木通科4属植物导管穿孔板的比较研究

运用扫描电子显微镜法(SEM)对木通科(Lardizabalaceae)4属植物茎的次生木质部导管分子进行观察,结果表明:(1)端壁均具有单穿孔板;(2)串果藤属的导管分子具有丰富的穿孔板类型,包括网状、梯状、单穿孔及过渡类型,穿孔具有网状、丝状、片状的纹孔膜残余;大血藤属和八月瓜属的导管分子具有相似的特征,端壁具有梯状、单穿孔及梯—单混合穿孔板;野木瓜属只具有单穿孔板;(3)侧壁上具有穿孔板,多为梯状或梯—网混合类型(除了野木瓜属);(4)野木瓜属的导管侧壁具有独特的螺旋状加厚。各属导管的不同特征为木通科的系统演化提供比较可靠的依据。

中国珍稀药用植物白及的潜在分布与其气候特征

基于白及(Bletilla striata)地理分布信息和影响白及分布的主导气象因子,利用最大熵模型和地理信息系统预测了中国白及的潜在分布与其气候特征。结果表明:所建模型经ROC曲线验证,预测效果非常好(AUC>0.9);中国白及潜在分布区主要位于秦岭、淮河以南大部分地区,白及主要适生省份为云南、湖北、四川、湖南、江西、浙江;刀切法测试表明,4月和10月最低气温、年温度变化范围、11月平均降水量为影响白及潜在分布的最主要气象因子。研究结果可为白及资源的调查、保护与人工种植产业的发展提供理论指导。

三种细辛挥发性成分的比较研究

目的:分析比较同一产地华细辛、毛细辛和铜钱细辛的挥发性成分。方法:采用固相微萃取-气相色谱质谱联用技术提取三种细辛的挥发性成分并比较其组分与含量。结果:从华细辛、毛细辛和铜钱细辛中分别鉴定出59、99和85种挥发性成分,鉴定的总峰面积为82.75%～99.07%。三种细辛中检测到16种共有成分,且这些成分的含量不同。此外,三种细辛均含有独特的挥发性成分。结论:三种细辛挥发性成分在数量和含量上各有差异,为毛细辛和铜钱细辛能否替代华细辛入药提供参考依据。

翅茎香青中黄酮物质的提取及其抗氧化活性研究

目的:以翅茎香青的茎、叶和花为研究对象,测定其总黄酮含量及其黄酮粗提物对羟自由基(OH·)和超氧自由基(O_(2^-)·)的清除能力。方法:用索氏提取法以乙醇(95%)为溶剂提取翅茎香青各部位的黄酮物质,采用紫外分光光度法对各部位总黄酮含量以及黄酮粗提物对OH·及O_(2^-)·的清除率进行测定。结果:实验结果表明:翅茎香青花的总黄酮含量较高,对OH·的清除作用也较好,其叶的黄酮粗提物对O_(2^-)·的抑制作用较好。结论:翅茎香青茎、叶和花的黄酮粗提物时OH·和O_(2^-)·均具有一定的清除活性,这将为我们日后的研究工作起到铺垫及导向作用。

镉胁迫对丹参生长及有效成分积累的影响研究

采用盆栽试验方法,研究了镉(Cd2+)对丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的生长及其有效成分积累的影响。结果表明,镉胁迫下丹参的生长受到了显著抑制,体内Cd2+残留量、可溶性蛋白含量和膜脂过氧化程度显著增加,叶绿素含量降低。与对照相比,镉胁迫下丹参叶片水溶性酚酸类化合物咖啡酸和迷迭香酸的含量显著降低(p<0.05),原儿茶酸含量增加,丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量也降低,但变化均不显著(p>0.05)。而根系中这6种酚酸类化合物含量均降低,其中迷迭香酸的含量变化极显著(p<0.01)。镉胁迫下丹参根系脂溶性丹参酮类化合物二氢丹参酮、丹参酮Ⅰ和隐丹参酮含量均显著降低,而丹参酮ⅡA含量变化不显著。丹参叶片中水溶性酚酸类化合物合成关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)和酪氨酸氨基转移酶(TAT)的活性显著降低,而肉桂酸4-羟化酶(C4H)和4-香豆酸CoA连接酶(4CL)的活性显著升高。这些结果均说明镉胁迫可以降低丹参的产量和质量。

RP-HPLC-DAD同时测定丹参及丹参片中6种水溶性成分的含量

目的：建立用反相高效液相色谱-二极管阵列检测器（RP-HPLC-DAD）同时测定丹参及丹参片中丹酚酸B、丹酚酸A、原儿茶酸乙酯、原儿茶醛、咖啡酸和阿魏酸6种水溶性成分的方法.方法：采用Phenoemenex luna ODSC18柱（250 mm＆#215;4.6 mm,5μm）;流动相：甲酸-水-乙腈（0.5∶80∶ 19.5）等度洗脱;流速1.0 mL/min;柱温35℃;DAD检测器190～400 nm扫描.结果：6种活性成分的线性关系良好（r＞0.9690）,精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3％,平均加样回收率为97.39％ ～ 101.29％.结论：所建立的方法简便、准确,具有良好的重现性和稳定性,能够为丹参及丹参片的质量控制提供一定的依据.

