第一届国际华人骨科研究大会在苏州召开

2013年5月21-23日，第一届国际华人骨科研究大会（Inaugural International Chinese Musculoskeletal Research Conference，ICMRC）在苏州隆重举行。本次会议由国际华人骨研学会（ICMRS）和美国骨矿研究学会（ASBMR）主办，苏州大学附属第一医院、苏州市医学会、苏州大学临床医学研究院承办，苏州市人才办、苏州市科学技术协会和苏州大学骨科研究所协办。会议旨在彰显全球科研人员在肌肉骨骼医学领域所做的最新贡献，其主题为“骨科生物学、病理学及工程学前沿”，涵盖骨代谢与骨质疏松、生物材料及植入物、肌肉骨骼组织修复、干细胞与组织工程、生物力学与力生物学等众多领域。

小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:小分子药物TD-198946是一种能诱导干细胞形成软骨的高效软骨生成剂,但目前尚不清楚其对成骨分化的作用。目的:探讨小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的效果及其作用机制。方法:提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用CCK-8法评估不同浓度TD-198946对骨髓间充质干细胞增殖的影响,确定TD-198946的最佳使用浓度;然后加入最适浓度TD-198946和成骨分化培养基对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导;成骨诱导第3天用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原基因表达;成骨诱导第7天进行碱性磷酸酶染色,Western blot检测Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K蛋白表达;成骨诱导第21天进行茜素红染色。结果与结论:①CCK-8实验结果显示,100 nmol/L TD-198946能促进骨髓间充质干细胞增殖;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,TD-198946能促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化;③qRT-PCR结果显示,TD-198946可促进成骨相关基因碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的表达;④Western blot结果显示,TD-198946可促进Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果表明,小分子药物TD-198946可能通过激活PI3K/AKT信号通路,诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。

白细胞介素9缺失抑制小鼠的成骨能力

背景:小鼠成骨能力受到JAK/STAT通路的调控,白细胞介素9能够通过JAK-STAT通路调控多种细胞的功能,有潜力成为调控成骨能力的新型细胞因子。目的:探究体内白细胞介素9的缺失对于小鼠成骨能力的影响。方法:将2月龄野生型小鼠(WT)和白细胞介素9基因全敲除小鼠(IL-9^(-/-))股骨进行Micro-CT扫描,分析其骨量变化;并分别对小鼠股骨切片行苏木精-伊红染色、Masson染色以及Ⅰ型胶原蛋白免疫组化染色。提取2月龄WT和IL-9^(-/-)小鼠骨髓细胞进行骨髓间充质干细胞克隆形成实验,并检测成骨基因的表达。为了进一步验证白细胞介素9是否通过JAK-STAT通路进行信号传导,采用Westernblot检测STAT3蛋白的表达。结果与结论:①Micro-CT扫描结果显示,相较于WT小鼠,IL-9^(-/-)小鼠的骨量显著降低,骨密度、骨体积分数、骨小梁数目显著降低,骨小梁分离度显著增大;②苏木精-伊红染色与Micro-CT结果一致,IL-9^(-/-)小鼠骨小梁密度更低;③Ⅰ型胶原蛋白免疫组化染色以及Masson染色结果显示,IL-9^(-/-)小鼠Ⅰ型胶原蛋白阳性成骨细胞数量显著减少,同时胶原形成能力更差;④克隆形成实验结果表明,IL-9^(-/-)小鼠成骨细胞的矿化能力显著低于WT小鼠;⑤Western blot结果显示,成骨诱导激活STAT3信号传导,WT成骨诱导组pSTAT3表达明显高于IL-9^(-/-)成骨诱导组,说明白细胞介素9通过JAK-STAT3通路调控成骨,白细胞介素9的缺失抑制成骨细胞的分化与功能,这可能是IL-9^(-/-)小鼠骨量降低的原因之一。

PKA介导骨癌诱导的大鼠特异性背根神经节神经元兴奋性的机制研究

疼痛通常会给癌症病人带来巨大痛苦,近90%的癌症病人都有不同程度的疼痛发生,癌证晚期这个现象更为突出。即使WHO提出的"疼痛三阶梯疗法"对癌痛针对性的治疗方案有了一定的突破,但还是不能保证大部分癌症患者能够得到有效的治疗。骨癌痛对于癌症患者的正常治疗和生活都带来很大的负面影响,因此我们作手对其进行研究,寻找有效的镇痛方法,有效缓解疼痛发生的机率和程度,具有重要理论价值和临床意义。

PKC拮抗剂对SD大鼠疼痛及DRGs外周神经元兴奋性的作用研究

疼痛通常会使骨癌患者遭受难以忍受的痛苦。本研究通过测量骨癌大鼠DRG神经元的行为和兴奋性,探讨鞘内注射PKC拮抗剂GF109203X对大鼠DRGS周围神经元疼痛和兴奋性的影响。

