HPLC-CAD法同时测定千柏鼻炎片中盐酸麻黄碱、绿原酸、对羟基桂皮酸、金丝桃苷及大黄素5个活性成分的含量

目的:建立高效液相色谱法联合电雾式检测器(HPLC-CAD)同时测定千柏鼻炎片中盐酸麻黄碱、绿原酸、对羟基桂皮酸、金丝桃苷及大黄素的含量,为千柏鼻炎片的质量控制提供依据。方法:采用HPLC-CAD法,色谱柱为Thermo Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇(A)-20 mmol·L-1甲酸铵(甲酸调p H至4.0)(B)为流动相,梯度洗脱,流量:1.0 ml·min^-1,柱温:35℃,进样量:20μl,CAD雾化器温度:35℃,过滤常数:5.0。结果:盐酸麻黄碱、绿原酸、对羟基桂皮酸、金丝桃苷及大黄素的质量浓度分别在1.03~20.60μg·ml^-1(r=0.9991)、1.17~23.40μg·ml^-1(r=0.9992)、1.10~22.00μg·ml^-1(r=0.9991)、1.17~23.40μg·ml^-1(r=0.9995)及0.14~2.80μg·ml^-1(r=0.9994)内线性关系良好。盐酸麻黄碱、绿原酸、对羟基桂皮酸、金丝桃苷及大黄素的平均加样回收率分别为98.21%,99.36%,98.27%,98.28%,98.68%,RSD分别为0.77%,1.82%,0.70%,1.09%,1.68%(n=6)。结论:本方法准确性好,灵敏度高,简便易行,可用于千柏鼻炎片中多指标成分的质量控制研究。

高脂饮食对磷酸奥司他韦在中国健康受试者体内药代动力学的影响

目的考察在空腹和高脂高热量饮食2种条件下对中国健康受试者单次口服磷酸奥司他韦的主要药代动力学参数的影响.方法72例健康受试者分别在空腹或高脂饮食条件下单剂量口服磷酸奥司他韦胶囊75 mg,根据方案要求,分别在22个时间点采集静脉血样.用经验证的HPLC-MS/MS法测定人血浆中奥司他韦和奥司他韦羧酸盐的浓度,药代动力学参数由Phoenix WinNonlin 8.2软件按非房室模型计算得出.结果奥司他韦胶囊空腹和进食后,奥司他韦的主要药代动力学参数如下:C_(max)分别为(99.74±44.92),(45.02±10.80)ng·mL^(-1);AUC_(0-t)分别为(158.17±33.69),(181.30±44.47)ng·mL^(-1)·h;AUC_(0-∞)分别为(160.21±34.20),(189.43±46.24)ng·mL^(-1)·h;T_(max)中位数(范围)分别为0.49(0.32,2.99)h和2.99(0.74,4.49)h.活性代谢产物奥司他韦羧酸盐的主要药代动力学参数如下:C_(max)分别为(358.81±59.72)和(255.25±50.86)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(3879.46±561.98)和(3844.85±706.71)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(3918.91±565.28)和(3955.81±739.06)ng·mL^(-1)·h,T_(max)中位数(范围)分别为4.49(1.99,6.01)和5.99(4.99,7.99)h.结论高脂饮食较空腹条件下服药,C_(max)显著降低,T_(max)明显延迟,对AUC影响较小,食物对磷酸奥司他韦胶囊的吸收速度有显著影响,对吸收程度影响不大.

磷酸奥司他韦胶囊在健康中国受试者的生物等效性研究

目的:评价磷酸奥司他韦胶囊受试制剂与参比制剂(达菲Ⓒ)在健康受试者空腹和餐后状态下的生物等效性和安全性。方法:采用单中心、随机、开放、两周期、自身交叉、单次给药试验设计,健康受试者分别空腹(36例)和餐后(36例)服用75 mg磷酸奥司他韦胶囊受试制剂或参比制剂,采用高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测奥司他韦和奥司他韦酸的浓度,WinNonlin 8.2软件计算药动学参数,评价两制剂的生物等效性。结果:受试者空腹试验(36例)和餐后试验(35例)奥司他韦和奥司他韦酸C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)受试制剂与参比制剂几何均值比值的90%CI在80%~125%范围内,两制剂生物等效。试验中共发生8例次与试验药物可能有关的不良事件。结论:在空腹和餐后状态下,受试制剂与参比制剂在健康受试者中具有生物等效性,安全性良好。

柱前衍生化LC-MS/MS测定生物等效性研究受试者血浆中卡托普利的浓度

目的:卡托普利结构中的巯基使其在血浆中极度不稳定,影响生物分析的准确性。本文建立了柱前衍生化液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析方法测定人血浆中卡托普利的浓度。方法:血浆样品经对溴苯甲酰甲基溴衍生化后,以乙腈沉淀蛋白处理,经Eclipse Plus-C18色谱柱分离。采用配备电喷雾离子源的三重四极杆质谱仪,以多反应监测(MRM)正离子模式检测。本方法以稳定性同位素标记的卡托普利-d3作为卡托普利的内标。用于定量分析的离子反应为m/z 414.4→216.2(卡托普利)和m/z 417.1→219.2(卡托普利-d3)。结果:本方法检测卡托普利的线性范围为2.00~800 ng·mL^-1。待测物的日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析相关要求。结论:该方法经验证后,成功应用于卡托普利片生物等效性研究中。

