基于BrO_(3)^(-)-Ce^(4+)-H^(+)-丙二酸-酒石酸振荡体系的红花电化学指纹图谱研究

建立电化学指纹图谱技术用于32批不同产地红花的质量评价和产地区分。将红花加入BrO_(3)^(-)-Ce^(4+)-H^(+)-丙二酸-酒石酸封闭B-Z(Belousov-Zhabotinski)振荡体系作为反应底物,对反应条件进行考察并记录数据。该反应的最佳条件是:温度37℃,浸出时间15 min,粉末加入量1.0 g,硫酸溶液浓度2.0 mol·L^(-1),溴酸钾溶液浓度0.8 mol·L^(-1),硫酸高铈溶液浓度0.01 mol·L^(-1),丙二酸溶液浓度0.1 mol·L^(-1),酒石酸溶液浓度0.011 mol·L^(-1)。电化学指纹图谱灵敏直观,可用于不同产地红花的快速区分和质量评价。

酸枣种质资源表型性状的综合评价

目的:比较不同种质酸枣品质的差异,分析种质资源与酸枣品质的相关性,为酸枣种质资源综合评价提供依据。方法:以不同种质酸枣为材料,测定酸枣的生物性状、总糖、总酸和维生素C(Vc)的含量及氨基酸组成,并采用HPLC测定齐墩果酸和熊果酸的含量。结果:不同种质酸枣中变异系数最大的为糖酸比,为83.2%;最小的是果实横径,为22.6%。单核重、果实纵径、Vc、总糖、氨基酸总量、齐墩果酸、熊果酸含量等的变异系数在24%~40%之间。所有酸枣样品均检测出17种氨基酸。苯丙氨酸与单果重、糖酸比呈显著负相关或极显著负相关,与总酸和Vc呈极显著正相关;果实横径与齐墩果酸呈显著负相关;熊果酸与苏氨酸和亮氨酸呈显著正相关。结论:本研究可为预选优质酸枣种质资源提供参考。

不同氮磷钾配比对乌头生长及黑顺片品质的影响

附子是我国传统大宗药材之一。近年来,施用氮磷钾复合肥已成为提高种植附子产量的常规手段。但不同施肥模式下产出的附子及加工产品黑顺片的质量是否符合新版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)的规定尚不清楚,因此筛选科学的氮磷钾配施方案对附子产业的质量提升具有重要意义。笔者在陕西省城固县开展大田试验,通过对13种不同施肥处理下附子产量、加工产品黑顺片的主要有效成分的含量以及经济效益等进行综合分析,筛选科学的氮磷钾配施方案。结果表明,不同比例氮磷钾复合肥可以对附子产量及质量、黑顺片质量等影响不同,处理13(施用量N 450 kg/hm~2、P_(2)O_(5)84.375 kg/hm~2、K_(2)O 56.25 kg/hm~2)的附子双酯型生物碱和总生物碱含量较高,但是加工产品黑顺片的灰分、酸不溶性灰分及浸出物的含量均不符合新《中国药典》要求,处理5(施用量N 450 kg/hm~2、P_(2)O_(5)168.750 kg/hm~2、K_(2)O 112.50 kg/hm~2)的附子产量和生物碱含量有所增加,但是经济效益一般,相比之下,处理6(施用量为N 450 kg/hm~2、P_(2)O_(5)253.130 kg/hm~2、K_(2)O 112.50 kg/hm~2)的经济效益高,加工的黑顺片符合新《中国药典》要求,同时不危害当地生态环境,最值得推广,且根据主成分分析得出附子的产量、附子的生物碱和黑顺片灰分是决定附子综合品质的关键因素。

秦岭华中五味子种实性状变异与环境因子的关联研究

为解决华中五味子人工栽培模式下就地取材、无性扩繁出现品质下降、产量降低等问题,以华中五味子的种子和果实为研究对象,对其种子大小、果串长度、果串直径、果串质量等表观性状,和果实化学成分如果实多糖含量、五味子酯甲含量等进行测定,与环境因子进行相关性分析,研究华中五味子种源地种实特异性及表型变异规律。结果显示:(1)华中五味子种子和果实的表观性状均表现出较大变异性,种子大小、果串长度、果实质量等指标变异最大;而种子长宽比、果实果柄质量比变异较小。(2)华中五味子果实多糖含量以及木脂素含量均有较大变异,商洛地区果实样品中木脂素含量最高。(3)华中五味子种子和果实所测指标和环境因子之间有较高相关性,主要表现在种子活力值以及果串直径与海拔之间呈正相关关系。研究发现,华中五味子的果实和种子在秦岭南北两侧表型变异丰富,华中五味子存在明显的地理遗传分化,体现在与海拔、年均温和年均降水量显著相关,商洛市所产华中五味子果实有较高品质,以此推断商洛市的气候地理环境适宜华中五味子生长。

