Mer功能研究进展

Mer是Axl受体酪氨酸激酶家族中的一员,其受体Gas6和Mer结合后可以激活Mer的酪氨酸激酶活性,并激活下游信号传导途径,在细胞炎症、凋亡、血液肿瘤发生发展以及血栓于止血等方面发挥作用。本文主要就近年来Mer的功能研究进展以及Mer的抗血栓和抗血液肿瘤潜在治疗前景进行综述。

抗vWF与GPIb-IX结合部位的噬菌体呈现型单链抗体制备及功能研究

目的:为了研制新型特异性抗血栓制剂。方法:利用噬菌体展示文库技术筛选与vWF- A1区有高亲合力单链抗体(ScFv) ;基因重组的方法构建高效表达载体pET 2 0b(+) ScFv ,在大肠杆菌中诱导表达;夹心ELISA方法鉴定此单抗的抗原结合活性;瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验(RIPA)测定ScFv对血小板聚集的抑制作用。结果:噬菌体展示技术筛选的ScFv在大肠杆菌中成功地诱导表达,表达的ScFv占菌体总蛋白的4 1% ,以包涵体形式存在;经纯化复性的ScFv可以与vWF、rvWF- A1、rvWF- A1 A3结合,但不与rvWF A3、BSA反应;ScFv具有抑制RIPA功能,抑制率为73. 7%。结论:在大肠杆菌中高效表达的噬菌体展示技术筛选的抗vWF A1区ScFv可特异性与vWF- A1区结合,而抑制瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集,显示出很好的应用前景,为研制新型抗栓药物奠定基础。

再生障碍性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿血细胞GPI-AP缺陷分析

目的 探讨外周血细胞糖基磷脂酰肌醇锚蛋白(ＧＰＩ－ＡＰ)缺陷与再生障碍性贫血(ＡＡ)和阵发性睡眠性血红蛋白尿(ＰＮＨ)的关系。方法 用ＲＥＤＱＵＡＮＡＮＴ ＣＤ５５/ＣＤ ５９、ＣＥＬＬＱＵＡＮＴＣＤ５５/ＣＤ５９试剂盒和流式细胞术测１５例正常人、４７例ＡＡ和４２例ＰＮＨ或ＡＡ－ＰＮＨ综合征患者外周血细胞ＧＰＩ－ＡＰ的表达。结果 ４７例ＡＡ中 １６例(３４．０４%)血细胞ＣＤ５５和ＣＤ５９表达不同程度降低,且缺陷细胞百分率明显低于ＡＡ－ＰＮＨ综合征和ＰＮＨ患者(Ｐ＜０．０１)。结论ＡＡ、ＡＡ－ＰＮＨ及ＰＮＨ患者外周血细胞存在不同程度的ＧＰＩ－ＡＰ缺乏,缺陷细胞百分率检测可作为相关疾病诊断与转化的参考。

脾内免疫制备抗人血小板第4因子单克隆抗体和鉴定

目的制备抗人血小板第４因子单克隆抗体用于ＰＦ４的基础研究和临床血小板活化状态的评价。方法用常规和脾内免疫相结合的方法免疫Ｂａｂｌ／ｃ小鼠，经细胞融合和ＥＬＩＳＡ筛选后，进行单抗的特性和特异性研究。结果成功制备了一株抗人 ＰＦ４单克隆抗体（ＳＺ－ ９５），ＥＬＩＳＡ显示上清和腹水效价分别为 ２ × １０-3和 ５ × １０-6，Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ证实ＳＺ－９５特异性识别人血小板第４因子。结论常规免疫结合脾内免疫是制备抗低分子量保守蛋白质单抗的有效方法，制备的ＳＺ－９５具有科研运用和临床应用的良好前景。

常规免疫联合脾内免疫制备单克隆抗体

目的 探索一种新的简便有效的应用微量抗原使脾细胞产生免疫反应 ,制备单克隆抗体的实用方法。方法 在常规方法初次免疫后 ,用脾内直接注射法进行冲击免疫 ,只用微量的抗原就使Balb/c小鼠的脾细胞在短时间内产生免疫反应。结果 经细胞融合和ELISA筛选后 ,成功获得一株抗人PF4 单克隆抗体 (SZ - 95 ) ,抗体亚型为IgG1,Westernblot证实其特异性识别人血小板第 4因子。 结论 常规免疫结合脾内免疫是制备抗低分子量保守蛋白质单抗的有效方法。

