藏猪促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)多态性及其表达与免疫性状的关联分析

本研究以约克夏猪为对照,旨在分析藏猪和约克夏猪的血液生理指标和免疫相关器官组织表达谱方面的差异,结合藏猪外周血淋巴细胞在LPS刺激下,促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达情况,探究IL-1β、IL-6及TNF-α对藏猪免疫性状的影响。试验选择180日龄的藏猪和约克夏猪各40头按品种分为两个试验组,采集新鲜血液用于检测血液生理指标;采集猪外周淋巴血用于培养外周血淋巴细胞。随机选取藏猪和约克夏猪各8头按品种分为两个试验组,前腔静脉采集新鲜血液、屠宰后采集黄豆样大小的肝脏、脾脏、下颌淋巴结组织Trizol法提取RNA。每个个体样品设置3个重复,借助RT-qPCR和一代测序技术检测IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达情况和基因多态性。设置4组浓度的LPS(0、1、10、100μg·mL^(-1)),每组设置3个重复去刺激外周血淋巴细胞,于0、24、36、48、72 h收集细胞,用RT-qPCR检测促炎因子mRNA的表达情况。结果表明:1)藏猪的WBC、RBC、HGB、HCT和PLT水平极显著高于约克夏猪(P<0.01),同时,平均MCV和PCT也在藏猪中显著高于约克夏猪(P<0.05)。2)RT-qPCR结果表明,在藏猪的血液、脾脏和肝脏组织中,IL-1β、IL-6和TNF-α基因的mRNA表达量也均显著高于约克夏猪(P<0.01);在藏猪的下颌淋巴结中,IL-1β和TNF-α基因的表达量显著高于约克夏猪(P<0.05),IL-6基因的mRNA表达量极显著高于约克夏猪(P<0.01)。3)SNP位点筛选结果发现,在IL-1β基因3′侧翼区存在5个突变位点,其中G^(690)T、C^(1383)G、C^(1480)T、A^(1497)G位点在藏猪和约克夏猪群体间存在极显著差异(P<0.01),C^(1454)T位点在藏猪和约克夏猪群体存在显著差异(P<0.05);IL-6基因3′侧翼区存在1个有义突变位点C^(265)T,两品种间呈显著差异(P<0.05),在5′侧翼区存在1个有义突变位点A-72G,两品种间呈极显著差异(P<0.01);TNF-α基因在5′侧翼区存在1个有义突变位点,但两品种间差异不显著(P>0.05)。4)不同浓度LPS刺激藏猪外周血淋巴细胞试验结果表明,10μg·mL^(-1)浓度的LPS对藏猪外周血淋巴细胞的增殖效应最为显著。在1、10μg·mL^(-1)浓度LPS刺激下,IL-1β基因作出较明显应答,在100μg·mL^(-1)浓度LPS刺激下,IL-6基因作出较强应答。综上所述,和约克夏猪相比,藏猪在血液生理指标、免疫组织器官中促炎因子表达以及基因多态性方面表现出更强的抗病能力。其中IL-6基因的A-72G位点可能与免疫性和抗病能力密切相关。在藏猪外周血淋巴细胞培养试验中,IL-1β和IL-6基因对LPS的显著应答突显了它们在免疫调控中的关键作用。

藏猪与大约克猪CES1基因多态性与差异表达分析

本研究旨在探究CES1基因在藏猪与大约克猪不同日龄中背部脂肪组织mRNA表达水平及CES1基因单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP),通过Sanger测序对藏猪与大约克猪CES1基因起始密码子上游2 kb区域筛选SNP及分析其基因型频率。通过荧光定量PCR试验(RT-qPCR)分别对30日龄、90日龄和180日龄的藏猪和大约克猪背部脂肪组织中CES1基因mRNA表达量进行检测。结果显示:在CES1基因起始密码子上游2kb区域发现了4个单核苷酸多态性位点,分别为:G-1156A、C-998A、C-844T和T-552C,且这些突变位点均符合哈迪-温伯格定律。RT-qPCR试验中发现CES1基因在不同猪种、不同日龄阶段的猪中均存在差异表达,值得注意的是,不管在30日龄、90日龄或180日龄中,藏猪背脂组织中CES1基因的mRNA表达水平均极显著高于大约克猪,推测CES1基因与脂质代谢呈负相关,从而促进了藏猪体内的脂肪沉积。本研究结果为下一步深入开展CES1基因功能研究奠定了基础。