PD-1/PD-L信号通路在感染免疫中的研究进展

对T细胞活化机制的研究表明，T细胞的有效活化和功能介导依赖于两个信号的调节。即除通过APC递呈MHC抗原复合物给抗原特异性T细胞提供第一信号外，还需协同刺激分子介导的辅助信号的协同作用。如果协同刺激分子提供的第二信号发生异常，将会导致T细胞的程序性凋亡或者异常激活从而导致疾病的发生与发展。已有研究表明，一系列正性和负性协同刺激信号共同介导了T细胞的活化，两者之间的动态平衡在机体抵抗外来抗原的入侵以及阻止自身免疫疾病的发生中起着极其重要的作用。 CD28／B7和 CD40／CD40 L 等信号通路已经被证明在调节T细胞活化和免疫耐受中扮演着重要角色。其中PD-1／PD-L作为CD28／B7家族重要成员，已被证实通过抑制T细胞的活化和增殖来负性调控免疫应答，并在调节免疫耐受、微生物感染及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。

HBV感染不同病程中病毒载量与肝功能相关指标及免疫功能的变化分析

目的探讨HBV感染者外周血肝功能主要指标、T细胞亚群以及病毒载量在不同病程中的变化及其临床意义。方法170例HBV感染患者根据病程分成急性乙肝组（18例）、慢性乙肝组（73例）、肝硬化组（41例）及肝癌组（38例），正常对照组40例。用全自动生化分析仪和流式细胞仪检测各组肝功能相关指标及T细胞亚群含量；采用实时荧光定量PCR法检测HBV．DNA含量。结果四组实验组与正常对照相比谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）均升高，差异具有统计学意义（P〈0．05），且以急性乙肝升高最为显著，慢性乙肝次之，组间比较可见慢性乙肝患者组比急性乙肝患者组A坍、AST有所下降，且差异具有统计学意义（P〈0．05），而肝癌患者组和肝硬化组之间则变化不显著，差异无统计学意义（P〉0．05）；碱性磷酸酶ALP的升高见于肝癌患者组，慢性乙肝患者组ALP水平较低；各组总蛋白（TP）均在正常参考范围内。四组实验组外周血CD3^＋T细胞均比正常对照组低，其中肝癌组、肝硬化患者组降低最为明显，CD4^＋T细胞比例上升见于急性乙肝组，而CD8^＋T细胞的比例在急性乙肝患者组中最低。外周血中HBV病毒核酸载量升高的最为明显的是慢性乙肝患者组，而急性乙肝患者组、肝硬化患者组、肝癌患者组的HBV—DNA水平比较低，以急性乙肝最低，各组与其相比均具有统计学差异（P〈0．05）。结论HBV不同病程中患者的肝功能相应指标、T细胞亚群表达、HBV-DNA含量存在显著差异，联合检测这些项目可为临床正确评估患者的病情及病程提供相应指导，为疾病转归的判断及治疗提供可靠的依据。

慢性乙型肝炎患者病程转归与凝血功能相关指标分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者病情转归与凝血功能相关指标的相关性。方法收集乙型肝炎患者263例为研究对象,分为慢性乙型肝炎(89例)、乙型肝炎后肝硬化(91例)、乙型肝炎后肝衰竭(44例)和肝癌(39例)4组,采用STA-R Evolution全自动血凝分析仪分别检测凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、D-二聚体(D-D)和纤维蛋白降解产物(FDP),比较PT、APTT、FIB、TT、AT-Ⅲ、D-D、FDP在各组之间的差异。结果慢性乙型肝炎组PT、D-D和FDP分别为(14.63±0.22)s、(765.3±129.7)mg/L和(1.75±0.42)mg/mL,均明显低于肝硬化、肝衰竭、肝癌组,差异均有统计学意义(P<0.05);而肝衰竭组PT、D-D和FDP分别为(30.03±3.12)s、(4 828.0±798.3)mg/L和(12.83±2.44)mg/mL,均明显高于慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝衰竭组,差异有统计学意义(P<0.05)。TT在肝衰竭组最高,为(33.15±4.59)s,在慢性乙型肝炎组中最低,为(18.98±0.50)s,与其余各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。AT-Ⅲ在肝衰竭组最低,为(28.30±2.25)%,肝硬化次之,为(55.90±2.79)%,慢性乙型肝炎组最高,为(70.36±2.81)%,肝衰竭组与其余各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。FIB则在肝癌组中最高,为(3.13±0.24)g/L,与其余3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者凝血功能异常与疾病的临床病程密切相关。