Ph阳性急性淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植后无白血病生存的危险因素分析

目的:探讨移植前BCR-ABL基因转录本水平对接受异基因造血干细胞移植的Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph^+ALL)移植后无白血病生存率(LFS)和预后的影响。方法:收集2006年07月至2014年11月在我院住院治疗并接受异基因造血干细胞移植的107例Ph^+ ALL患者临床资料,分析移植前有关临床因素对移植后LFS的影响。结果:107例Ph^+ ALL患者中,男性64例,女性43例,移植中位年龄为30(7-54)岁;总复发率为35.5%(38/107),复发中位时间为移植后6.9(1.5-40.7)个月;总死亡率为36.4%(39/107),51.3%(20/39)患者死于复发,25.6%(10/39)患者死于感染,中位随访时间为移植后19.8(3.6-83.7)个月。107例中,49例移植前BCR-ABL阴性,49例移植前BCR-ABL阳性,9例BCR-ABL资料丢失。阴性患者组5年估计累积复发率(CIR)、非复发死亡率(NRM)及总体生存率(OS)分别为26.5%、29.5%及41.6%。阳性患者组5年估计CIR、NRM及OS分别为64.4%、8.9%及48.9%。移植前基因阴性组CIR显著低于阳性组(P<0.001),NRM高于阳性组(P=0.030),两组OS相近(41.6%对48.9%,P=0.497)。多因素分析提示移植前BCR-ABL+(P=0.016)及疾病状态≥CR2(P<0.001)为LFS独立危险因素,而移植年龄为影响移植后总生存主要因素(P<0.001)。结论:复发与感染为Ph^+ ALL异基因造血干细胞移植后主要死因,疾病状态≥CR2以下移植及移植前BCR-ABL+均为Ph^+ ALL异基因造血干细胞移植后LFS独立预后危险因素。

急性缺血性卒中的溶栓治疗

急性缺血性卒中的溶栓治疗是目前医学研究的热点。近年来的研究表明,溶栓治疗的时间窗应个体化。新的影像学技术有助于判断缺血半暗带和选择适合溶栓的病例。溶栓治疗的方法包括静脉溶栓、动脉溶栓和动静脉联合溶栓。影响溶栓疗效的因素包括从发病到开始溶栓治疗的时间、患者基础状况、溶栓药和联合用药、入选和治疗标准的执行情况以及是否在卒中单元内监护。

活性氧参与血小板凋亡调控的研究

目的 探讨活性氧在血小板凋亡中的调控作用.方法 健康人洗涤血小板用N-乙酰半胱氨酸（NAC）、辛可卡因和凝血酶单独或联合处理.用活性氧检测试剂盒结合流式细胞术检测血小板活性氧的产生和线粒体膜电位（△Ψm）的改变,用Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）及抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达情况.结果 ①NAC＋辛可卡因组活性氧荧光值低于单用辛可卡因组（0.66±0.11对1.06±0.08,P=0.001）,NAC＋凝血酶组活性氧荧光值低于单用凝血酶组（0.45±0.05对0.71±0.11,P=0.001）.②NAC＋辛可卡因组线粒体膜电位正常的血小板百分数高于单用辛可卡因组[（86.30±9.37）％对（13.52±3.01）％,P＝0,000],NAC＋凝血酶组高于单用凝血酶组[（93.00±3.03）％对（76.58±5.28）％,P＝0.000].③单用辛可卡因组caspase-3活化后的裂解片段明显多于DMSO对照组,NAC＋辛可卡因组caspase-3活化后的裂解片段明显减少.④NAC＋辛可卡因组Bcl-xL的表达较单用辛可卡因组明显增多,NAC＋凝血酶组Bcl-xL的表达高于单用凝血酶组.结论 NAC对辛可卡因或凝血酶引起的血小板凋亡具有明显的抑制作用,这种抑制作用主要是通过对活性氧的调控而实现的.

