC50值高于对照组H460细胞的IC50值[(28.580±4.181) Gy比(7.788±0.352) Gy, t=8.58, P<0.05]。H460R细胞株穿过Transwell膜的细胞数量高于对照组H460细胞的数量[(532.700±21.060)个比(220.000±14.150)个, t=11.09, P<0.05]。高通量测序结果表明, 在亲本H460和放疗抵抗株460R细胞中共检测到71个差异表达的lncRNAs和1461个差异表达的mRNAs。对H460R细胞敲除miR-4453后, 检测miR-4453在siRNA-NC对照组中的表达水平明显高于siRNA-miR-4453组[(0.032±0.008)比(0.001±0.000), t=6.860, P<0.05]。对照组siRNA-NC细胞的IC50值高于干扰组siRNA-miR-4453细胞的IC50值[(29.240±1.640) Gy比(16.503±1.713) Gy, t=9.30, P<0.05]。对照组siRNA-NC细胞的迁移能力高于干扰组siRNA-miR-4453细胞的迁移能力[(611.700±26.850)个比(317.700±11.860)个, t=19.54, P<0.05]。对照组siRNA-NC细胞的凋亡低于干扰组siRNA-miR-4453细胞的凋亡[(6.593±0.157)%比(9.453±0.175)%, t=17.93, P<0.05]。结论亲本株与放疗抵抗细胞株的lncRNAs的表达差异有统计学意义。而lncRNA miR-4453表达水平的改变, 影响肺癌细胞的放疗敏感性及迁移能力。

慢性阻塞性肺疾病患者肺癌高危筛查的研究进展

肺癌和慢性阻塞性肺疾病(COPD)是两种密切相关的疾病,对公共卫生有很大影响。每年对胸部进行低剂量计算机断层扫描的筛査可以显著降低肺癌病死率。COPD与肺癌发病风险增加有关。流行病学研究发现COPD患者与无气流阻塞的患者相比,肺癌风险增加2〜4倍。COPD合并肺癌发病风险增加似乎是由于肺气肿引起的。肺气肿已被证明是一个重要的肺癌危险因素。COPD合并肺癌筛査评分以确定COPD合并肺癌发病高危人群,是COPD人群肺癌筛查的一项有益的探索.需要更多临床实践的证明。