白及种子直播繁育新方法

提出一种白及种子直播繁殖的新方法,该方法由种子活力测定、苗床整理、配制育苗基质、种子的处理、播种及壮苗步骤组成。结果表明：选择树皮粉、腐殖质、营养土、鸡粪和草炭土按体积比为15∶20∶8∶1∶5配成的育苗基质,控制空气温度20~35℃、湿度为60%~80%,在种子萌发不同阶段定期喷洒不同的营养液,种子萌发率可由自然条件下5%提升至69.7%±3.13%;播种180d假鳞茎直径可达1~1.5cm。本方法简单易行,出苗速度快,且克服了因种子细小、没有胚乳、在自然条件下极难萌发的困境,适合秦巴山区及以南的区域大规模种植白及。

翅茎香青中黄酮物质的提取及其抗氧化活性研究

目的:以翅茎香青的茎、叶和花为研究对象,测定其总黄酮含量及其黄酮粗提物对羟自由基(OH·)和超氧自由基(O_(2^-)·)的清除能力。方法:用索氏提取法以乙醇(95%)为溶剂提取翅茎香青各部位的黄酮物质,采用紫外分光光度法对各部位总黄酮含量以及黄酮粗提物对OH·及O_(2^-)·的清除率进行测定。结果:实验结果表明:翅茎香青花的总黄酮含量较高,对OH·的清除作用也较好,其叶的黄酮粗提物对O_(2^-)·的抑制作用较好。结论:翅茎香青茎、叶和花的黄酮粗提物时OH·和O_(2^-)·均具有一定的清除活性,这将为我们日后的研究工作起到铺垫及导向作用。

七叶鬼灯檠挥发油及不同提取物抑菌活性的研究

研究了七叶鬼灯檠根状茎的挥发油及不同提取物的体外抑菌活性,为七叶鬼灯檠资源开发利用提供科学依据。采用滤纸片法和牛津杯法对七叶鬼灯檠根状茎挥发油及其甲醇、丙酮和乙酸乙酯提取物体外抑菌能力进行评价。结果表明,七叶鬼灯檠根状茎挥发油表现出较强的抑菌活性,对肺炎克雷伯氏菌抑制作用最强,其次为巨大芽孢杆菌和粘红酵母,抑菌圈直径分别为(29.11±0.31)、(26.77±0.35)、(26.20±0.62)mm。在不同溶剂提取物中,丙酮提取物和甲醇提取物均有明显的抑菌效果,解脂假丝酵母对提取物最敏感。七叶鬼灯檠的挥发油及提取物含有天然抑菌活性物质,具有光谱的抑菌效果,值得进一步开发利用。

红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1成骨样细胞增殖、分化和矿化的影响。方法大鼠灌胃红车轴草总异黄酮一定时间后,制备含药血清,并分别采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定法、ELISA法和茜素红染色测定矿化结节的方法考察不同浓度红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖率、碱性磷酸酶活性、骨钙素生成以及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的红车轴草总异黄酮含药血清都能显著促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖并显著提高MC3T3-E1成骨样细胞碱性磷酸酶的活性,且最佳的含药血清浓度为5%;5%的红车轴草总异黄酮含药血清处理MC3T3-E1成骨样细胞6 d和9 d可显著促进骨钙素的分泌;5%的红车轴草总异黄酮含药血清处理MC3T3-E1成骨样细胞6 d、12 d和18 d,形成的矿化结节均显著高于对照组。结论红车轴草总异黄酮含药血清可以显著促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌和矿化,说明红车轴草总异黄酮含药血清确实可以促进MC3T3-E1成骨样细胞的分化成熟,该药物具有开发为抗骨质疏松症新药的潜力。

白及碱提多糖的提取分离及纯化研究

目的:探讨白及碱提多糖的分离纯化方法,研究其理化性质。方法:利用纤维素阴离子琼脂糖凝胶柱层析(DEAE-Sepharose Fast Flow)对白及多糖进行提取、分离和纯化,分别进行总糖量、糖醛酸含量和蛋白质含量测定,通过红外光谱、HPLC、GC-MS技术分析其成分、结构及理化性质。结果:从白及提纯得到5种分子量不同的白及多糖(BSPS)-Ⅰ~Ⅴ,分子量分别约为355.8、174.3、52.8、174.0、59.9 kDa;单糖组成摩尔比分别为BSPS-Ⅰ、Ⅲ:葡萄糖;BSPS-Ⅱ:甘露糖∶葡萄糖=1.05∶4.22;BSPS-Ⅳ:岩藻糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.59∶0.70∶0.38∶1.22∶1.93;BSPS-Ⅴ:鼠李糖∶岩藻糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.16∶1.93∶0.28∶0.21∶1.17∶1.50。结论:白及碱提多糖的单糖组成更加丰富。