肝纤四项联合其他肝功能指标检测对肝脏疾病的临床价值分析

目的通过对5种不同种类的肝脏疾病和对照组进行血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平检测,探讨四项指标在肝脏疾病监测中的临床应用价值。方法对慢性重型乙型病毒肝炎患者82例,自身免疫性肝炎患者69例,药物性肝炎患者35例,其他慢性肝炎患者38例,肝功能衰竭患者39例,健康正常对照组61例进行肝纤四项指标的检测,比较各组肝纤四项的水平。同时测定肝病常用指标:胆汁酸、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ- GT)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)水平。分析肝纤四项与各项指标水平的相关性。结果慢性重型乙型病毒肝炎组、自身免疫性肝炎组、肝功能衰竭组四项指标水平均明显高于对照组,药物性肝炎组HA和PC-Ⅲ水平高于对照组,慢性重型乙型病毒肝炎组和肝功能衰竭组各项指标水平无差异,慢性重型乙型病毒肝炎组中肝纤四项指标水平与其他常用肝脏检测指标水平的相关性最为显著,肝功能衰竭组肝纤四项指标水平较为独立。结论肝纤四项指标与其他指标的联合监测能更好的反映发展性肝脏疾病发生发展的活跃情况,及对疾病治疗效果的全面评估。

乙肝患者外周血HBV抗原抗体表达及病毒载量与T细胞亚群检测分析

目的 探讨乙型肝炎患者外周血抗原抗体表达及乙肝病毒载量与T细胞亚群关系及其临床意义.方法 2010年5月～10月苏州市第五人民医院住院乙肝患者70例（实验组）、正常对照40例,分别采用流式细胞术检测外周血T细胞亚群、微粒子酶免分析法获取HBV抗原抗体结果、实时荧光定量法检测HBV-DNA.按HBV抗原抗体检测结果分为HBeAg阳性乙肝组与HBeAg阴性乙肝组.按HBV-DNA载量分为三组（〈104,104～106,107～108） IU/ml.结果 ①HBeAg阳性乙肝与HBeAg阴性乙肝T细胞亚群检测值（%）分别为CD3＋：69.81±1.1,68.76±3.03;CD4^＋：32.84±2.55,35.32±3.45;CD8^＋：31.66±1.67,29.68±2.58,与正常人T细胞亚群结果（CD3＋：75.17±1.31;CD4^＋：42.29±2.13;CD8^＋：24.73±0.83）差异具有统计学显著性意义（t=3.637~7.468,P〈0.001）.两检测组间T细胞亚群差异无统计学显著性意义,但CD4^＋与CD8^＋比值后者高于前者.②HBV-DNA定量结果小于104 IU/ml时,只有CD3＋（69.59%±3.73%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=3.574,P=0.000 8）.当病毒量大于104 IU/ml而小于106 IU/ml时,CD3＋（71.89%±2.21%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=2.665,P=0.010 1）,CD8^＋（31.29%±2.03%）与正常人组间差异具有统计学显著性意义（t=7.183,P〈0.000 1）.当病毒量大于107 IU/ml而小于108 IU/ml时,CD3＋,CD4^＋,CD8^＋（66.71%±1.99%,33.79%±2.22%,32.84%±1.52%）与正常人组差异具有统计学显著性意义（t=5.514～9.567,P〈0.000 1）;且该组与上一组CD4^＋（38.38%±3.20%）间差异有统计学显著性意义（t=2.297,P=0.025）.结论 临床上乙肝患者HBV抗原抗体的不同表达,其T细胞亚群、DNA含量与正常人组存在显著性差异,通过它们的协同检测可以监控患者的免疫功能状况,适时调节患者的免疫功能水平,为乙肝患者的抗病毒治疗提供帮助.

