浅谈血液内科教学查房现状及改进策略

教学查房是我国临床医学教育的基本模式,以培养医学生的临床思维能力为主要目的,与日常医疗查房有本质区别。鉴于血液内科住院患者易感染、易出血等特殊性,传统的教学查房较难落实。本文拟重点分析当前血液内科教学查房现状,并提出可行性改进措施。

恶性血液病患者化疗后出血的临床分析

目的分析恶性血液病患者化疗后的出血状况,探讨出血与血小板减少的相互关系.方法评价128例恶性血液病患者化疗后的出血情况,监测患者化疗前后的血小板计数,比较出血者与非出血者的血小板减少程度,分析出血严重程度与血小板分布间的规律.结果 128例恶性血液病患者化疗后47例(36.7%)有出血征象,低龄组出血发生较少(P＜0.05),不同性别、病种间出血的发生率没有显著性差异;出血第一天,14.9%的患者血小板数≤10×109/L,11～20×109/L占27.7%,＞20×109/L占57.4%;化疗开始第2周起出血患者的最低血小板数明显低于未出血组(第2、3周,P＜0.01;第4周,P＜0.05),而化疗前与化疗开始1周内两组患者间差异不明显(P＞0.05);轻度出血患者各阶段血小板数的分布与中、重度患者无显著性差异(P＞0.05).结论出血是恶性血液病患者化疗后的常见并发症,年龄的增长可导致出血容易发生.血小板减少与出血明显相关,但血小板数极度降低引起的出血比例并不大,出血的严重程度也与血小板数的分布无关.

恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程

近期有关专家来信提示本刊,有关论文中涉及恶性血液病细胞遗传学检测方法及结果的描述存在一些错误或不规范之处。为使相关临床医师和科研人员进一步了解和掌握血液病细胞遗传学的检测方法及流程,提高科研及写作能力,我刊特邀请苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所薛永权教授撰写"恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程"一文,并予刊出,旨在规范恶性血液病的细胞遗传学检测方法及流程。

HL-60/VCR多药耐药细胞株耐药机制的研究

背景与目的:白血病细胞对化疗药物的耐药是白血病治疗失败的主要原因,多药耐药细胞株为白血病多药耐药机制和逆转多药耐药性的研究提供了良好的模型。为探讨药物诱导产生多药耐药机制,我们对HL-60/VCR细胞的耐药机制进行了研究。方法:应用流式细胞术和一组抗体,对药物敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60/VCR细胞的耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP、BCRP、GST-π,以及凋亡调节蛋白bcl-2、bax、bcl-x、bad的表达进行分析。结果:在HL-60/VCR细胞株中,耐药相关蛋白P-gp、MRP、BCRP、GST-π分别是其在HL-60细胞株中的18.62、1.19、1.50、1.32倍,而LRP无变化。凋亡抑制蛋白bcl-2、bcl-x分别是其在HL-60细胞株中的2.48、1.25倍,凋亡调节蛋白bad是HL-60细胞株中的1.08倍;而凋亡诱导蛋白bax反而降低,是HL-60细胞株中的0.88倍。结论:多种机制参与HL-60/VCR的多药耐药,涉及耐药蛋白P-gp、MRP、BCRP和GST-π的表达增强,而且凋亡调节蛋白bcl-2、bax、bcl-x、bad均可能参与其耐药机制的形成。

CD4^+CD25^+Foxp3^+T调节细胞与小鼠异基因造血干细胞移植GVHD相关性研究

目的探讨CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞与小鼠GVHD发生的相关性。方法取8～10周龄的SPF级CB6F1小鼠(H-2b/d,♀)30只,随机分为正常对照组、同基因移植组和GVHD组,每组10只,正常对照组不接受照射和移植,同基因移植组小鼠照射后接受CB6F1小鼠骨髓细胞(1×107)和脾细胞(3×107),GVHD组小鼠照射后接受C57BL/6(H-2b,♂)小鼠骨髓细胞(1×107)和脾细胞(3×107)。在发生GVHD的时间点检测3组小鼠脾细胞CD4+CD25+T细胞和foxp3 mRNA的表达。结果正常对照组、同基因移植组和GVHD组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞的比例分别为(8.47±1.03)%、(15.40±0.80)%和(24.03±0.85)%,均有显著性差异(P<0.01)。GVHD组小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达水平明显低于正常对照组和同基因移植组,有显著性差异(P<0.001)。结论CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞与小鼠GVHD发生呈负相关,发生GVHD时小鼠脾细胞中CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞明显减低。