金银花根际土壤真菌群落多样性及其土壤影响因子研究

以6 a生金银花根际土壤(Y6)和非根际土壤(CK)为研究对象,利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法分析了金银花根际土壤真菌多样性及其主要土壤影响因子。结果表明:(1)在自然生长状态下,金银花根际土壤的NH3-N、A-P、S含量达到非根际土壤的两倍左右,差异显著,非根际土壤(CK)中微量元素Fe^(3+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)含量较6 a生金银花根际土壤(Y6)高;(2)微生物菌群结构发生了变化,总体表现为根际土壤真菌物种丰富度和物种多样性均高于非根际土壤;(3)土壤中NH3-N、A-P、S、Fe^(3+)、Zn^(2+)含量与土壤真菌物种丰富度有相关性,其中Solicoccozyma、Tausonia、木霉属Trichoderma、尖孢镰刀菌属Fusarium、曲霉属Aspergillus、腐质霉属Humicola与A-P、NH3-N、S呈负相关,与Fe^(3+)、Zn^(2+)呈正相关;被孢霉属Mortierella、Subulicystidium、绿僵菌属Metarhizium则相反,与A-P、NH3-N、S呈正相关,与Fe^(3+)、Zn^(2+)呈负相关。

分析化学滴定分析方法理论整合研究之统一滴定曲线方程

为了统一四大滴定曲线的方程从而进一步整合滴定理论,按照滴定反应涉及化学平衡的数目,把滴定反应分成2类,以1∶1滴定体系为例,将滴定分析的监测标度统一为p值(即pH、pM、pR_(e)-或pX),推导了相应的滴定曲线方程通式,并将通式应用于8个具体滴定分析体系,应用结果显示:通式既能较好体现原有理论的本质,又能方便地拓展至更多滴定体系,充分说明了该整合思路的合理性和科学性。

不同生长季节丹参营养器官中有效成分的动态变化

分析了三年生丹参不同季节营养器官中几种有效成分的变化规律。结果表明：（1）丹参地上部分丹参素、原儿茶醛和咖啡酸的含量在整个生长季节中显著高于根的;丹酚酸B和迷迭香酸的含量除8月份达到最高和最低外,其他月份差异不显著;（2）6-8月地上部分的5种水溶性酚酸类成分的含量均显著变化,而根中除咖啡酸在6月积累较低外,其它酚酸在整个生长季节的积累量变化不明显;（3）在整个生长季节,根系丹参酮ⅡA和隐丹参酮含量变化不显著,而二氢丹参酮和丹参酮Ⅰ的含量呈现上升趋势。总体来说,三年生丹参秋季采挖为宜,其地上部分水溶性成分含量较大,值得进一步开发。

不同产地山茱萸氨基酸含量分析及其营养价值评价

目的分析全国29个产地山茱萸的氨基酸成分,评价其营养价值。方法采用氨基酸自动分析仪测定山茱萸样品中氨基酸的含量,通过氨基酸比值系数法对其营养价值进行评价,并对所得数据进行相关性分析、主成分分析和聚类分析。结果不同地区山茱萸样品的氨基酸总量存在差异,在15.12~26.47 mg/g之间;山茱萸中的氨基酸种类丰富,29份样品中均检测到17种氨基酸,其中包含7种必需氨基酸,占总氨基酸含量的35.75%,接近联合国粮食及农业组织和世界卫生组织模式标准;含量最高的3种氨基酸依次为天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸,均为药效氨基酸;药效氨基酸占总氨基酸含量的60.06%~68.46%;山茱萸中氨基酸组成比例合理,限制氨基酸为甲硫氨酸和半胱氨酸,氨基酸比值系数分值介于61.859~81.443之间;不同产地的山茱萸氨基酸组成相关性显著,主成分分析提取出3个主成分,累计方差贡献率为87.884%,系统聚类分析法将其归为4类,其中以陕西秦岭和河南伏牛山地区品质为佳。结论山茱萸作为一种药食同源物质,氨基酸种类及含量丰富,综合开发利用的市场潜力巨大,本研究可为不同产地山茱萸的品质评价和资源开发提供参考。