绿原酸促进成骨前体细胞成骨分化的作用

背景:绿原酸是干李子中含量最丰富的多酚类物质,作为一种食源性药物有望用于骨质疏松治疗之中。目的:探究绿原酸对成骨前体细胞成骨分化的影响及其机制,并在骨质疏松小鼠模型中进行相关验证。方法:(1)体外实验:以含不同质量浓度(0,0.1,1,10,100 mg/L)绿原酸的培养基培养MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖。采用含0,10,20 mg/L绿原酸的成骨诱导培养基培养MC3T3-E1细胞,进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色、成骨基因表达与BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路蛋白检测。(2)体内实验:将32只雌性C57BL/6小鼠随机分成4组,假手术组、去卵巢组及低、高剂量绿原酸组,每组8只,低、高剂量绿原酸组去卵巢后腹腔注射25,50 mg/(kg·d)的绿原酸,连续给药8周。给药8周后,进行骨组织Micro-CT扫描与组织形态学观察。结果与结论:(1)体外实验:当绿原酸质量浓度≤10 mg/L时,对MC3T3-E1细胞的增殖无明显影响。碱性磷酸酶染色与茜素红染色显示,随着绿原酸质量浓度的增加,MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶活性、钙沉积和钙结节生成能力提高,成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素、骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4表达升高,骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4蛋白表达升高。(2)体内实验:Micro-CT扫描显示,去卵巢组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度及数量均低于假手术组(P <0.05),骨小梁分离度高于假手术组(P <0.05);经过不同质量浓度绿原酸干预后,去卵巢小鼠的上述指标均有所改善,其中高剂量绿原酸组改善效果有显著性意义(P <0.05)。苏木精-伊红染色显示,去卵巢组小鼠骨量少于假手术组,经过绿原酸干预后骨量增加。(3)绿原酸可能通过BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路促进成骨分化,预防去卵巢小鼠的骨丢失。

促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的血管内皮生长因子

背景:血管内皮生长因子是骨髓间充质干细胞所处骨髓微环境中的重要调控因子,其可促进骨髓间充质干细胞的血管内皮方向分化,但尚无其对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化调控作用的报道。目的:探讨血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的调控作用及其机制。方法:分离、培养小鼠骨髓间充质干细胞,CCK8方法检测不同质量浓度血管内皮生长因子重组蛋白对骨髓间充质干细胞增殖的影响,选定适宜血管内皮生长因子重组蛋白质量浓度并检测其对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,分子生物学方法检测血管内皮生长因子干预下骨髓间充质干细胞中Osterix,Runx2,碱性磷酸酶、骨钙素和血红素氧化酶1的表达。结果与结论:1血管内皮生长因子可以促进骨髓间充质干细胞增殖,且具有浓度依赖性,100μg/L血管内皮生长因子重组蛋白的促增殖作用最显著。2成骨诱导剂存在条件下,血管内皮生长因子促进骨髓间充质干细胞成骨标志基因Osterix、Runx2、碱性磷酸酶和骨钙素的表达;血管内皮生长因子干预组骨髓间充质干细胞成骨分化的钙结节数量较对照组增加。3血管内皮生长因子可诱导骨髓间充质干细胞中血红素氧化酶1mRNA和蛋白水平的高表达。以上结果表明血管内皮生长因子促进骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化的调控机制可能与骨髓间充质干细胞内血红素氧化酶1表达增加有关。

鲍曼不动杆菌生物膜与耐药性

鲍曼不动杆菌为革兰阴性杆菌,是导致医院感染的常见条件致病菌之一。由于其易产生耐药性及植入性医疗操作的增加,鲍曼不动杆菌生物膜导致的院内感染成为临床医师的极大挑战。因此,了解鲍曼不动杆菌的耐药机制具有重要的意义,分析其生物膜对耐药性的影响及机制有助于开发新的联合治疗方案。此文从细菌生物膜的角度归纳鲍曼不动杆菌的耐药机制研究进展,讨论鲍曼不动杆菌生物膜的形成过程、调节因素以及对耐药性的影响,概述了亚致死剂量抗生素对鲍曼不动杆菌耐药形成的影响,为针对鲍曼不动杆菌生物膜所致感染制定适宜的治疗方案和防控耐药菌株传播提供参考。

鸢尾素通过抑制PI3K/AKT信号通路降低P21的表达缓解软骨细胞衰老延缓小鼠骨关节炎的进展

目的按探究鸢尾素对骨关节炎小鼠中衰老因子P21的影响。方法将H_(2)O_(2)和鸢尾素作用于小鼠原代软骨细胞,通过CCK8验证鸢尾素对小鼠原代软骨细胞增殖的影响。通过β半乳糖苷酶染色检测小鼠原代软骨细胞中细胞衰老的情况。通过RT-PCR检测小鼠原代软骨细胞中P21 mRNA的表达情况。通过Westem blot检测小鼠原代软骨细胞中P21蛋白的表达。通过DMM术构造小鼠骨关节炎模型,关节腔注射鸢尾素,通过免疫组化染色和免疫荧光染色,检测小鼠胫骨表面软骨中P21蛋白的表达情况。通过Westerm blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果CCK8实验结果显示,鸢尾素对小鼠原代软骨细胞的增殖没有显著的影响。β半乳糖苷酶染色结果显示,鸢尾素能改善H_(2)O_(2)对小鼠软骨细胞的衰老作用。RT-PCR的结果表明,鸢尾素能逆转H,O2诱导后小鼠软骨细胞中P21基因的增加。Western blot结果表明,鸢尾素能逆转H,O,诱导后小鼠软骨细胞中P21蛋白的增加。RTPCR的结果表明,内源性缺少鸢尾素会加重H_(2)O_(2)对小鼠软骨细胞中P21基因的诱导作用。Western blot结果表明,内源性缺少鸢尾素会加重H_(2)O_(2)对小鼠软骨细胞中P21蛋白的诱导作用。免疫组化和免疫荧光染色的结果表明,鸢尾素能改善DMM术后骨关节炎小鼠腔骨表面软骨中P21蛋白的表达。Western blot结果显示,鸢尾素能抑制PI3K/AKT信号通路的激活。结论鸢尾素通过抑制PI3K/AKT信号通路降低骨关节炎小鼠软骨细胞中衰老基因P21的表达,延缓骨关节炎的进展。