辅助生殖技术中卵母细胞滑面内质网聚集研究进展

人类辅助生殖技术过程中的促排卵药物会导致卵母细胞胞浆出现多种形态异常。卵母细胞滑面内质网聚集(aggregates of smooth endoplasmic reticulum,SERa)就是胞浆异常的一种,能够影响胚胎质量和临床结局。临床上针对SERa的卵母细胞的处理方法不统一。有健康新生儿出生报道认为丢弃SERa的卵母细胞是一种不谨慎的表现,特别是对于可用卵子数量有限的夫妇,可能增加移植周期取消率,导致受孕机会减低。对于SERa的形成原因,生殖工作者应该继续深入研究其机制,寻找避免SERa形成的干预策略,改善不孕症患者的临床结局。

褪黑素对无渗透性冷冻保护剂的精子玻璃化冷冻影响

目的探讨褪黑素在无渗透性冷冻保护剂微量精子玻璃化冷冻技术中的研究。方法选取2022年4-9月在荆门市人民医院生殖医学中心就诊的30例男性患者的精液样本。每份标本分为常规冷冻组、微滴冷冻组、无保护剂微滴冷冻组、褪黑素+无保护剂微滴冷冻组。通过计算机辅助精液分析法(CASA)观察冷冻前及冷冻后精子前向运动(PR),伊红-苯胺黑染色检测精子存活率,改良巴氏染色检测正常形态率以及顶体完整率,低渗肿胀试验检测质膜完整率,SCD法检测DNA完整性检测,试剂盒检测MDA、SOD、GSH-Px水平等。结果微滴冷冻组、无保护剂微滴冷冻组复苏后PR、复苏率及复苏后存活率高于常规冷冻组(P<0.05);褪黑素+无保护剂微滴冷冻组复苏后PR和复苏率高于无保护剂微滴冷冻组(P<0.05)。褪黑素+无保护剂微滴冷冻组复苏后正常形态率和顶体完整性明显高于其他3组(P<0.05)。微滴冷冻组、无保护剂微滴冷冻组复苏后质膜完整率高于常规冷冻组(P<0.05);褪黑素+无保护剂微滴冷冻组复苏后质膜完整率高于微滴冷冻组(P<0.05),而DFI明显低于微滴冷冻组(P<0.05)。与常规冷冻组相比,无保护剂微滴冷冻组、褪黑素+无保护剂微滴冷冻组MDA明显降低(P<0.05),SOD以及GSH-Px明显升高(P<0.01);与微滴冷冻组相比,褪黑素+无保护剂微滴冷冻组MDA明显降低(P<0.05)。褪黑素+无保护剂微滴冷冻组SOD、GSH-Px较其他3组明显升高(P<0.05)。结论无渗透性冷冻保护剂添加褪黑素能够提高复苏后精子的PR、活力、正常形态、DFI、质膜和顶体完整性,主要与降低MDA,增加SOD以及GSH-Px表达有关。

褪黑素对顺铂诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4损伤保护作用机制

目的顺铂应用于睾丸支持细胞方面的研究较少。文中旨在探索褪黑素对顺铂诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的保护作用研究,并探讨其可能的机制。方法体外培养小鼠睾丸支持细胞TM4,将细胞分为对照组(给予等量等渗盐水)、顺铂组(添加0.014 mg/mol的顺铂孵育24 h造就损伤模型)、顺铂+褪黑素组(顺铂处理前0.5 h添加1 mmol/L的褪黑素预处理)、褪黑素组(添加1 mmol/L的褪黑素孵育)。采用MTT法检测褪黑素和顺铂对TM4细胞生长的影响以及检测褪黑素对顺铂诱导的TM4细胞氧化损伤的保护作用;检测细胞内丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)以及过氧化氢酶(CAT)的含量;Western blot检测细胞内ZO-1、Occludin、β-catenin、及Nrf2/ARE通路核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)等蛋白表达情况。结果活力检测结果显示,顺铂组丙二醛活力表达较对照组明显升高(P<0.05),较顺铂+褪黑素组明显降低(P<0.05),SOD、GSH、CAT活力表达较对照组、顺铂+褪黑素组明显下降(P<0.01)。褪黑素组SOD、CAT表达较对照组明显升高(P<0.05)。顺铂+褪黑素组、对照组ZO-1、Occludin蛋白表达较顺铂组明显升高(P<0.01),β-catenin蛋白较顺铂组明显降低(P<0.01);顺铂+褪黑素组ZO-1、Occludin蛋白表达较褪黑素组明显降低(P<0.01)。Western blot结果显示,顺铂组中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达(0.31±0.03、0.27±0.02、0.42±0.03)较对照组(1.00±0.13、1.00±0.14、1.00±0.17)明显下降(P<0.01);顺铂+褪黑素组Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达(0.90±0.05、0.82±0.04、0.77±0.05)较顺铂组明显升高(P<0.01),HO-1、NQO1表达较褪黑素组明显降低(P<0.01)。结论褪黑素能有效抑制顺铂诱导的TM4细胞毒性损伤作用,其机制可能与激活NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路相关。

