BTLA在肿瘤免疫中的作用及其临床意义

继程序死亡分子(PD-1)与细胞毒性T细胞相关抗原-4(CTLA-4)之后,CD28家族的新成员B、T淋巴细胞弱化因子(BTLA)已成为新的研究热点。BTLA表达谱介于PD-1和CTLA-4之间,它不仅表达于T细胞,在B细胞、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞中也有表达。BTLA与其配体结合传递共抑制信号,在机体抗肿瘤免疫应答中发挥负性调节作用,并与肿瘤的免疫逃逸机制相关,可能成为肿瘤生物治疗潜在的靶点。

冠心病患者血清白介素-17与血管假友病因子、C-反应蛋白水平及冠脉病变程度的相关性

目的探讨冠心病患者血清白介素-17（IL-17）与血管假友病因子（vWF）、C-反应蛋白水平（CRP）及冠脉病变程度的相关性。方法选择2012年6~9月苏州大学附属第三医院治疗的冠心病患者65例为冠心病组,选择同期冠状动脉造影（CAG）正常或微小病变〈50%除外冠心病者25例为对照组;冠心病组分为稳定型心绞痛患者（SAP组）23例,不稳定型心绞痛患者（UAP组）14例,急性心肌梗死患者（AMI组）28例;采用酶联免疫分析法（ELISA）检测各组血清中IL-17、vWF水平,采用免疫散射比浊法检测CRP水平。采用Gensini评分系统评价冠脉病变程度;分析IL-17与vWF、CRP及Gensini评分的相关性。结果①AMI组白细胞计数[（7.93±2.86）×109/L]高于SAP组[（6.33±1.53）×109/L]、UAP组[（7.50±2.39）×109/L]及对照组[（6.50±1.39）×109/L],差异均有统计学意（P=0.027）;SAP组、UAP组、AMI组Gensini评分[25.80（3.00,68.00）、25.25（4.00,116.00）、36.00（4.00,100.00）分]高于对照组[1.84（0.00,11.00）分],差异有高度统计学意义（P=0.001）。②AMI组、UAP组、SAP组患者血清IL-17、vWF及CRP水平与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;AMI组、UAP组、SAP组间血清IL-17、vWF水平差异均有高度统计学意（P〈0.01）;SAP组与对照组血清CRP水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。而AMI组、UAP组CRP水平[（15.13±8.59）、（8.36±3.08）mg/L]均高于对照组[（3.67±0.43）mg/L],差异均有统计学意义（P〈0.01）。③经直线相关与回归分析,IL-17分别与vWF（r=0.610,P〈0.01）、CRP（r=0.568,P〈0.01）成正相关,IL-17与Gensini评分亦成正相关（r=0.438,P〈0.01）。结论 IL-17、vWF、CRP参与了冠心病的发生发展过程,IL-17可促进vWF、CRP产生,并与冠脉病变的严重程度相关。

可溶性B7-H4分子在乳腺癌患者血清中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者血清中可溶性B7-H4分子(sB7-H4)的表达及临床意义。方法采用ELISA法检测70例乳腺癌患者、41例良性乳腺疾病患者及28例健康女性血清中sB7-H4的含量,并分析乳腺癌患者血清中sB7-H4含量与临床病理特征的关系;同时采用PCR及免疫组织化学法分别检测B7-H4 mRNA及蛋白在乳腺癌及癌旁组织中的表达。结果乳腺癌患者血清中sB7-H4含量的中位值为26.54μg/ml,显著高于良性乳腺疾病组的5.69μg/ml(U=844.0,P<0.01)及健康对照组的15.71μg/ml(U=727.0,P<0.05)。乳腺癌患者血清中sB7-H4含量与淋巴结转移显著相关(χ2=6.944,P<0.01),而与其他临床病理特征无关。乳腺癌及癌旁组织中均可检测到B7-H4 mRNA及蛋白的表达。结论 sB7-H4含量在乳腺癌患者血清中显著增加,并与淋巴结转移有关,可作为乳腺癌诊断与治疗的潜在血清标志物。