肝脏相关指标水平在肝脏疾病中的临床应用

目的探讨甘胆酸(CG)、胆红素、氨基转移酶等临床肝脏相关指标单独及联合检测在不同类型肝脏疾病中的临床应用价值。方法收集2017年1月至2018年5月苏州市第五人民医院就诊的250例肝病患者作为疾病组,其中慢性重型乙型病毒性肝炎患者95例,自身免疫性肝炎患者48例,急性黄疸型病毒性肝炎患者68例,戊型病毒性肝炎胆汁淤积型患者39例,另收集健康人对照组50例。采集各组静脉血标本,分离血清及血浆,并检测总胆汁酸(TBA)、CG、总胆红素(T-Bil)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、清蛋白(Alb)、纤维蛋白原(Fg)的表达水平。GC指标与其他指标的相关性分析采用Spearman分析,ROC曲线评估各指标单独及联合检测筛查病毒性肝病的临床价值。结果CG、TBA、T-Bil、AST、ALT、Alb和Fg指标水平在各组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。T-Bil在慢性重型乙型病毒性肝炎组中的表达水平最高,TBA在戊型病毒性肝炎胆汁淤积型组中的表达水平最高,AST和ALT在自身免疫性肝炎组中的表达水平最高。CG水平在慢性重型乙型病毒性肝炎组中与TBA相关性最高(r=0.784),在自身免疫性肝炎组中与T-Bil水平相关性最高(r=0.597),在急性黄疸型病毒性肝炎组中与T-Bil水平相关性最高(r=0.638),在戊型病毒性肝炎胆汁淤积型患者组中与TBA水平相关性最高(r=0.762)。CG、TBA、T-Bil、AST、ALT单独及TBA、CG、T-Bil三者联合检测筛查病毒性肝病的AUC^(ROC)分别为0.697(0.638~0.756)、0.901(0.865~0.937)、0.693(0.634~0.752)、0.652(0.590~0.714)、0.626(0.563~0.689)和0.994(0.990~0.999),敏感性分别为44.0%、78.4%、44.8%、36.6%、35.1%和89.6%,特异性分别为74.4%、88.0%、75.3%、72.1%、72.3%和100%。结论对于肝脏疾病患者进行CG、TBA、T-Bil、AST、ALT、Alb和Fg单独及联合检测有望用于评估肝脏疾病的种类及严重程度。

液流荧光技术在AFP和CEA检测中的应用分析

目的探讨液流荧光技术在临床检测甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）中的应用，并与电化学发光技术检测结果进行比较和评价。方法利用Luminex200和Cobase-411两台仪器检测30例健康对照者外周血清中AFP与CEA含量，计算两种方法的检测阈值，同时检测41例乙肝患者的AFP与CEA含量，分析两种检测结果的一致性及相关性。结果Luminex200与Cobase-41l的AFP与CEA的正常检测限分别为6．57，2．81ng／ml与4．19，2．38ng／ml。t值分别为2．799和1．485，P值分别为0．007和0．1429。以Cobase-411仪器作为参考仪器，Luminex200的AFP与CEA检测的灵敏度、特异度和准确度分别为94．4％，97．1％，95．8％与97．3％，88．2％，92．9％。两台仪器的相关性分析结果显示，AFP的相关系数达0．9以上，CEA的相关系数0．8左右。结论AFP和CEA在两种仪器的检测结果有各自的正常检测限，检测结果虽相关性较好，但不同仪器不同试剂不同溯源，必须使用各自的正常值范围，检验单必须注明仪器方法，检验结果的互认最好建立在同类仪器同种方法相同溯源的基础上。Luminex200以Cobase-41l为参考，具有较高的灵敏度、特异度和准硝度，而且该仪器具有高通量特性，可以根据检测项目的需求进行组合，在临床检测和科研上具有独特的优势，在实际操作上简便快捷，标本用量少，便于推广。

江苏省女性HPV感染基因型分析

目的分析江苏省女性人乳头瘤病毒（HPV）感染基因型分布情况，为宫颈癌防治和针对性HPV疫苗研发提供依据。方法采用基因芯片技术，对2011年7月—2012年3月在南京、苏州、常州、扬州等9个城市医院门诊就诊的4590例女性患者宫颈脱落细胞进行HPV—DNA亚型检测，分析不同地区和年龄女性HPV各亚型单一和组合检出率差异。结果4590份参检样本HPV总感染率（感染亚型≥1种）为38．71％，不同地区和年龄女性感染率差异有统计学意义（均P〈0．001）；苏锡常地区女性总感染率（45．37％）高于南京（34．54％）及其他地区（40．15％）；≤25岁年龄组HPV总感染率最高（43．30％），其次／〉40岁组（42．08％），26～30岁（34．70％）及31～39岁组（36．31％）感染率稍低；HPV6、HPV11、HPV31、HPV33、HPV59、HPV73亚型检出率地区差异有统计学意义（P〈0．05）；HPV6、HPV11、HPV43、HPV31、HPV33、HPV51、HPV58、HPV59、HPV66亚型检出率年龄差异有统计学意义（P〈0．05）。结论江苏地区主要城市门诊女性HPV不同亚型单一和组合感染率存在明显的地区和年龄差异。