辛伐他汀片空腹和餐后给药人体生物等效性研究

目的:评价中国健康受试者空腹和餐后口服辛伐他汀片后,辛伐他汀和代谢物辛伐他汀酸的人体生物等效性。方法:本研究包括空腹和餐后给药的2个试验,均为随机、开放、两制剂、三序列、三周期、部分重复交叉设计的生物等效性试验。空腹和餐后各入组42名健康受试者,分成3组,每组受试者分别交叉口服20 mg辛伐他汀片的受试制剂1次和参比制剂2次。采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测给药后血浆中辛伐他汀及其代谢物辛伐他汀酸的浓度。结果:在评价2种制剂的生物等效性时,当药动学参数(Cmax,AUC0~t,AUC0~∞)的个体内标准差SWR<0.294时,以平均生物等效性评价方法(ABE)进行评价;SWR≥0.294时,则以参比制剂标度的平均生物等效性方法(RSABE)进行评价。空腹给药后,参比制剂辛伐他汀的AUC0~t和AUC0~∞的个体内标准差SWR分别为0.323和0.318,(YT-YR)^2-θs^2 WR的95%置信区间上限分别为-0.005和-0.0103,且受试制剂与参比制剂的几何均值比(T/R)分别为118.41%和116.70%;参比制剂辛伐他汀Cmax的个体内标准差SWR为0.255,受试与参比的几何均值数比值(T/R)及其90%置信区间为103.42%(95.30%~112.23%)。代谢物辛伐他汀酸的各参数的个体内标准差SWR均<0.294,AUC0~t,AUC0~∞,Cmax的几何均值比值(T/R)及其90%置信区间分别为112.82%(105.99%~120.08%),111.86%(105.11%~119.04%),115.05%(107.57%~123.05%)。高脂餐给药后,参比制剂辛伐他汀的Cmax的个体内标准差SWR为0.349,(YT-YR)^2-θs^2 WR的95%置信区间上限为-0.0341,受试制剂与参比制剂Cmax几何均值比值为87.12%;参比制剂辛伐他汀的AUC0~t及AUC0~∞的个体内标准差SWR均<0.294,几何均值数比值(T/R)及其90%置信区间分别为95.73%(89.63%~102.25%)和95.92%(89.90%~102.34%)。代谢物辛伐他汀酸的Cmax,AUC0~t,AUC0~∞的个体内标准差SWR均>0.294,这些参数的(YT-YR)^2-θs^2 WR的95%置信区间上限均<0,且几何均值比均在80.00%~125.00%。结论:在空腹和餐后条件下,受试制剂与参比制剂辛伐他汀和代谢物辛伐他汀酸的药动学评价指标具有生物等效性。

ELISA法检测人血清中重组人信号调节蛋白α-抗CD20人鼠嵌合抗体融合蛋白IMM0306的方法学建立和验证

IMM0306是重组人信号调节蛋白α-抗CD20人鼠嵌合抗体融合蛋白,拟在临床中治疗难治或复发性CD20阳性B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。本文建立了ELISA法(酶联免疫吸附法)用于评价人血清中IMM0306的药代动力学。该实验获得中国医学科学院肿瘤医院伦理委员会批准(批准号:CTR20192612)。用重组人CD47蛋白包被过夜, 5%脱脂奶粉封闭2 h,洗涤板后,按照板位图每孔加入100μL样本孵育1.5 h,洗涤后加入生物素标记的检测抗体anti-IMM0306-biotin并孵育1 h,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素孵育1 h,显色并检测。捕获试剂的最佳包被浓度为2μg·mL^(-1),检测试剂anti-IMM0306-biotin和链霉亲和素-HRP的最佳稀释度分别为1∶500和1∶5 000。该方法的定量下限为4 ng·mL^(-1),标准曲线范围是4~100 ng·mL^(-1)。方法的验证结果均满足相应的接受标准,可以用于IMM0306临床药代动力学研究。

高通量LC-MS/MS法测定受试者血清中替诺福韦的浓度

目的:建立高通量液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血清中替诺福韦的浓度。方法:血清样品以沉淀蛋白法处理后,采用Eclipse Plus-C18色谱柱快速梯度色谱分离,经串联四极杆质谱仪检测。质谱监测离子反应为m/z 288.1→176.2(替诺福韦)和m/z 295.2→183.1(内标替诺福韦-d7)。结果:本方法检测替诺福韦的线性范围为4.00~800 ng·mL^-1。各方法验证项均符合生物样品分析相关法规要求。方法经验证后,可应用于富马酸替诺福韦二吡呋酯片人体生物等效性研究中。受试者空腹及高脂餐后口服受试制剂及参比制剂Cmax,AUC0-t和AUC0-∞几何均值比的90%置信区间均在80%~125%之间。结论:本方法前处理操作方便、仪器检测速度快,分析方法可实现高通量。