C-KIT突变在伴t(8;21)或inv(16)的急性髓系白血病中的研究进展

近来,在急性髓系白血病(AML)中Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族中的成员C-KIT基因的异常引起了人们的重视。在C-KIT突变中,8号外显子突变(mutKIT8)和17号外显子突变(mutKIT17)成为了研究的热点,其在伴有t(8;21)或inv(16)的AML中较常见,与临床预后密切相关。国内外的大量研究表明:C-KIT突变预示着有较高的复发率,预后不良,特别是mutKIT17;伊马替尼通过抑制C-KIT受体酪氨酸激酶活性,对伴有C-KIT突变的患者有良好的疗效,而那些伴有C-KIT激酶结构域D816密码子突变的恶性细胞对其不敏感,但对达沙替尼、PKC412、AP23464、AP23848等敏感。可见,筛查C-KIT突变对预后判断和指导治疗具有重要意义。

急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能状态的研究

目的研究急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能,评价白血病化疗后T细胞免疫状态。方法通过real-time PCR检测56例急、慢白血病患者化疗后外周血T细胞受体重排删除环(TREC)含量,同时检测50例正常健康人TREC水平以确定正常值范围。结果正常人TREC含量为3351.06±3711.12拷贝/105细胞,并且正常人TREC含量与年龄呈负相关。37例急性白血病患者化疗后TREC含量为307.87±433.26拷贝/105细胞;19例慢性粒细胞性白血病患者化疗后TREC含量为314.23±868.63拷贝/105细胞。结论正常人外周血TREC含量与年龄呈相关。急、慢性白血病患者化疗后TREC含量均远远低于正常人水平(P<0.001),但两组患者之间无明显差异(P>0.05)。急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能低下,T细胞免疫缺陷。

雷帕霉素诱导Balb/c小鼠CD4^+ CD25^+ foxp3^+调节性T细胞增殖

目的探讨雷帕霉素对Balb/c小鼠CD4+ CD25+ foxp3+调节性T细胞的作用。方法取8wk龄的SPF级Balb/c小鼠30只,随机分为两组,实验组每只灌胃雷帕霉素0.4mg.d-1,对照组灌胃每天予等体积无菌水,共3wk。无菌条件下肝素抗凝心脏采血,分离脾脏,制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾细胞CD4+CD25+T细胞,实时定量PCR检测小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达。结果实验组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+T细胞的比例分别为(9.95±4.65)%和(24.13±10.06)%,对照组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+T细胞的比例分别为(5.01±1.49)%和(8.48±3.19)%,差异均有显著性(P<0.01)。实验组小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达水平明显高于对照组,是对照组的6.029倍,差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素能够明显诱导Balb/c小鼠体内CD4+CD25+T细胞的增殖,并能提高foxp3+ mRNA的表达。

异基因造血干细胞移植早期TNF-α、IL-1β、IFN-γ改变的临床意义

本研究探讨异基因造血干细胞移植患者早期TNF-α、IL-1β、IFN-γ的变化规律,分析其在预处理过程中的改变情况及其与移植相关并发症之间的关系。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测95例异基因造血干细胞移植患者(其中aGVHD组43例,血栓组5例,感染组31例)预处理前后以及移植后各周内血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平的动态变化,以20例健康成人作为正常对照,观察预处理前后细胞因子的改变,探讨细胞因子和各并发症之间的关系。结果表明:预处理前TNF-α水平在aGVHD组已较正常升高(p(0.01),在其他患者中未见明显改变。在预处理第4天后所有患者TNF-α水平都较预处理前明显升高(p(0.05),预处理结束时TNF-α水平较预处理前降低。发生aGVHD、血栓或感染时,TNF-α水平均明显升高,以aGVHD组升高更为明显,血栓组TNF-α升高水平大于感染组(p(0.05)。血栓和aGVHD组的TNF-α水平在发病前2周即有升高,感染组病人在发病前未见改变。IL-1β在移植患者预处理各阶段未见明显变化,发生aGVHD、血栓、感染时IL-1β水平均有升高,以血栓组升高更明显,aGVHD组较感染组也明显升高(p(0.01)。IL-1β水平在血栓患者发病前2周见明显升高,而aGVHD组于发病前1周升高。IFN-γ水平在移植患者预处理过程中未见明显改变,在各并发症组之间变化不明显。结论:异基因造血干细胞移植过程中细胞因子存在着一系列改变,预处理可造成细胞因子TNF-α释放增加。在aGVHD发生时血清TNF-α水平明显升高,且较血栓患者升高更突出;在血栓发生时,血清IL-1β含量明显升高,并高于aGVHD患者。TNF-α、IL-1β水平的升高和移植相关并发症aGVHD及血栓性疾病的发生关系密切。动态监测TNF-α、IL-1β水平可预测aGVHD及血栓性病变的发生。

