试剂条双夹心酶联免疫吸附试验检测日本血吸虫感染者经尿液排泄的循环趋阴极抗原

目的：建立一种检测感染宿主尿内排泄抗原的简易免疫学试验。方法：用经改良的兼具ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和酶标板－ＥＬＩＳＡ优点的试剂条双夹心酶联免疫吸附试验，检测了家兔及人宿主尿样本中的日本血吸虫肠相关趋阴极循环抗原（ＣＣＡ）。结果：１０只高感染兔尿样经透析冻干保存达１０年，复原后检测均呈强阳性反应，滴度可达５１２－１，１２只经相同处理的正常兔尿，仅１只出现８－１以下的弱反应。５８例采自四川省的感染者和６０例正常对照者尿液的ＣＣＡ检测，敏感性和特异性分别为４３．１％和９６．７％。与板－ＥＬＩＳＡ比较，检出率相仿而呈现一定的互补效应，互补检出率为５８．６％。兔尿样内加入适量捕获单抗，反应强度即出现剂量依赖的竞争抑制，提示了尿内被检测到的靶微粒具有被抗ＣＣＡ单抗特异地识别的属性。对于采用同一检测系统不同方法的互补检测性也进行了讨论。结论：实验结果不仅显示了试剂条夹心ＥＬＩＳＡ适合现场应用的诸多优点，也证明用于特异地检测感染宿主尿内排泄抗原的可行性。

日本血吸虫病肠相关与卵相关抗原血症检测的诊断互补性初报

应用经羟基磷灰石纯化，偶联长链生物素ＢＡＣＨ（Ｂｉｏｔｉｎａｍｉｎｏｃａｐｒｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）的两株主要识别卵相关不同表位的单克隆抗体建立检测灵敏度达微微克水平的硷性磷酸酶抗原捕获酶联试验（ＢＡ－ＡＰＥＬＩＳＡ），对粗制日本血吸虫卵抗原ＳＥＡｊ－ＴＣＡ的检测极限，２Ｈ１０－ＥＬＩＳＡ可达１—０．３ｎｇ／ｍｌ，仅有效地检出日本血吸虫种特异的卵抗原表位分子；而２Ｈ１－ＥＬＩＳＡ则达３．２ｎｇ／ｍｌ，亦能灵敏地检示曼氏血吸虫的卵抗原组分。两组试验反复试用于日本血吸虫病例及正常人群血样检测，显示有非常明显的ＯＤ消光读数差异。同时采用已建立的１Ｂ１０－ＡＰＥＬＩＳＡ检测肠相关ＣＡＡ系列，以平行检测的健康对照组消光ＯＤ均值＋３ＳＤ为阳性界值，对３组采自不同流行区的慢性或混合型病例同批血样进行肠相关ＣＡＡ及卵相关２Ｈ１０和２Ｈ１的二联或三联叠加检测，其累计检出率都得到不同程度的提高，尤以低度流行区的慢性病例组更为明显。

两株识别血吸虫卵相关组分的单克隆抗体靶表位分析

免疫学鉴定两株主要识别卵相关抗原组分的单克隆抗体（２Ｈ１０，２Ｈ１）均属ＩｇＭ同型，能与日本及曼氏血吸虫可溶性卵抗原（ＳＥＡ）及其三氯醋酸可溶组分（ＳＥＡ－ＴＣＡ）形成趋弱阳极或趋中性沉淀带；与虫卵温育均可形成典型环卵沉淀物；两者ＩＦＡ反应谱有明显差异，但均能与肝、肠中的虫卵外围构成明显荧染；经纯化并标记长链生物素后均可建立灵敏度达毫微克水平的同相夹心酶联试验检出相应抗原组分，但２Ｈ１０仅能检出日本血吸虫ＳＥＡ（ＳＥＡｊ），而２Ｈ１则以检出曼氏种ＳＥＡｍ占优。两株单抗的交替异相组合检测，均为阴性，表明两者识别的表位不同。分别经过碘酸钠及三氟醋酸处理ＳＥＡｊ后进行酶联活性测定，显示２Ｈ１０与２Ｈ１所识别的表位均属糖基依赖型，而前者有显著较强的耐氧化性能，进一步佐证了两株单抗识别表位的异源属性。根据理化特性试探了靶组分的液相层析分离，证明２Ｈ１０与２Ｈ１识别的活性基团不为ＣｏｎＡ所有效吸附，应用Ｍｏｎｏ－ＱＦＰＬＣ离子交换层析，活性表位相对集中被０．２—０．４ｍｏｌ／Ｌ离子强度的ＮａＣｌ洗脱峰内。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹试验分析提示了活性组分分子量的不均一性及糖基属性的不可转印特点。

血吸虫肠相关循环抗原组分CAA和CCA的纯化与特异检测

目的：探讨血吸虫肠相关循环抗原ＣＡＡ与ＣＣＡ诊断靶微粒特异性的差别，并试探获取其纯化制品用于定量检测的标准系列。方法：对两组分进行了亲和层析及阴离子交换剂高效液相纯化分离，并应用单抗检测系统进行同相和异相交互测试。结果：Ｍｏｎｏ－Ｑ－ＨＰＬＣ（高效液相层析）梯度洗脱分离ＡＷＡｊ－ＴＣＡ可溶组分，可获得一个带阳离子活性的非结合ＣＣＡ－１洗脱峰及３个大小不等的、带阳离子活性的ＣＣＡ－２、ＣＣＡ－３及ＣＣＡ－４非结合洗脱峰，以及一个带阴离子活性ＣＡＡ－１洗脱峰。ＣＡＡ活性峰在峰谱上与ＣＣＡ－３有部分重叠。与单抗亲和层析纯品的活性对比测定显示ＣＣＡ－１与ＣＣＡ－２为该组分的主要构成，但ＣＣＡ－２及ＣＡＡ－１在本实验条件下均有微量的相互杂染。同相和异相双位点ＥＬＩＳＡ的４种组合交互检测，展示ＣＣＡ只能在捕获与检测抗体同为抗ＣＣＡ单抗的一种组合中被检出，而另３种组合只能测出ＣＡＡ组分。结论：血吸虫肠相关ＣＣＡ组分为一兼含两性电荷的分子混合体；而ＣＡＡ分子上具有一个可被抗ＣＣＡ单抗识别的活性表位位点，从而可能影响纯化分离和特异检测。