HGF/c-Met信号通路在少弱精子症模型中的作用

目的观察环磷酰胺(CTX)对雄性小鼠生殖功能的影响,探讨HGF/c-Met信号通路在少弱精子症模型保护作用及机制。方法昆明小鼠按随机数字表法分为:对照组、HGF组、模型组和HGF+模型组,每组20只。其中模型组和HGF+模型组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续7d制备少弱精子症模型,但HGF+模型组第8天开始尾静脉注射HGF 1 mg/kg,隔日1次,连续7次;对照组和HGF组每天腹腔注射等量的等渗盐水,但HGF组从第8天开始尾静脉注射HGF 1 mg/kg,隔日1次,连续7次。给药结束后检测各组小鼠精子质量、生殖器指数变化,HE染色检测睾丸病理结构变化,Western blot检测睾丸组织中Met和p-Met蛋白表达情况;试剂盒检测血清性激素促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、血清睾酮(T)以及睾丸组织中丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)水平等表达水平。结果与对照组比较,模型组中的p-c-Met蛋白表达水平均明显下降(P<0.01),而HGF组中的p-c-Met蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,HGF+模型组和HGF组中的p-c-Met蛋白表达显著升高(P<0.01);与HGF+模型组相比,HGF组中的p-c-Met蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与对照组睾丸指数[(6.43±0.51)mg/g]和附睾指数[(1.83±0.25)mg/g]相比,模型组中的睾丸指数[(5.21±0.36)mg/g]和附睾指数[(1.67±0.31)mg/g]明显下降(P<0.05),HGF+模型组中的睾丸指数[(174±0.29)mg/g]降低(P<0.01)。与模型组比较,HGF+模型组中的睾丸指数[(5.97±0.54)mg/g]明显升高(P<0.05),附睾指数也在升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与HGF+模型组相比,HGF组中的睾丸指数[(6.23±0.61)mg/g]明显升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠的精子浓度、精子活力均明显降低(P<0.01),而精子畸形率明显升高(P<0.01),HGF+模型组中精子浓度、精子活力液均下降(P<0.01),精子畸形率也升高(P<0.01);与模型组比较,HGF+模型组中小鼠精子浓度、活力升高(P<0.01)、精子畸形率下降(P<0.01),HGF组中小鼠精子浓度、活力也均升高(P<0.01)、精子畸形率下降(P<0.01);与HGF+模型组相比,HGF组中小鼠精子浓度、活力升高(P<0.05)、精子畸形率降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠睾丸组织严重损伤,结构层次混乱,精子细胞并且排列紊乱,曲细精管呈现空泡化,细胞间距增大,与模型组比较,HGF+模型组中小鼠睾丸生精细胞排列整齐、紧密、规则,生精细胞层数和数量明显增多,HGF组中小鼠睾丸组织小鼠生精小管管腔饱满,生精上皮外的界膜均匀、完整;与HGF+模型组相比,HGF组生精上皮厚度适中,可见密度适当的精子,各级细胞排列精密,层次分明。与对照组比较,模型组小鼠睾丸组织中丙二醛水平显著升高(P<0.01),抗氧化指标SOD、GSH水平显著降低(P<0.01),HGF+模型组中丙二醛水平升高(P<0.01);与模型组比较,HGF+模型组中小鼠睾丸组织中丙二醛水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH水平水平显著升高(P<0.05);与HGF+模型组相比,HGF组中鼠睾丸组织中丙二醛水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠性激素LH和FSH水平显著升高(P<0.01)、T显著降低(P<0.01),HGF+模型组中LH和FSH水平升高(P<0.01)、T水平降低(P<0.01);与模型组比较,HGF+模型组中中T表达水平升高(P<0.05)、LH和FSH水平降低(P<0.05),HGF组中T表达水平明显升高(P<0.01),LH、FSH水平显著降低(P<0.01);与HGF+模型组相比,HGF组中T表达水平升高(P<0.05),LH和FSH水平降低(P<0.05)。结论HGF/c-Met信号通路对环磷酰胺引起的小鼠少弱精子症有一定保护作用,其机制与抗氧化保护作用、降低LH、FSH水平进而维持睾酮水平有关。