活化血小板表面膜糖蛋白的异位分布

目的观察血小板活化后表面一些抗原决定簇的动态改变,探讨其在血栓性疾病研究中的意义.方法以凝血酶与腺苷二磷酸(ADP)分别在不同时间段(0～30min)诱导正常人血小板活化,应用流式细胞仪检测其血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb,GPⅢa及P-选择素的表达;同时用全血法测定脑梗死患者相应抗原的改变.结果凝血酶及ADP活化血小板后均可导致GPⅠb表达呈现先下降又逐渐回升的可逆性分布趋势,各时间段引起的GPⅠb改变在两者之间都具有显著差异;GPⅢa表达在活化后初期变化不明显,10min后呈现递增趋势;两种活化剂均可促使P-选择素显著升高,并维持于高水平.脑梗死患者GPⅠb表达减少,P-选择素的表达远高于对照组,GPⅢa无变化.结论凝血酶与ADP均能介导血小板活化,以时间依赖的方式促使GPⅠb与GPⅢa逆转,同时P-选择素向外释放,而血小板表面活化相关性抗原的改变是反映体内血小板活化的重要指标.

mIL-10重组复制缺陷型腺病毒载体的构建及制备

目的构建小鼠白介素-10(mIL-10)重组腺病毒真核表达载体,为其体外表达及动物体内试验研究提供依据。方法以pORF5-mIL-10质粒为模板通过PCR方法扩增回收mIL-10,将其定向连接到腺病毒载体pSGCMV中,构建pSGCMV-mIL10质粒。此质粒与5型腺病毒质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经同源重组产生重组复制缺陷型腺病毒Ad5-mIL-10。纯化后Ad5-mIL-10在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定其滴度。结果扩增所得mIL-10经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序均证实为小鼠白介素-10,重组腺病毒Ad5-mIL-10经PCR鉴定正确,滴度达2.5×1010pfu/ml。结论成功构建了Ad5-mIL-10重组腺病毒载体系统,为研究IL-10在临床移植中的免疫学作用及基因治疗奠定基础。

骨原发弥漫大B细胞淋巴瘤行无关供体干细胞移植1例

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常见的类型,典型的DLBCL表现为淋巴结和结外快速生长的肿块,常伴发热、疲乏和盗汗。40%的DLBCL原发于结外,最常见部位是胃肠道（胃和回盲部）,单一起病于骨的很少见。本文报告1例单一起病于骨难治DLBCL患者经无关供体干细胞移植最后获得完全缓解和长期无病生存的诊治情况。1病案摘要患者女性,32岁。因＂反复左髋部酸痛半年余,加重伴发热、盗汗1周余＂于2010年9月1日入院。患者6个月前出现左髋部反复酸痛,未诊治。近1周来疼痛加重,

Imatinib治疗慢性髓细胞白血病及其它肿瘤的临床应用进展

格列卫(STI571,Imatinib)是最成功的合成酪氨酸激酶抑制剂,该药物于1998年6 月被首次用来治疗慢性髓细胞白血病,其疗效在不断改善并且几乎超过了人们的预测。 随后该药物也被用来治疗其他白血病及某些实体瘤,体外及体内实验均证实了该药具有 很好的治疗效果。

