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CCL20基因敲低型组织工程皮肤种子细胞的克隆筛选及其干扰效果
被引量:
3
1
作者
王丽华
彭代智
+7 位作者
刘敬
周新
王勇
何升东
何斌
郑必祥
董征学
周光前
《中华外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期621-624,共4页
目的采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),筛选出稳定干扰CCL20基因表达的细胞克隆并检测其干扰效果。方法用CaCl2法将已构建好的3种pHSER—CCL20-shRNA—GFP载体(pHCG-1和pHCG-2为CCL20基因...
目的采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),筛选出稳定干扰CCL20基因表达的细胞克隆并检测其干扰效果。方法用CaCl2法将已构建好的3种pHSER—CCL20-shRNA—GFP载体(pHCG-1和pHCG-2为CCL20基因特异性,pHCG-3为CCL20基因错配)转染293FT包装出慢病毒颗粒,流式细胞术测定其病毒滴度。用G418压力筛选慢病毒感染的HaCaT,荧光定量RT—PCR和ELISA法分别检测CCL20基因mRNA和蛋白的表达水平,以判断其特异性干扰效果。结果三种慢病毒载体所包装出的慢病毒滴度分别为7.08×10^5转导单位(TU)/ml、1.88×10^5TU/ml和2.08×10^5TU/ml;感染后的HaCaT经过G418筛选5~8周,获得4株CCL20基因特异性的细胞克隆(HaCaT-1、HaCaT-2、HaCaT-3和HaCaT-4)及2株CCL20基因错配对照的细胞克隆(HaCaT-5和HaCaT-6)。经荧光定量PCR和ELISA法检测显示,4株CCL20基因特异性细胞克隆均具有稳定干扰效果,不仅能显著地下调CCL20基因的mRNA表达(其抑制率分别为81.0%、89.0%、81.3%、77.2%),而且明显地减少CCL20蛋白分泌(其抑制率分别为70.0%、86.1%、88.1%、90.7%)。结论采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染HaCaT可以筛选出具有长期稳定表达RNA干扰效应的CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞克隆,将可能为低免疫排斥反应异基因组织工程皮肤的构建提供种子细胞。
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关键词
RNA干扰
慢病毒属
组织工程
种子细胞
原文传递
题名
CCL20基因敲低型组织工程皮肤种子细胞的克隆筛选及其干扰效果
被引量:
3
1
作者
王丽华
彭代智
刘敬
周新
王勇
何升东
何斌
郑必祥
董征学
周光前
机构
第三军医
大学
西南医院全军烧伤
研究
所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
英国贝尔法斯特女王大学癌症研究和细胞生物学中心
出处
《中华外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期621-624,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471679)
国家重点基础研究发展计划资助项目(2005CB522605)
国家高技术研究发展计划资助项目(2006AA02A121)
文摘
目的采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染人永生化角质形成细胞系(HaCaT),筛选出稳定干扰CCL20基因表达的细胞克隆并检测其干扰效果。方法用CaCl2法将已构建好的3种pHSER—CCL20-shRNA—GFP载体(pHCG-1和pHCG-2为CCL20基因特异性,pHCG-3为CCL20基因错配)转染293FT包装出慢病毒颗粒,流式细胞术测定其病毒滴度。用G418压力筛选慢病毒感染的HaCaT,荧光定量RT—PCR和ELISA法分别检测CCL20基因mRNA和蛋白的表达水平,以判断其特异性干扰效果。结果三种慢病毒载体所包装出的慢病毒滴度分别为7.08×10^5转导单位(TU)/ml、1.88×10^5TU/ml和2.08×10^5TU/ml;感染后的HaCaT经过G418筛选5~8周,获得4株CCL20基因特异性的细胞克隆(HaCaT-1、HaCaT-2、HaCaT-3和HaCaT-4)及2株CCL20基因错配对照的细胞克隆(HaCaT-5和HaCaT-6)。经荧光定量PCR和ELISA法检测显示,4株CCL20基因特异性细胞克隆均具有稳定干扰效果,不仅能显著地下调CCL20基因的mRNA表达(其抑制率分别为81.0%、89.0%、81.3%、77.2%),而且明显地减少CCL20蛋白分泌(其抑制率分别为70.0%、86.1%、88.1%、90.7%)。结论采用重组慢病毒CCL20基因特异性shRNA载体感染HaCaT可以筛选出具有长期稳定表达RNA干扰效应的CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞克隆,将可能为低免疫排斥反应异基因组织工程皮肤的构建提供种子细胞。
关键词
RNA干扰
慢病毒属
组织工程
种子细胞
Keywords
RNA interference
Lentivirus
Tissue engineering
Seed cells
分类号
R686 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CCL20基因敲低型组织工程皮肤种子细胞的克隆筛选及其干扰效果
王丽华
彭代智
刘敬
周新
王勇
何升东
何斌
郑必祥
董征学
周光前
《中华外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
原文传递
已选择
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参考文献
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