伴有血液学异常的植物固醇血症20例临床特征分析

目的分析伴有血液学异常的植物固醇血症患者的临床及实验室特征。方法回顾性分析2004至2017年在苏州大学附属第一医院就诊的20例植物固醇患者的临床资料,并进行外周血细胞、血脂分析、红细胞渗透脆性实验;高效液相色谱法检测血清中豆固醇、二氢胆固醇和谷固醇含量;PCR扩增先证者和家系成员ABCG5/8基因外显子及侧翼序列并结合测序分析突变情况。结果20例植物固醇患者均曾被误诊为免疫性血小板减少或Evans综合征。所有患者均有脾肿大切除史,其中17例患者以血小板减少就诊并伴有不同程度的黄褐瘤,部分患者存在肝功能异常(9例)、早发型动脉粥样硬化(5例)及关节炎(4例)等。外周血溶血检查发现红细胞脆性增加,血涂片分析发现所有患者血小板大小不等、总体偏大,口形红细胞增多。患者血清谷固醇和豆固醇含量分别为331.05(276.00,670.20)mg/L和244.60(193.78,399.40)mg/L,约为健康人的10倍及24倍。测序分析共发现了ABCG5/8基因中14种突变,2/3位ABCG5基因[(E22X)、p.(R446X)、g.ISV7+3G>A、p.(R446X)、p.(R419H)、g.ISV7+3G>A、p.(G90E)、p.(R389H)及g.7+2G>A];而1/3位ABCG8基因[p.(M614-K628del)、p.(E25X)、p.(L86P fs X185)、p.(R263Q)、p.(E500D fs X604)、p.(G674R)],其中ABCG5 p.(R446X)突变有重现性。结论血小板减少、口形红细胞增多及脾大是植物固醇血症患者特殊的临床表现,外周血小板及红细胞形态变化是该类患者典型的特征,临床确诊需进行ABCG5/8基因分析及血清植物固醇测定。

流式微球技术检测血小板特异性自身抗体方法的建立及临床应用

目的建立流式微球技术检测血小板特异性自身抗体的方法，探讨其临床应用价值。方法用包被抗GPIb（单抗SZ2）、抗GPIIb（单抗SZ22）、抗GPⅢa（单抗SZ21）、抗GPⅡb／Ⅲa（单抗7E3）单克隆抗体的微球捕获血小板特异性抗原抗体复合物，加入FITC标记的羊抗人多克隆抗体，在流式细胞仪上进行检测分析。各取1份SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性和阳性的血小板标本进行批内精密度测定，重复制备20次，上流式细胞仪检测MFI，计算批内CV。各取1份SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性和阳性的血小板标本，每天上流式细胞仪检测1次，共测定8d，计算批问CV。选取2006年3月至2008年12月苏州大学附属第一医院85例ITP患者、17例NITP患者和50名健康对照者，利用流式微球技术检测4种血小板自身抗体SZ2、SZ22、SZ21、7E3的MFI，利用ROC曲线分析4种血小板自身抗体对诊断ITP的敏感度和特异度。同时采用MAIPA技术对4种血小板自身抗体进行检测，并与流式微球技术检测的敏感度进行比较。结果SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性标本的批内CV分别为3．26％、2．86％、1．65％、4．94％，阳性标本的批内CV分别为6．16％、4．88％、5．20％、5．85％。SZ2、SZ22、SZ21、7E3抗体阴性标本的批问CV分别为5．86％、4．74％、5．69％、7．56％，阳性标本的批间CV分别为7．53％、5．49％、7．11％、6．25％。ITP组、NITP组和健康对照组SZ2抗体的MFI别为1．49（0．88～16．24）、1．12（1．00～1．33）、1．01（0．83～1．37），差异有统计学意义（H=36．89，P〈0．01），SZ22抗体的MFl分别为1．55（0．84—11．30）、1．13（1．00—1．29）、0．98（0．85～1．24），差异有统计学意义（H=28．41，P〈0．01），SZ21抗体的MFI分别为1．50（0．87～11．04）、1．13（0．97～1．32）、1．05（0．85—1．48），差异有统计学意义（日=54．42，P〈0．01），7E3抗体的MFI分别为1．51（0．84～9．81）、1．05（0．86～1．13）、1．03（0．74—1．28），差异有统计学意义（H=31．97，P〈0．01）。流式微球技术检测4种抗体SZ2[临界值（cut—off值）=1．37]、SZ22（cut—off值=1．24）、SZ21（cut—off值=1．48）和7E3（cut—off值=1．28）所对应的AUC分别为0．86、0．90、0．87和0．84，确定的敏感度分别为58．82％（50／85）、52．94％（45／85）、52．94％（45／85）、51．76％（44／85）。流式微球技术联合检测4种血小板特异性自身抗体对诊断ITP的敏感度为74．12％（63／85），高于改良间接MAIPA技术的50．59％（43／85），差异有统计学意义（X^2=6．78，P〈0．05）。结论流式微球技术可以同时进行4种自身抗体的联合检测，为ITP的临床诊断提供了一种新方法。