溶杆菌SNNU513基因gfp标记及在玉米根部定殖

溶杆菌属细菌在植物病害生物防治中有着广阔的应用潜力。本文以本实验室从中药材远志分离筛选的溶杆菌属新菌株Lysobacter sp.SNNU513为材料,筛选出高效制备该菌株感受态细胞Inoue法,电击转化条件为场强20 kV/cm、电脉冲时间5 ms时可将含绿色荧光蛋白基因gfp的质粒pGLO导入该菌株感受态细胞中,重组菌SNNU513-pGLO能高效、稳定表达绿色荧光蛋白基因,与出发菌株的生长特性、抑菌活性等生物学特性差异不显著。将成功构建的重组菌SNNU513-pGLO用于检测该菌株在玉米根部的定殖规律,结果表明,定殖量从表皮到韧皮部有明显减少趋势。

秦巴山区华细辛遗传多样性与挥发油成分分析

目的:分析秦巴山区7个不同产地华细辛的挥发性成分与遗传多样性差异。方法:ISSR法分析不同产地华细辛的遗传多样性;顶空固相微萃取-气相色谱-质谱技术分析不同产地华细辛挥发性成分的相对含量,水蒸气蒸馏-气相色谱法定量分析3种主要成分含量。结果:筛选出的6条ISSR引物共扩增出57条带,其中89.47%呈多态性,聚类分析将7个产地华细辛分为两个大类群。6个不同产地野生华细辛挥发性成分组成及含量各有差异,除含有一些相同组分外,不同产地的华细辛其根茎叶特定器官均含有一些独特成分。此外,一些成分只能在遗传距离较近的华细辛特定器官中检测到。结论:秦巴山区华细辛遗传多样性与地理距离和气候关系不密切,一些挥发油成分的积累与其遗传特性可能密切相关。

基于SSR标记的黄精品种(系)DNA指纹图谱库构建

为了开展药用黄精种质资源的分子标记育种工作,实现对黄精品种及优良种质的快速精准鉴定。本研究采用12对引物对32个野生黄精种质材料进行SSR多态位点分析,之后计算相似系数并进行聚类分析,然后构建DNA指纹图谱及其QR编码。结果表明:12对引物共扩增出127条条带,其中多样性条带125条,多态率为98.43%,每对核心引物检测到的多样性条带数为3~17条,平均每对为10.42条,PIC(多样性信息含量)平均为0.46。其中等位基因数为1.984 3,有效等位基因数为1.527 8,Nei's基因多样性为0.314 9,Shannon's指数为0.478 8。SSR聚类结果很好的反映供试黄精材料的亲缘关系,所构建的DNA指纹图谱能对所有的种质材料进行高效区分。QR编码高效、方便的录入大量信息,有利于黄精品种及优良种质的鉴定工作。该体系的建立为黄精种质资源遗传多样性分析及品种保护、优良品种选育、优良种质鉴定提供依据。

黄精实时荧光定量PCR内参基因的筛选

本研究采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-t Time PCR,q RT-PCR)筛选适用于黄精(Polygonatum sibiricum)的内参基因。利用黄精转录组数据库,筛选8个候选内参基因,18S核糖体r RNA基因(18S-r RNA,18S)、肌动蛋白基因(Actin,ACT)、细胞色素基因(cytochrome,CYP)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、α-微管蛋白基因(α-Tubulin,TUA)、β-微管蛋白基因(β-Tubulin,TUB)、多聚泛素酶基因(ubiquitin 5,UBQ 5)和(ubiquitin 10,UBQ 10)。应用q RT-PCR技术检测这8个候选内参基因在黄精不同组织器官中(根,根茎,茎,叶,花和种子)的表达情况。利用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种统计学软件综合评价8个内参基因的表达稳定性。研究结果表明,TUB在黄精不同组织部位中表达稳定性最好,运用q RT-PCR技术研究黄精器官基因表达时,可选用TUB作为内参基因。确定黄精q RT-PCR分析的合适内参基因,为后续相关基因表达研究奠定基础。

干旱胁迫下丹参数字基因表达谱分析

丹参是中国传统大宗药材,具有重要的药用价值,但其品质受干旱胁迫影响较大,而对丹参响应干旱胁迫的应答机制尚不明确。本研究基于数字基因表达谱技术,对干旱胁迫处理后的丹参植株cDNA文库进行了差异基因表达谱分析。分析结果表明,共有5 740条基因受干旱胁迫诱导差异表达,其中1 143条表达上调,4 597条表达下调。Gene Ontology （GO）功能显著性富集分析表明,干旱胁迫应答基因的生物学功能主要集中在催化活性和结合活性中。Pathway显著性富集分析结果表明,上调基因显著富集在黄酮生物合成途径、核糖体途径、苯基丙酸类生物合成途径、半胱氨酸蛋氨酸代谢途径和植物激素生物合成等途径,下调基因则主要富集在鞘糖脂的合成途径、糖胺聚糖降解途径、卟啉代谢和叶绿素代谢途径上。随机抽取9个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,其结果与EDG检测结果一致。本研究的分析结果有助于进一步了解丹参响应干旱胁迫的分子机制,为干旱应答功能基因的筛选奠定基础。