PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞黏着斑激酶信号转导的影响研究

目的探讨过表达的野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)及其突变体G129E(仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失脂质磷酸酶活性)对活化肝星状细胞(HSC)黏着斑激酶(FAK)信号转导的影响。方法 2014年12月—2015年6月,利用瞬时转染技术,以腺病毒为载体将野生型PTEN及其突变体G129E转染到体外培养的活化HSC;实验分为4组:对照组:腺病毒转染时以DMEM基础培养基代替腺病毒;Ad-GFP组:转染表达绿色荧光蛋白(GFP)的载体空病毒Ad-GFP;Ad-PTEN组:转染携带野生型PTEN并表达GFP的重组腺病毒Ad-PTEN;Ad-G129E组:转染携带G129E并表达GFP的重组腺病毒Ad-G129E。应用Western blotting法检测活化HSC中PTEN、FAK、磷酸化FAK〔p-FAK(Tyr397)〕表达,实时荧光定量PCR法检测活化HSC中PTEN、FAK mRNA表达。结果腺病毒转染活化HSC 48 h,4组活化HSC中PTEN及其mRNA表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中Ad-PTEN组和Ad-G129E组活化HSC中PTEN及其mRNA表达高于对照组和Ad-GFP组(P<0.05);对照组与Ad-GFP组、Ad-PTEN组与Ad-G129E组活化HSC中PTEN及其mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组活化HSC中FAK及其mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中Ad-PTEN组和Ad-G129E组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达低于对照组和Ad-GFP组(P<0.05);对照组与Ad-GFP组、Ad-PTEN组与Ad-G129E组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达的野生型PTEN及其突变体G129E均可通过抑制活化HSC的FAK磷酸化负性调控体外活化HSC的FAK信号转导。