肿瘤射频消融裂解物致敏树突状细胞的抗肿瘤活性研究

目的 观察射频消融（RFA）肿瘤原位裂解物负载树突状细胞（DCs）抗肿瘤活性.方法 制备BALB/c小鼠骨髓来源的DCs,对BALB/c小鼠结肠癌（C26）皮下种植瘤进行RFA灭活,将其原位裂解的肿瘤组织反复冻融后取上清,Lowry蛋白定量法定量,以终质量浓度5 mg/L负载培养第5天的DCs（即Ag-DCs）,采用流式细胞仪分析Ag-DCs与未负载抗原的DCs的表面分子[CD11c、人类主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅱ、CD80与CD86]表达的差异.建立3组肿瘤治疗与预防模型分别是Ag-DC组（n=5）、DC组（n=5）与磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（n=5）,采用ANOVA方差分析比较3组间种植瘤体积的变化趋势,Log-rank检验比较3组小鼠的生存时间.结果 Ag-DCs的CD80、CD86、MHC-Ⅱ、CD11c表达率分别为86.3％、29.4％、75.4％、82.5％;未处理的DCs表面分子的CD80、CD86、MHC-Ⅱ、CD11c表达率分别为68.6％、15.1％、64.5％、66.7％;小鼠肿瘤预防模型提示7d成瘤率分别为：Ag-DC组60％（3/5）、DC组80％（4/5）、PBS对照组100％（5/5）;且Ag-DC组小鼠的肿瘤体积生长缓慢,与PBS和DC组的免疫小鼠比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.治疗模型提示：Ag-DC组小鼠的平均生存期为（39±8）d,DC组小鼠的平均生存期为（28±4）d,PBS对照组小鼠的平均生存期为（22±3）d,差异有统计学意义（P＜0.01）;且Ag-DC组小鼠的肿瘤体积生长缓慢,与PBS和DC组的免疫小鼠比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 肿瘤射频消融原位裂解物作为抗原可有效刺激DC产生特异性抗肿瘤免疫效应.

淋巴细胞活化基因-3分子在恶性肿瘤中的作用及意义

淋巴细胞活化基因-3分子（LAG-3）是免疫球蛋白超家族中一个重要的负性共刺激分子，主要在活化的T细胞与NK细胞上表达。LAG-3分子通过与其配体MHCⅡ类分子结合，负性调节活化T细胞的增殖、功能及维持机体T细胞内环境稳态。LAG-3在小鼠模型及多种肿瘤微环境中有异常表达，并与临床病理参数和预后等密切相关，在肿瘤免疫应答中发挥重要的调控作用。干扰与阻断LAG-3／MHCⅡ信号通路可为肿瘤免疫治疗提供新的思路。

肿瘤射频消融联合免疫治疗的研究进展

射频消融（RFA）是一种微创治疗手段，不仅使局部肿瘤产生凝固性坏死，而且能激发机体特异性免疫反应。近年来，大量证据表明，射频消融伴随的危险信号对固有免疫和适应性免疫反应有影响，但是消融诱导机体的免疫反应往往处于低水平。消融联合免疫治疗可以消除消融后肿瘤的复发，研究对射频消融联合免疫旨在消融联合免疫治疗提供证据，为肿瘤的治疗提供新思路。肿瘤的复发和转移是肿瘤治疗过程中的难题，建立肿瘤主动性免疫治疗模式可望成为解决肿瘤转移和复发的有效途径。

