日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3在原核细胞的高效融合表达和特性鉴定

目的 构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法 用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Westernblot分析。结果 获得pET2 8a -Sj14 - 3- 3重组表达载体 ,SDS -PAGE和Westernblot显示Sj14 - 3- 3基因在 pET2 8a中表达的融合蛋白约为 32 4kDa ,与天然 14 - 3- 3蛋白具有相同的免疫活性。 结论 日本血吸虫信号蛋白14 - 3- 3在原核细胞中得以高效表达 ,表达产物具有免疫活性 。

APC在结核杆菌低分子多肽抗原体外激活人外周血γ^(δ+)T细胞中的作用

目的探讨抗原递呈细胞APC在结核杆菌Mtb低分子多肽抗原体外激活人外周血γδ+T细胞中的作用。方法用平皿粘附和尼龙毛柱纯化法,从PBMC中分离单核细胞、B淋巴细胞然后分别与纯化的T细胞共育在Mtb抗原的刺激下,观察γδ+T细胞的增殖效应。结果Mtb低分子多肽抗原在激活γδ+T细胞时,需要单核细胞、B细胞等APC的存在但APC并不起摄取、加工、递呈抗原的作用。结论γδ+T细胞具有与γδ+T细胞不同的独特抗原识别方式。

恶性肿瘤患者手术前后血清IL-2/sIL-2R水平检测

目的：研究机体免疫功能的变化与恶性肿瘤发生及预后的关系。方法：采用ＭＴＴ比色法及双抗体夹心法对４２例胃癌、３５例乳腺癌、２８例大肠癌手术前后ＩＬ２及ｓＩＬ２Ｒ水平进行检测，并以健康献血员作对照。结果：３组恶性肿瘤患者术前ＩＬ２活性明显低于正常人；血清ｓＩＬ２Ｒ水平明显高于正常人。术后肿瘤复发患者ＩＬ２／ｓＩＬ２Ｒ水平持续异常；未复发患者ＩＬ２／ｓＩＬ２Ｒ水平恢复正常。

喉癌病人血清癌胚抗原研究

应用酶联免疫吸附实验测定79例喉癌患者血清中癌胚抗原含量,并以80例正常人作为对照。检测结果表明:两组间癌胚抗原含量平均值呈显著性差异(P<0.01),阳性率虽也有显著性差异(P<0.01);但因阳性率较低,所以初步提示癌胚抗原的检测仅可以作为喉癌辅助诊断的客观指标之一。同时另有实验表明癌胚抗原的动态检测可以用作喉癌术后有无复发和放疗及化疗效果评价的重要依据。

日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14—3—3编码基因重组质粒pET28a一Sj14—3—3的构建和鉴定

目的构建日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3编码基因原核表达质粒pET28a-Sj14-3-3,测定Sj14-3-3基因序列,并为中国大陆株Sj14-3-3的体外表达奠定基础。方法采用RT-PCR技术从日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA中扩增出Sj14-3-3基因,扩增产物经纯化后。用BamH I+Xho I双酶切,定向克隆入pET28a质粒,转化大肠杆菌DH5a,再用BamH I+Xho I双酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定,并应用在线软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 PCR扩增产物约为765bp,符合预计大小,并成功地定向克隆到原核表达质粒pET28a,对插入片段的测序结果表明,该序列和推测的氨基酸序列与GenBank收录的日本血吸虫14-3-3基因分别有99.5％和99.2％的同源性。序列分析显示,Sj14-3-3基因序列中可能有抗原表位存在。结论 pET28a-Sj14-3-3重组质粒构建成功,为日本血吸虫5j14-3-3分子疫苗及信号转导研究奠定基础。

CD28以外的T细胞协同刺激分子及其功能

CD2 8是协同 TCR诱导 T细胞产生高水平 IL - 2 ,促进 T细胞生存及防止 T细胞凋亡的主要协同刺激分子 ,但并非所有 T细胞均表达 CD2 8,提示 T细胞活化尚有其它协同刺激途径的存在。最近研究表明 ,其它一些协同刺激分子 ,如 4 - 1BB、OX4 0、ICOS、L FA- 1等在不同的 T细胞亚群和 T细胞活化的不同阶段 。