胃饥饿素对小鼠肾缺血再灌注损伤模型的保护作用

目的观察胃饥饿素(ghrelin)对小鼠肾缺血再灌注损伤模型的炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,以及对生长激素促分泌素受体(GHS-R)表达水平的影响,探讨胃饥饿素对肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法将50只成年C57小鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),胃饥饿素低、中、高剂量组(C1组,C2组,C3组),各10只。采用夹闭双侧肾静脉40 min再灌注24 h的方法构建肾缺血再灌注损伤模型。C1组、C2组、C3组缺血再灌注损伤时腹腔注射不同质量浓度胃饥饿素(10,20,40μg/kg)。术后24 h取血,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠血清IL-1β,IL-6,TNF-α的表达水平,肾组织过碘酸希夫反应(PAS)染色观察病理性改变,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测GHS-R转录及蛋白水平变化。结果 C1组、C2组、C3组中,随着预处理胃饥饿素质量浓度的升高,由肾缺血再灌注损伤引起的小鼠血清IL-1β,IL-6,TNF-α升高显著降低,肾组织的病理改变减轻,肾细胞的凋亡减少,在基因和蛋白水平肾组织GHS-R的表达显著增加。结论胃饥饿素对小鼠肾缺血再灌注损伤模型具有保护作用,可能与抑制肾缺血再灌注损伤后导致的炎症发展、减少细胞凋亡及GHS-R蛋白的高表达刺激生长激素的释放有关。

乌头内生细菌组成分析

目的:揭示乌头内生细菌的菌群组成及其与生物碱含量的相关性。方法:运用高通量测序分析不同产地乌头叶、茎和根组织内生细菌的16S rDNA V4区,基于测序结果进行内生细菌的多样性分析、物种分类、差异及相似性分析。运用高效液相色谱法分析不同产地乌头叶、茎和根组织乌头类生物碱含量,并对乌头各组织的内生细菌相对丰度和生物碱含量之间进行相关性分析。结果:乌头内生细菌主要由4门,9纲,16目,36属组成;不同产地乌头的内生细菌丰度和多样性均存在差异,但核心菌群组成相似,以变形菌门(Proteobacteria)占主导;共发现6种操作分类单元(operational taxonomic units,OTU)与乌头根组织生物碱含量之间存在相关性。结论:不同产地乌头内生细菌组成存在差异但核心菌群相似,部分内生细菌丰度与生物碱含量之间显著相关。

基于HPLC法考察不同盐配比对附子片型及6种生物碱含量的影响

目的探究用胆巴炮制附子对附子中6种生物碱含量及饮片外观的影响。方法以炮制过程中附片中的6种生物碱及所得饮片片型为指标,考察胆巴中3种主要成分对附子饮片的影响。将附子分别浸泡入胆巴及不同配比的盐溶液中20 d,后续操作与传统产地加工相同,所得饮片粉碎后过3号筛,采用HPLC法进行测定。采用Phenomenex RP-C 18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱。流动相:1 mL·L^-1二乙胺水溶液-乙腈,梯度洗脱条件:0~8 min;28%B;8~12 min;28%B^33%B;12~45 min,33%B^50%B;45~55 min,50%B。柱温:25℃;体积流量:1.0 mL·min^-1;检测波长:230 nm;进样量:10μL。结果使用不同各种配比的盐对附子进行炮制后所得饮片质量与胆巴炮制后所得饮片相似,其中经200 g·L^-1氯化镁与100 g·L^-1氯化钠炮制所得饮片其单酯型生物碱含量最高。经200 g·L^-1氯化钠与100 g·L^-1氯化钙炮制所得饮片双酯型生物碱含量最低。经300 g·L^-1氯化钠浸泡得到的附子饮片其总生物碱含量最高。结论各种盐配比浸泡附子后,其质量与胆巴浸泡后相似,且能避免胆巴中的重金属在附子中残留,综合确定以300 g·L^-1氯化钠浸泡后得到的附子饮片最佳,同时不建议以200 g·L^-1氯化钠与100 g·L^-1氯化钙的组合盐对其进行浸泡。