宫腔粘连大鼠模型的构建以及二甲双胍对模型大鼠生育能力的改善作用

目的构建大鼠宫腔粘连模型,并探讨二甲双胍对宫腔粘连大鼠生育能力的改善作用。方法(1)取30只SD雌性大鼠随机分为对照组和造模组各15只,其中造模组采用刮宫联合感染法构建宫腔粘连大鼠模型。于造模后第7天、第14天以及第21天,取各组大鼠子宫组织,检测子宫内膜腺体数量、子宫内膜厚度、子宫内膜纤维化比例,以及转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad 3、纤维粘连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及其mRNA的表达水平。(2)另取15只SD雌性大鼠随机分为对照组、造模组、造模+二甲双胍组各5只,后两组采用同法构建宫腔粘连大鼠模型。造模14 d后,造模+二甲双胍组开始给予二甲双胍灌胃,其他两组给予生理盐水灌胃。服药4周后,将雌性大鼠与雄性大鼠合笼,评估大鼠孕囊数。结果(1)随着造模时间的延长,造模组大鼠的子宫内膜腺体数量减少、子宫内膜厚度变薄、宫内膜内膜纤维化比例增加,且以上表现均较对照组更严重(均P<0.05);TGF-β1、Smad 3蛋白及mRNA的表达水平,以及FN和α-SMA的mRNA表达水平均增高,且高于对照组(均P<0.05)。(2)对照组、造模+二甲双胍组、造模组大鼠的子宫内孕囊数依次降低(均P<0.05)。结论刮宫联合感染法能够构建稳定的宫腔粘连大鼠模型,且模型的子宫组织纤维化相关指标出现高表达。二甲双胍能够改善宫腔粘连大鼠的生育能力。

病毒感染与男性不育关系的研究进展

近年来研究发现病毒感染与不孕不育存在一定的联系,人类免疫缺陷病毒、乙肝病毒等感染不仅损伤生殖系统的功能、影响生育能力,而且也能够通过性接触传播而导致不育,病毒的遗传物质可通过干扰精卵正常受精或影响胚胎的正常着床导致不孕。在男性不育方面,病毒主要通过损伤睾丸功能和影响精子浓度、活力、形态以及DNA完整性使精子质量降低,影响正常精卵结合,进而导致男性生育能力下降甚至不育。本文就相关病毒感染与男性不育的关系做一综述。

抑制Sonic hedgehog信号通路对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨抑制Sonic hedgehog(Shh)信号通路对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养Hela细胞并分为对照组、Cyclopamine 10μmol组、Cyclopamine 20μmol组、Cyclopamine 40μmol组;以不同剂量的Shh信号通路抑制剂Cyclopamine抑制Shh信号通路后,通过CCK?8检测各组Hela细胞的增殖情况;通过ELISA法检测细胞Caspase?3和Caspase?9含量表达情况;通过Western Blot法检测细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl?2和Bax蛋白的表达。结果(1)随着Cyclopamine药物浓度的增大,Shh信号通路抑制情况更加明显;(2)与对照组相比,抑制Shh信号通路后能够明显抑制Hela细胞的增殖、促进凋亡相关因子Caspase?3和Caspase?9表达;(3)与对照组相比,Cyclopamine抑制Shh信号通路后,与增殖有关蛋白PCNA以及抗凋亡蛋白Bcl?2的表达量显著下调(P<0.01),而促凋亡蛋白Bax的表达量升高(均P<0.01)。结论抑制Shh信号通路能够明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、促进凋亡,其作用可能与PCNA蛋白表达逐渐下降,抑制Hela细胞DNA合成及分裂增殖有关。

