目的 探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号后,对细胞转化的影响。方法 取新出生2~3 d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为...目的 探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号后,对细胞转化的影响。方法 取新出生2~3 d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为3组:对照组、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组、TGF-β_1+DAPT组。对照组为空白对照,TGF-β_1组加入5ng/ml TGF-β_1,TGF-β_1+DAPT组同时加入5 ng/ml TGF-β_1及5μmol/L DAPT。采用免疫细胞化学法对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化进行检测。同时通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测Notch1 m RNA和蛋白的表达变化。结果 α-SMA免疫细胞化学结果表明,对照组大部分细胞无染色,而TGF-β_1组则可见大部分细胞内有黄色和棕黄色颗粒及条纹,DAPT组和对照组无明显差异。对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+DAPT组Notch1 m RNA表达量分别为(0.278±0.022)、(0.783±0.018)和(0.313±0.029),对照组与TGF-β_1组、TGF-β_1组与TGF-β_1+DAPT组比较,差异有统计学意义(P0.05)。对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+DAPT组Notch1蛋白表达量分别为(0.312±0.019)、(0.701±0.026)和(0.345±0.022),组间比较结果同Notch1 m RNA。结论 Notch1可以促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而促进肺纤维化。展开更多
文摘目的 探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号后,对细胞转化的影响。方法 取新出生2~3 d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为3组:对照组、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组、TGF-β_1+DAPT组。对照组为空白对照,TGF-β_1组加入5ng/ml TGF-β_1,TGF-β_1+DAPT组同时加入5 ng/ml TGF-β_1及5μmol/L DAPT。采用免疫细胞化学法对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化进行检测。同时通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测Notch1 m RNA和蛋白的表达变化。结果 α-SMA免疫细胞化学结果表明,对照组大部分细胞无染色,而TGF-β_1组则可见大部分细胞内有黄色和棕黄色颗粒及条纹,DAPT组和对照组无明显差异。对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+DAPT组Notch1 m RNA表达量分别为(0.278±0.022)、(0.783±0.018)和(0.313±0.029),对照组与TGF-β_1组、TGF-β_1组与TGF-β_1+DAPT组比较,差异有统计学意义(P0.05)。对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+DAPT组Notch1蛋白表达量分别为(0.312±0.019)、(0.701±0.026)和(0.345±0.022),组间比较结果同Notch1 m RNA。结论 Notch1可以促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而促进肺纤维化。