肿瘤来源的外体在肿瘤发生发展中的作用

外体（exosome）是多种细胞在正常生理过程中分泌的含有多种细胞膜分子及相关蛋白的小囊泡，其异常分泌是恶性肿瘤的重要标志，并与肿瘤细胞生长、免疫抑制、肿瘤血管生成及化疗耐药密切相关。肿瘤细胞分泌大量的exosoine参与癌蛋白和免疫抑制分子的转移，促进肿瘤的生长和转移。肿瘤来源的外体（TEX）可存在于肿瘤患者血浆、恶性渗出液和肿瘤细胞培养上清液中。TEX含有肿瘤的相关抗原，并将其递呈给T细胞以活化细胞毒性T淋巴细胞（CTL），发挥抗肿瘤作用。Exosome具有安全、有效、稳定等生物学特征可为恶性肿瘤的诊治提供新的策略。

协同刺激分子B7-H3在食管癌中的表达

目的探讨协同刺激分子B7-H3在食管癌中的表达及其临床意义。方法采用流式细胞术分析人食管癌细胞株TE-1、Eca-109中B7-H3分子的表达，应用免疫组织化学法检测174例食管癌组织中B7-H3分子的表达。结果流式检测显示B7-H3分子在人食管癌细胞株Eca-109中呈弱表达，在TE-1中呈高表达；免疫组织化学染色评分（H—score）结果显示174例食管癌组织中B7-H3染色的H—score中位值为200．0，最小值为0，最大值为292．5；食管癌组织中B7-H3表达水平和肿瘤浸润深度明显相关（P〈0．05），B7-H3高表达的患者其术后总生存率显著差于B7-H3低表达的患者[比值比（OR）=1．564，95％可信区间（CI）：1．040～2．351，P〈0．05]，B7-H3的表达水平和患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期等均无明显相关（P〉0．05）。结论协同刺激分子B7-H3在食管癌组织中高表达，并与肿瘤浸润深度及患者的预后密切相关。

慢病毒介导微小RNA-20a过表达抑制胰腺癌细胞的增殖

目的观察慢病毒介导微小RNA（miRNA）-20a过表达对胰腺癌细胞增殖的影响，探讨胰腺癌基因治疗靶位。方法采用荧光原位杂交和实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测BxPC3、Panc-1和永生化的正常胰腺导管上皮细胞H6C7中miRNA-20a的表达。体外实验分析慢病毒介导miRNA-20a过表达对胰腺癌细胞株增殖能力的影响，流式细胞仪分析细胞周期分布。结果miRNA-20a在胰腺癌细胞中呈低表达（P〈0．01）；过表达miRNA-20a在体外可抑制胰腺癌细胞增殖（P〈0．01），生长曲线最大抑制效率分别是（59．21±0．31）％和（59．04±2．01）％；软琼脂克隆形成试验，增殖率分别下降到（45．21±1．72）％和（38．74±2．13）％。miRNA一20a使细胞周期阻滞于G0／G1期，分别为（62．3±4．5）％和（64．2±4．8）％（P〈0．05）。同时细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达水平下调，但其mRNA水平不变（P〉0．05）。结论miRNA-20a过表达能抑制胰腺癌细胞增殖，其机制可能是在转录后水平抑制CyclinD1蛋白的表达。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在食管癌细胞中的表达及临床意义

目的 探讨叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）在食管癌细胞中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测103例食管癌患者肿瘤组织中Foxp3蛋白的表达,同时选用5例癌旁组织作为对照.通过对食管癌肿瘤细胞中Foxp3蛋白的表达水平进行H-score评分,并分析其临床意义.结果 免疫组织化学检测结果显示Foxp3蛋白在肿瘤浸润淋巴细胞及肿瘤细胞中主要表达在胞核,在癌旁组织中不表达;统计学分析显示,肿瘤细胞中Foxp3高表达（H-score≥70分）的患者中,肿瘤直径≥3.5 cm患者所占比率显著高于肿瘤细胞中Foxp3低表达（H-score＜ 70分）的患者,差异有统计学意义（x2 =4.267,P ＜0.05）,而肿瘤细胞中Foxp3表达水平与患者其他临床参数无相关（P＞0.05）.结论 核转录因子Foxp3在食管癌组织中表达主要分布在浸润淋巴细胞及肿瘤细胞,肿瘤细胞表达Foxp3在肿瘤进展中有重要意义.