乙型肝炎病毒基因型不同的患者肝功能相关指标及免疫功能变化分析

目的探讨基因型不同的乙肝患者肝功能、病毒载量和免疫功能的差异及临床意义。方法145例乙肝患者划分两个年龄段：小于35岁和大于35岁，全部应用实时荧光PCR法进行乙型肝炎病毒（HBV）基因分型检测；同时采用实时荧光PCR法检测血清HBV-DNA载量；用全自动生化分析仪和流式细胞仪检测各组肝功能相关指标及淋巴细胞亚群含量。结果145例HBV患者仅为两种基因型，B基因型62例（42．76％），C基因型83例（57．24％）。B型患者谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和HBV-DNA均稍高于C型，分别是[（263．6±36．13）U／L比（243．1±37．69）U／L]、[（128．1±15．84）U／L比（123．6±19．1）U／L]和[（6．131±0．2133）比（5．875±0．1725）]，进行统计学分析后差异均无统计学意义（P〉0．05），但划分年龄段后，大于35岁的患者，B型ALT、AST和HBV-DNA均显著高于C型（P〈0．05），分别是[（227．6±34．52）U／L比（144．8±19．92）U／L]、[（124．5±19．4）U／L比（79．79±12）U／L]和[（6．166±0．2582）比（5．228±0．2644）]。淋巴细胞亚群分析可见，所有年龄段或大于35岁患者均是B型的CD4＋T细胞比例显著低于c型[（32．97±0．95）％比（35．81±0．85）％]（P〈0．05），CD8＋T细胞显著高于c型[（30．19±0．97）％比（27．44±0．92）％]（P〈0．05），而CD3＋T细胞、B细胞、NK细胞在B型和C型患者中则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论145例HBV患者B、C型的分布未见显著差异；肝功能、病毒载量及T细胞亚群在年龄较大的B、C两组患者中存在显著差异。

肺癌患者外周血中单个核细胞表面程序性死亡蛋白1及其受体的表达和生物学意义

目的分析肺癌患者外周血中单个核细胞表面协同刺激分子程序性死亡蛋白1（PD-1）及其受体（PD-L1）的表达特性，并探讨其生物学意义。方法取133例肺癌患者、25例肺部感染患者和23例健康志愿者的抗凝全血100μl，采用多色免疫荧光标记和流式细胞术对外周血中单个核细胞表面PD-1和PD-L1的表达水平进行检测和分析。结果肺癌患者外周血中CD3＋CD8＋T细胞亚群的比例为（38．83±1．74）％，明显低于健康志愿者[（43．25±3．35）％，P〈0．05]。肺癌患者外周血中CD8＋CD28＋T细胞亚群的比例为（17．73±1．21）％，明显低于健康志愿者[（27．96±2．72）％，P〈0．01]。肺癌患者外周血中CD8＋CD28-T细胞亚群的比例为（21．19±1．92）％，明显高于健康志愿者[（15．18±2．93）％，P〈0．05]。肺癌患者外周血中CD8＋CD28＋T细胞表面PD-1的表达水平为（10．67±1．12）％，较健康志愿者[（5．32±1．58）％]明显增高（P〈0．01）。肺癌患者外周血中CD8＋CD28-T细胞表面PD-1的表达水平为（7．464-1．25）％，明显高于健康志愿者[（2．68±1．07）％，P〈0．01]。肺癌患者外周血中CD68＋细胞表面PD—L1的表达水平为（16．03±2．06）％，较健康志愿者[（9．72±2．00）％]明显增高（P〈0．05）。结论PD-1和PD—LI在肺癌患者外周血中的表达上调对淋巴细胞产生负性调节作用，抑制了机体免疫系统对肿瘤细胞的杀伤效应，促进了肿瘤的发展并产生免疫逃逸。