根际土壤理化因子与真菌群落对白及产量和质量的影响

研究了不同产地白及产量、多糖含量、根际土壤理化因子及真菌,以期找出根际土壤理化因子及真菌与白及产量和质量的相关性,为开发高产量、高质产量的白及田间管理技术方案的研发提供指导。应用IlluminaMiSeq高通量测序技术、酶标仪等方法分析白及产量、多糖含量、土壤理化因子和土壤真菌群落的变化规律。结果表明:产量与木拉克酵母属(Cystofilobasidium)、梭孢壳属(Thielavia)、青霉菌属(Penicillium)、镰刀菌属(Fusari⁃um)丰度、Zn^(2+)含量正相关,与茎点霉属(Phoma)丰度、Na^(+)、Al^(3+)、Ca^(2+)含量负相关;多糖与木拉克酵母属(Cystofilobasidium)、梭孢壳属(Thielavia)、Zn^(2+)、Al^(3+)、Ca^(2+)含量正相关,与茎点霉属(Phoma)、青霉菌属(Penicillium)、镰刀菌属(Fusarium)丰度、Na^(+)负相关。结论白及田间管理中,提高Zn^(2+)、Ca^(2+)含量及木拉克酵母属(Cystofilobasidium)、青霉菌属(Penicillium)、梭孢壳属(Thielavia)的丰度降低Na^(+)、Al^(3+)的含量及茎点霉属(Phoma)、镰刀菌属(Fusarium)的丰度,可能能够提升白及产量及多糖含量。

华中五味子根际土壤真菌群落特征研究

为探究华中五味子年限对根际土壤真菌多样性的影响,用Illumina HiSeq高通量测序并结合相关生物信息分析方法,分析了未种植华中五味子(CK)与种植3年(Y3)、6年(Y6)后根际土壤化学性质和真菌群落变化规律以及其关系。结果显示,Y6土壤中铵态氮的含量增加了66.67%、速效磷的含量增加了586.00%、S的含量增加了49.62%;Y6土壤中微量元素Fe3+、Mn2+、Zn2+、Pb的含量分别下降了6.67%、3.93%、11.45%、0.28%;真菌群落物种丰度Y3最高,物种多样性Y3最低。与CK相比,Y6土壤中尖孢镰刀菌属Fusarium降低了52.01%、枝鼻菌属Cladorrhinum降低了72.31%、枝孢霉属Cladosporium降低了23.28%、腐质霉属Humicola降低了30.09%、被孢霉属Mortierella降低了70.61%。本研究表明,华中五味子种植6年后,根际土壤养分状况和土壤真菌群落发生了明显改变。

胃饥饿素对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后的保护作用及机制

目的探讨胃饥饿素(ghrelin)对HK-2细胞缺氧/复氧的保护作用及机制。方法以HK-2细胞为研究对象,建立缺氧/复氧模型,模拟肾缺血再灌注损伤过程。胃饥饿素预处理后,采用CCK-8试剂盒检测不同质量浓度胃饥饿素(0,12.5,25,50,100,200,400,800,1600 ng/m L)对缺氧/复氧及正常HK-2细胞活力的影响。将细胞分为正常对照组(N组),缺氧/复氧损伤组(H/R组),胃饥饿素(400 ng/m L)预处理组+缺氧/复氧损伤组(ghrelin+H/R组)。造模成功后,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(WB)检测各组细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、P38促分裂素原活化蛋白激酶(P38)及磷酸化P38促分裂素原活化蛋白激酶(p-P38)的表达。结果缺氧4 h,复氧12 h能有效诱导HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型;与胃饥饿素质量浓度为0 ng/m L时相比,质量浓度为12.5,25,50 ng/m L时对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞无影响;胃饥饿素质量浓度为100,200,400,800 ng/m L预处理能有效提高细胞活力(P<0.01),质量浓度为1600 ng/m L时HK-2细胞的活力开始降低;胃饥饿素质量浓度大于800 ng/m L对正常HK-2细胞活力有影响(P<0.05);与N组相比,H/R组细胞凋亡明显,ERK,p-ERK,P38及p-P38表达无差异;与H/R组相比,ghrelin+H/R组细胞凋亡水平下降,ERK,p-ERK,P38表达无差异,p-P38表达增高。结论胃饥饿素预处理能对HK-2细胞缺氧/复氧损伤起到保护作用,可能是通过激活P38信号通路发挥其功能。

高品质山茱萸规范化栽培技术

山茱萸是我国的常用大宗中药,其推广栽培具有重要的经济、社会、生态意义。然而,在长期的栽培过程中,山茱萸产量的提高进入瓶颈期,且由于各产区的环境、栽培技术、加工方法等存在明显差异,造成了山茱萸药材质量良莠不齐、管控管理没有统一明确标准等问题,质量因素已经制约了山茱萸产业的进一步发展。从生产基地选址、种质种子要求、栽培管理、病虫害防治与采收加工等方面进行了总结介绍,以期为山茱萸种植户提供技术参考,在保证高产的同时提升山茱萸质量,推动山茱萸产业向规范化、标准化发展。