特异性DNA探针检测细胞因子诱导的杀伤细胞在患者体内的生存时间

目的观察应用荧光原位杂交技术（FISH）研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在性别错配的女性受者体内生存时间。方法通过细胞采集仪采集男性供者的单个核细胞，经多种细胞因子体外诱导培养成CIK细胞，输注给女性受者。治疗数月后，用Y染色体特异性DNA探针测定女性受者体内淋巴细胞上Y染色体的表达。结果流式细胞仪检测第14天时CIK细胞高表达CD3^＋CD56^＋为55．4％。CSPX探针定位于Xp11．1-q11．1，杂交信号为绿色，CSPY探针定位于Yp11．1-q11．1，杂交信号为红色，女性细胞染色体XX显示两个绿色荧光信号，男性细胞染色体XY显示1个绿色信号，1个红色荧光信号。在女性受者体内淋巴细胞上有Y染色体的表达，表达比例为0．5％～3．0％。结论Y染色体特异性DNA探针可以确定CIK细胞在患者体内的生存时间。

协同刺激分子B7-H4与CD11c共表达对细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌患者预后的影响

目的 观察协同刺激分子B7-H4及黏附分子CD11c在胃癌组织中的不同表达水平,并观察其对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗对胃癌患者预后的影响.方法 应用免疫组织化学法检测88例胃癌患者手术标本中B7-H4及CD11c的表达水平.采用x2检验比较CIK联合化疗组与单纯化疗组患者临床资料的均衡性.采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验比较B7-H4、CD11c不同表达水平及CIK联合化疗、单纯化疗患者无瘤生存期及生存期的差异.采用多因素Cox模型分析B7-H4、CD11c不同表达水平联合CIK治疗与复发和死亡的关联强度.结果 CIK联合化疗组和单纯化疗组除在肿瘤转移差异有统计学意义外,其余临床资料及B7-H4、CD11c表达水平在两组间分布差异无统计学意义（P＞0.05）.CIK联合化疗＋CD11c高表达＋B7-H4低表达患者无瘤生存期及生存期明显高于单纯化疗＋ CD11c低表达＋B7-H4高表达患者（59个月比15个月、67个月比22个月,P＜0.01）.调整了性别、年龄、TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤大小等混杂因素后,与CIK联合化疗＋ CD11c高表达＋B7-H4低表达组比较,单纯化疗＋CD1 1c低表达＋B7-H4高表达组患者的复发率和死亡率明显升高,其风险比（HR）[95％可信区间（CI）]分别为5.06（1.64 -15.56）、6.51（2.09 -20.29）.结论 CD11c高表达、B7-H4低表达胃癌患者接受CIK联合化疗的治疗方案将可能延长无瘤生存时间及生存时间.

MicroRNAs与胃癌关系研究进展

MicroRNAs是一类内源性非编码RNA，近年来研究发现，若干microRNAs参与基因调控，直接参与胃癌的发生和分化，microRNAs表达谱与胃癌的进展和预后等密切相关。因此，microRNAs的研究对于阐明胃癌相关基因的功能和胃癌癌变的分子机制具有重要的意义。

MicroRNA-22在乳腺癌中的作用及机制

MicroRNA （miRNA）为非编码的单链小RNA分子,具有高度保守性、时序性和组织特异性.MicroRNA-22（miR-22）参与了骨骼代谢、心肌细胞成熟与肥大、胚胎干细胞的分化等生理病理过程.在乳腺癌中,miR-22则具有抑癌基因与癌基因的双重功能.miRNA-22有可能作为乳腺癌诊断和预后的指标,也可作为靶点为乳腺癌患者提供新的治疗策略.