二甲双胍调控TGF-β_(1)/Smad信号通路治疗宫腔粘连的机制研究

目的目前关于二甲双胍用于预防和治疗宫腔粘连的研究较少。文中旨在探讨二甲双胍通过调控TGF-β_(1)/Smad信号通路治疗宫腔粘连的机制研究。方法将40只大鼠分为对照组:双侧子宫未行处理,未行二甲双胍处理;建模组:刮宫联合感染法构建宫腔粘连模型,未行二甲双胍处理;二甲双胍灌胃组:刮宫联合感染法构建宫腔粘连模型,行二甲双胍灌胃[300 mg/(kg·day)],连续服用4周;二甲双胍宫腔灌注组:刮宫联合感染法构建宫腔粘连模型,行二甲双胍宫腔灌[300 mg/(kg·day)],隔日一次,连续使用4周。每组10只。荧光定量PCR及Western blot检测TGF-β_(1)/Smad信号通路中TGF-β_(1)、Smad3、MMP9、Fibronectin以及a-SMA mRNA及蛋白的表达。同时观察各组大鼠宫腔内孕囊情况。结果建模组TGF-β_(1)、Smad3、Fibronectin、a-SMA的蛋白及mRNA表达较对照组、二甲双胍灌胃组明显上调(P<0.001),MMP9蛋白及mRNA明显下降(P<0.001)。二甲双胍宫腔灌注组中TGF-β_(1)、Smad3、Fibronectin及a-SMA的mRNA表达较二甲双胍灌胃组明显下降(P<0.05),MMP9 mRNA表达明显上调(P<0.05)。同时,二甲双胍宫腔灌注组TGF-β_(1)和a-SMA的蛋白表达(0.18±0.04,0.07±0.01)较二甲双胍灌胃组(0.27±0.04,0.29±0.03)明显下调(P<0.05),MMP9蛋白明显上调(P<0.05)。对照组、建模组、二甲双胍灌胃组以及二甲双胍宫腔灌注组宫腔中孕囊数分别为(11.0±1.6)个、(3.2±0.8)个、(6.6±1.1)个以及(8.2±0.8)个,差异有统计学意义(P<0.001)。结论二甲双胍能够通过调控TGF-β_(1)/Smad信号通路逆转宫腔粘连,改善宫腔粘连大鼠生育能力,宫腔灌注效果最佳。

Shh信号通路对宫颈癌细胞增殖与凋亡影响的机制研究

目的探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路激活后对宫颈癌海拉细胞(Hela)增殖与凋亡影响的机制是否与PI3K/AKt信号通路有关。方法体外培养Hela细胞分别分为对照组、Shh组、Shh+LY294002(LY)组、LY组。LY294002抑制PI3K/AKt信号通路后,再用Purmorphamine(Pur)激活Shh信号通路,并运用四唑盐(MTT)检测Hela细胞的增殖情况;运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Hela细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)含量表达情况;通过免疫印迹法(Westernblot)法检测Hela细胞B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果(1)与对照组比较,Shh组中Hela细胞的增殖比较明显,差异有显著统计学意义(P<0.01);与Shh组比较,Shh+LY组Hela细胞的增殖明显受抑制,差异有显著统计学意义(P<0.01);与Shh+LY组比较,LY组能够明显抑制Hela细胞增殖,差异有显著统计学意义(P<0.01)。(2)与对照组比较,Shh组能够抑制Caspase-3和Caspase-9表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01);与Shh组比较,Shh+LY组能够促进凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01);与Shh+LY组比较,LY组能够促进凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组比较,Shh组能够抑制Bax表达,促进Bcl-2表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01);与Shh组比较,Shh+LY组能够明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促凋亡蛋白Bax的表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01);与Shh+LY组比较,LY组能够明显促进Bax表达以及抑制Bcl-2表达,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论激活Shh信号通路能够促进Hela细胞增殖以及抑制细胞凋亡,其机制可能与PI3K/AKt通路有关。

集束化管理在子宫瘢痕妊娠治疗的应用分析

剖宫产术后子宫切口不良愈合,瘢痕处子宫肌层变薄,进而形成与宫腔相连通的凹陷或腔隙,该凹陷或腔隙被称为剖宫产术后子宫瘢痕憩室或者剖宫产术后子宫切口缺损[1],当再次怀孕后孕囊着床位置位于子宫肌层及瘢痕纤维组织处形成了剖宫产瘢痕妊娠(cesarean scar pregnancy,CSP)[2]。CSP能够导致胎盘植入、失血性休克以及子宫破裂等,使得围产期危险增加,严重者可导致患者因大出血死亡。早诊断、早终止、早清除是治疗CSP的关键[3]。子宫动脉栓塞术(uterine artery embolization,UAE)通过阻滞供应子宫以及妊娠组织的血供,同时辅以化疗药物杀死胚胎,降低胚胎组织与子宫壁之间的黏附。在UAE术后24~72 h B超阴道下清宫,减少术中出血,避免患者子宫切除[4]。集束化干预策略是集合一系列有循证基础的治疗及护理措施,用来处理某种难治的临床疾患,这些循证指南若同时施行较单独执行有着更好的效果[5]。本研究通过前瞻性研究探讨将集束化护理应用于CSP治疗的疗效。