CMVPP65抗原监测无关供体造血干细胞移植后巨细胞病毒感染

目的利用免疫荧光组化方法对CMV-PP65抗原进行监测,探讨无关供体造血干细胞移植后CMV的感染率,危险因素和治疗情况。方法以37例无关供体造血干细胞移植患者为研究对象,移植14d后每周采集受者的抗凝血标本直到移植后3个月,之后每隔1～3个月采集一次受者的血标本直到移植后3年,3年后仍有CMV再次感染者继续采集患者标本,并进行动态观察。结果1、在2～50个月的随访期内,CMV首次检出的中位时间在50d,CMV病毒血症发生率59.46%(22/37)。严重GVHD患者和无严重GVHD患者CMV感染率无明显差异;2、CMV病毒血症患者对早期抗病毒治疗有效,CMV疾病发生率很低。结论无关供体造血干细胞移植后长期坚持CMV监测非常必要,有助于指导CMV病毒感染的治疗和预后评价。

输注供者自然杀伤细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响

目的探讨输注供者自然杀伤（NK）细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响。方法选取C57BL／6（H-2b）雄性小鼠为供者、CB6F1（H-2b／d）雌性小鼠为受者。移植前制备供者的骨髓细胞（BMC）、脾细胞（sC）及脾NK细胞，NK细胞经体外培养扩增和激活；所有受者均接受直线加速器X线全身照射（TBI）预处理。TBI后将受者分为4组（每组10只），分别进行单倍型相合造血干细胞移植。单纯TBI组：TBI后不输注细胞，仅作为对照；单纯BMC输注组：输注5×10^6个BMC诱发GVHD组：输注5×10^6个BMC＋1．5×10^7个SC；NK细胞输注组：输注5×10^6个BMC＋1．5×10^7个SC＋1×10^7个NK细胞，并腹腔注射100ng重组人白细胞介素2（rhIL-2）和1μgrhIL-15，持续7d。移植后观察各组受者GVHD的发生情况，并对各组受者进行组织病理学、供者细胞嵌合度和免疫功能重建等检测。另取TBI后受者20只，设白血病复发组和白血病治疗组，每组10只。白血病复发组：输注5×10^6个BMC＋1×10^7个SC＋2×10^6个白血病细胞株EL9611；白血病治疗组：在白血病复发组的基础上再输注1×10^7个NK细胞，并腹腔注射i00ngrhIL-2和1μgrhIL-15，持续7d。观察两组受者白血病复发情况和移植后100d的存活率。结果单纯BMC输注组受者无GVHD发生，NK细胞输注组受者GVHD的评分和组织病理学改变均较诱发GVHD组轻（P〈0．05）；诱发GVHD组的免疫功能重建较NK细胞输注组延迟。白血病复发组和白血病治疗组移植后100d的存活率分别为20％和90％，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论输注激活的供者NK细胞可以减轻小鼠单倍型相合造血干细胞移植后的GVHD，减少白血病复发，促进免疫功能重建。

《外显子测序方法鉴定急性红白血病中GATA2及CEBPA突变高再现性》解读

本文最初发表于2016年《Leukemia》杂志上,文章题录为:Ping N,Sun A,Song Y,et al.Exome sequencing identifies highly recurrent somatic GATA2 and CEBPA mutations in acute erythroid leukemia[J].Leukemia,2016Jul.[Epub ahead of print]。文章总结分析了笔者单位近20年来收集的急性红白血病患者的临床及实验室特征,并采用外显子测序等方法发现急性红白血病中GATA2及CEBPA突变具有高再现性,GATA2突变具有促进细胞向红系分化的潜能,经通信作者许可,再次通过佳文解读的方式来阐述这一发现。

急性早幼粒细胞白血病并发粒细胞肉瘤1例报告及文献复习

粒细胞肉瘤（granulocytic sarcoma,GS）是一种未成熟粒细胞在髓外增生和浸润形成的肿瘤性包块,最常侵犯的部位为皮肤、淋巴结、软组织、骨及骨膜[1]。GS较多见于急性粒细胞白血病（acute myelogenous leukemia,AML）、慢性粒细胞白血病、骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常综合征患者。在AML患者中,GS常见于存在t（8;21）、inv（16）等细胞遗传学异常者[1]。

急性淋巴细胞白血病染色体改变及其意义

急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）是起源于定向B或T系列发育的原始淋巴细胞的恶性克隆性疾病。与急性髓细胞白血病（acute