异基因造血干细胞移植后EBV感染临床危险因素分析

目的 分析异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后EBV感染情况及其危险因素.方法 回顾性分析2012年1月1日至2014年7月31日单中心736例行allo-HSCT患者的临床资料,观察EBV血症、临床诊断的EBV相关疾病（EBV病）及淋巴细胞增殖性疾病（PTLD）发生情况,并分析其危险因素.结果 736例患者中男302例,女434例,中位年龄31（2～62）岁,其中181例患者发生EBV感染,总发生率为24.6％,EBV感染发生的中位时间为57（16～892）d.EBV感染患者中,EBV血症163例（90.0％）,EBV病13例（7.2％）,PTLD 5例（2.8％）.130例患者EBV病毒载量高于1.0＆#215; 104拷贝数/ml,其中67例使用利妥昔单抗抢先治疗,该组患者EBV病及PTLD总发生率显著低于未使用利妥昔单抗抢先治疗患者（6.0％对22.2％,P=0.009）.所有感染EBV患者的总病死率为27.6％,单纯EBV血症病死率为24.5％,EBV病病死率为53.8％,PTLD病死率为60.0％.单因素及多因素分析均提示预处理过程中采用抗胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）、HLA不全相合移植、慢性移植物抗宿主病（cGVHD）及CMV感染是allo-HSCT后发生EBV感染的独立危险因素.且EBV初次感染发生时间与采用骨髓或脐血移植（OR=1.156,95％CI1.022～2.250,P=0.039）及cGVHD的发生（OR=0.620,95％ CI 0.453～0.849,P=0.003）密切相关.结论 EBV感染为allo-HSCT后常见并发症,EBV病及PTLD病死率高.EBV感染发生的独立危险因素为处理过程中采用ATG、HLA不全相合移植、cGVHD及CMV感染,采用利妥昔单抗抢先治疗能明显减少EBV相关疾病的发生.

急性早幼粒细胞白血病诱导分化综合征个体化预测模型列线图初探

目的对初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）诱导治疗期间出现分化综合征（DS）进行危险因素分析，建立DS发生预测模型列线图，并验证其准确度。方法2011年1月1日至2013年12月31日收治的130例确诊的典型APL患者组成建模组。经单因素筛选临床变量后，应用Logistic回归模型进行多因素分析，确立进入最终模型变量；然后应用R软件建立预测模型列线图，运用Bootstrap法内部验证，一致性指数（C-index）用来评价模型准确度，并绘制出实际观察和列线图预测的DS发生率校准曲线。结果130例APL患者中DS发生率为30．0％，多因素分析显示体重指数（BMI）924kg／m2及诱导治疗期间未用激素预防DS为DS的独立危险因素。列线图预测DS发生率C-index为0．818（95％CI0．741-0．895），校准曲线显示列线图预测与实际观察的DS发生率有良好的一致性。结论成功构建APL诱导治疗期间DS发生率个体预测列线图，此系统与临床实际观察有良好的一致性且更具准确性及盲观性。

伊马替尼治疗早期BCR-ABL转录本水平在251例慢性髓性白血病患者中的预后价值

目的 了解慢性髓性白血病（CML）患者伊马替尼治疗早期BCR-ABL转录本水平的预后价值,为CML患者早期预后评估和治疗选择提供依据.方法 回顾性分析251例接受伊马替尼—线治疗CML慢性期（CML-CP）患者的临床资料,分别比较治疗后3个月及6个月不同BCR-ABL转录本水平患者的无进展生存（PFS）率及总体生存（OS）率,并采用卡方检验及Logistic回归分析方法分析疾病进展的危险因素.结果 伊马替尼治疗3个月BCR-ABL转录本＞10％组（92例）、＞1％～10％组（94例）、≤1％组（65例）的PFS率分别为53.3％、71.3％、86.2％ （P＜0.05）,OS率分别为92.4％、96.8％和93.8％ （P＞0.05）.伊马替尼治疗后6个月时BCR-ABL转录本＞10％组（22例）、＞1％～10％（50例）组、≤1％（110例）组PFS率分别为27.3％、66.0％和82.7％（P＜0.05）,OS率分别为86.4％、94.0％、100％（P＜0.05）.Logistic回归分析结果显示3个月及6个月BCR-ABL转录本水平为影响疾病进展的独立危险因素.结论 伊马替尼治疗3个月及6个月BCR-ABL转录本水平对CML患者预后评估具有重要价值.

硼替佐米为基础的方案治疗华氏巨球蛋白血症5例

华氏巨球蛋白血症（Waldenstrm＇s macroglobulinemia,WM）是B淋巴细胞增殖性疾病,其特点是骨髓中出现浆细胞样淋巴细胞浸润,血清中检测到单克隆IgM。无症状的WM患者可不予以治疗,但应定期随访观察,当患者出现以下症状时应给予治疗：血红蛋白〈100g/L、血小板〈100×10^9/L、明显的腺体肿大或器官肿大、有临床症状的高粘滞血症、严重的神经病变、淀粉样变、冷球蛋白血症、冷凝集素病以及疾病转化的证据。