金属蛋白酶组织抑制因子在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其意义

目的:研究基质金属蛋白酶(MMP)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)在稽留流产患者绒毛组织的表达,探讨孕期高凝状态在稽留流产中的作用。方法:以2018年3月~2019年10月在荆门市第二人民医院诊断为稽留流产的45名患者为实验组,以同期45例正常妊娠要求行人工流终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,检测两者外周血纤维蛋白原降解产物(FDP)、D二聚体含量,绒毛组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、VEGF蛋白表达水平。结果:实验组FDP及D二聚体均较对照组显著升高(P<0.001)。实验组绒毛组织MMP-9蛋白表达量高于对照组,TIMP-1、VEGF蛋白表达量低于对照组(P<0.05)。结论:稽留流产患者处于高凝状态,可导致胚胎停育,其机制与患者绒毛膜组织MMP-9升高,TIMP-1下降,VEGF下降有关。

构建基于凋亡相关基因的膀胱癌预后模型

目的细胞凋亡在膀胱癌(BC)发生、发展以及化疗等生物学进程中发挥着重要作用。文中通过分析差异表达的凋亡相关基因(ARGs)以及临床特征,构建预测BC患者预后的模型。方法分析肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中161个ARGs,筛选出差异表达基因。通过GO和KEGG分析差异表达ARGs在BC中潜在的分子机制。Cox回归分析ARGs在预后的价值,构建评价患者的以后风险模型。使用Kaplan-Meier(KM)曲线和受试者工作特征(ROC)曲线以确定模型的预后价值。结果与正常膀胱组织相比,BC组织中41个差异表达ARGs。GO和KEGG分析发现差异表达ARGs与铂类耐药、细胞凋亡、细胞周期等生物学进程有关,同时也与P53等一些肿瘤发生经典途径调控信号通路相关。多因素Cox回归分析发现4个基因(AIFM3、TAP1、CASP6、EMP1)与BC患者生存和预后密切相关。基于人类蛋白质图谱网站数据库验证指出4个基因在肿瘤组织和癌旁正常组织之间也存在差异性表达,并且与患者预后密切相关。KM分析显示高风险评分组的预后明显差于低风险评分组(P=6.002e-06<0.0001)。风险评分与相应的临床变量相结合,构建预测患者生存率的诺模图,预测C指数为0.694,预测1年、3年和5年BC生存率的ROC曲线下面积分别为0.652、0.648和0.684。结论基于ARGs的预后模型可以用于BC患者的预后预测。

miR-532-3p和HMGA2在宫颈癌中的表达水平及临床意义

目的检测微小RNA-532-3p(miR-532-3p)、高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)在宫颈癌组织中的表达水平,探讨两者表达的相关性,并分析两者的表达与宫颈癌患者病理参数的关系及对患者预后的影响。方法收集2013年1月-2014年12月期间于我院诊疗的宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织84对,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分别检测miR-532-3p、HMGA2在宫颈癌和癌旁组织中的表达量。Target Scan7.2在线软件预测miR-532-3p与HMGA2 3’UTR区的结合位点;采用sperman分析miR-532-3p与HMGA2在宫颈癌组织中表达的相关性;t检验分析miR-532-3p、HMGA2的表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-532-3p、HMGA2的表达水平对宫颈癌患者预后的影响;Cox多因素分析影响宫颈癌患者独立预后的危险因素。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-532-3p的表达下调(t=5.206,P<0.000),HMGA2的表达上调(t=7.544,P<0.000)。miR-532-3p与HMGA2的3’UTR区存在潜在的互补结合位点。miR-532-3p与HMGA2在宫颈癌组织中的表达呈负相关(r=-0.824,P=0.013)。宫颈癌组织中miR-532-3p的表达与患者的浸润深度和FIGO分期相关(P<0.05),HMGA2的表达与患者淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)。低表达miR-532-3p的宫颈癌患者和高表达HMGA2的宫颈癌患者预后较差(P<0.05)。淋巴结转移、miR-532-3p低表达和HMGA2高表达是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素。结论 miR-532-3p和HMGA2均与宫颈癌患者的恶性进展相关,两者可能是宫颈癌新的治疗靶标和预后标志物。