miR-338-5p在肾移植患者的表达及其意义

目的:研究肾移植受者血清中miR-338-5p的表达特点,及其与B细胞活化因子(BAFF)信号的相关性,进而探讨其在抗体介导肾移植排斥中的潜在意义。方法:收集肾移植患者的血清(健康志愿者为对照),应用荧光定量PCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异;ELISA法检测血清可溶性BAFF(sBAFF)水平;液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验;相关性分析采用Spearman法及Pearson法。P<0.05被认为具有统计学意义。结果:与健康对照组比较,肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平显著增高(P<0.01)。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者(P<0.01);移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者(P<0.01)。对全部研究对象进行统计分析显示,血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);术后3年内者,血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);术后3年以上者,血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLA&MICA抗体均呈显著正相关,相关系数分别为0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01)。结论:miR-338-5p直接或间接地对BAFF信号发挥调控作用;miR-338-5p可能通过对靶基因的调控参与肾移植术后抗体介导的免疫反应过程,影响移植肾长期存活。

miR-338-5p通过靶向核因子κB1调控B细胞生物学功能

目的验证miR-338-5p对核因子κB1(NF-κB1)水平的影响,研究其对B细胞生物学功能的调控作用。方法利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p靶基因的验证;采用抗Ig M抗体和/或重组人B细胞活化因子(rh BAFF)蛋白刺激的B细胞培养体系,将miR-338-5p激动剂、miR-338-5p拮抗剂、NF-κB1小干扰RNA(si NF-κB1)及其对应的阴性对照制剂转染CD20+B淋巴细胞,利用实时定量PCR法检测各转染组NF-κB1 mRNA水平,Western blot法检测NF-κB1蛋白(p105、p50)的水平,ELISA检测培养上清中Ig G含量。结果靶基因验证实验显示,miR-338-5p模拟物与报告载体共转染组的hRluc/h Luc萤光素酶活力比值显著升高;体外培养实验结果显示,在抗Ig M抗体与rh BAFF蛋白共培养体系,miR-338-5p激动剂转染组NF-κB1 mRNA、p105蛋白、p50蛋白、Ig G水平均显著升高,si NF-κB1的作用与miR-338-5p激动剂相反;miR-338-5p拮抗剂转染组NF-κB1 mRNA、Ig G水平均显著降低;相关性分析结果表明,NF-κB1 mRNA水平与Ig G水平呈显著正相关。结论 miR-338-5p靶向正调控NF-κB1、间接作用于BAFF信号参与调控B细胞生物学功能。

TNFRSF13C在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及其意义

目的:检测单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中B细胞激活因子受体(TNFRSF13C)的表达变化,探讨其在肾间质纤维化病变中的作用。方法:采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型,20只成年雄性大鼠,随机分为4组,分别于术后0、3、7、14天处死大鼠。取左侧梗阻肾脏进行Masson染色,拍照后,采用双盲法评定各组肾小管间质纤维化程度。提取肾组织中总RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肾组织中TNFRSF13C基因表达情况。Pearson检测TNFRSF13C表达量与肾小管间质纤维化程度的相关性。结果:随着梗阻时间的延长,肾组织中TNFRSF13C的m RNA表达量进行性升高,与肾间质纤维化病变程度一致,两者呈显著正相关(r=0.915,P<0.01)。结论:TNFRSF13C可能在肾间质纤维化病程中起到了重要作用,并有望成为慢性肾脏病的临床监测指标。

慢性移植性肾病大鼠脾脏中辅助性T细胞和B细胞免疫状态的研究

目的:检测慢性移植性肾病(CAN)大鼠脾脏中辅助性T细胞(Th)和B细胞特征性因子表达量的变化,探究这些Th/B细胞免疫状态在CAN病程中的作用。方法:采用Fischer-Lewis左肾原位移植法建立大鼠慢性移植性肾病模型,Lewis-Lewis同种自体移植作为对照组。所有受体大鼠,术后8周处死,取脾脏组织,进行HE染色,拍照后采用双盲法评价脾脏组织病理变化程度及淋巴细胞浸润情况。用Trizol法提取脾脏组织中总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法检测各组脾脏中Th1,Th2,Th17,Treg和B细胞标志性因子的表达情况。结果:与对照组相比,CAN大鼠脾脏出现明显的结构肿胀及淋巴细胞浸润增多,并且Th1细胞特征性因子IFN-γ和T-bet表达量显著增加(P<0.001,P<0.05);Th2细胞特征性因子GATA-3表达升高(P<0.001),但IL-4无变化;IFN-γ/IL-4比例明显上调(P<0.001),T-bet/GATA3比例没有显著差异。Th17的特征性因子IL-17未见明显改变,而Treg细胞特征性因子Foxp3表达增加(P<0.001),IL-17/Foxp3平衡明显向Treg细胞偏移(P<0.05)。B细胞激活相关因子TNFRSF13C和RAG1表达量均显著上调(P<0.01,P<0.05),而RAG2水平则没有变化。结论:CAN大鼠脾脏中Th1/Th2的活性平衡向Th1偏移,分化平衡未出现显著变化;Th17/Treg的平衡向Treg细胞偏移,B细胞免疫状态也被激活,这些变化在CAN病程的发展中起到了重要作用,并且为临床监测和治疗提供了新的依据。