慢性乙型肝炎患者血清肝纤维化指标水平及检测意义

目的探讨血清4项肝纤维化检测指标[透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)]在慢性乙肝患者血清中的水平及检测的临床意义。方法 127例慢性乙型肝炎患者根据肝脏活检的纤维化程度分为S1～S4组,采用化学发光法检测血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平,另选取健康体检者30例为正常对照组。对各组之间检测结果进行比较,并对4项指标与肝纤维化程度的相关性分析。结果 4项指标水平随肝组织纤维化程度总体呈现上升趋势,S4组的4项指标水平均显著高于S3组,差异有统计学意义(P <0. 05);肝脏组织纤维化程度分期与血清4项肝纤维化指标呈正相关性(P <0. 01);肝纤4项指标对肝脏纤维化程度≥S1的AUC分别为0. 862(HA)、0. 721(LN)、0. 858(PⅢ)、0. 814(CⅣ),灵敏度由高至低为PⅢ> HA> CⅣ> LN,特异度为HA> LN> PⅢ> CⅣ。结论活动性进展期的慢性乙型肝炎患者,肝纤4项检测结果能较好的反应肝纤维化程度,对临床的诊断,治疗效果监测及预后判断具有重要意义。

尘肺患者T细胞及T细胞活化状态分析

目的探讨尘肺及合并肺部感染患者外周血T细胞的表达特性及T细胞的活化状态,分析其与疾病的关系。方法选择尘肺患者120例,尘肺合并肺部感染患者20例,肺结核合并感染患者42例和健康志愿者23例,采集患者肝素抗凝全血100μL,运用流式细胞术检测CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞,CD8+CD28+活化T细胞及CD4+CD25hi调节性T细胞(Treg),同时采用统计学方法对结果进行分析和比较。结果与对照组、肺结核合并感染组比较,尘肺组及尘肺合并肺部感染组CD3+T细胞无明显变化(P>0.05);尘肺组、尘肺合并肺部感染组、肺结核合并感染组CD4+T细胞分别为(34.17±0.60)%、(33.11±2.36)%和(44.34±1.90)%,均明显低于对照组(49.94±1.72)%(P<0.05),且尘肺组、尘肺合并肺部感染组均明显低于肺结核合并感染组(P<0.05);尘肺、尘肺合并感染组CD8+T细胞分别为(27.85±0.66)%和(24.05±2.08)%明显低于对照组(42.15±1.18)%(P<0.05),而肺结核合并感染组则高于对照组(P<0.05)。CD8+CD28+的活化T细胞尘肺组、尘肺合并肺部感染组、肺结核合并感染组分别为(21.86±0.46)%、(20.35±1.82)%和(21.94±0.95)%均明显低于对照组(54.47±2.44)%(P<0.05),而CD4+CD25hi的Treg则明显高于对照组(P<0.05)。结论尘肺患者其疾病的发生和发展与T细胞亚群分布失衡密切相关,且其T细胞亚群的分布与结核并感染患者明显不同。

肝损伤新标志物miR-122的研究进展

ALT和AST是临床上普遍用来诊断肝损伤程度的指标，但由于ALT和AST在血清中表达水平的升高还有可能来自其他临床疾病，从而降低了它们临床诊断肝损伤的价值。miR-122在肝组织中特异性高表达．且在外周血中具有良好的稳定性，因此miR-122被认为是一种全新的用来诊断肝损伤程度的特异性生物标志物。此文将miR-122作为新的肝损伤诊断指标的研究进展作一综述。

一株鼠抗人TLT-2单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

为了制备鼠抗人TLT-2单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行初步的研究。以TLT-2基因转染细胞株免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗人TLT-2 mAb,收集腹水,并用ProteinG亲和层析法纯化。以流式细胞术、IP和Western blot等方法鉴定该单抗的特异性。并通过流式细胞术、CCK8和ELISA等方法对单抗的生物学特性进行了初步分析。结果:获得一株持续稳定分泌鼠抗人TLT-2 mAb的杂交瘤细胞株,命名为8C10。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ)。IP和Western blot分析证明,8C10能特异性识别人TLT-2分子。经8C10荧光染色后流式细胞术的结果表明:TLT-2在T细胞表面呈弱阳性表达,在单核细胞和B细胞表面呈强阳性表达。细胞增殖实验结果显示,该mAb对T细胞的增殖有抑制作用。提示,成功获得了一株特异性鼠抗人TLT-2 mAb,该mAb对T细胞体外增殖及其细胞因子IFN-γ、IL-2、和IL-10的分泌均有明显的抑制作用。