葡萄籽原花青素下调miR-27a表达抑制胰腺癌细胞生长

目的:探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)抑制胰腺癌细胞生长的作用及其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌As PC-1细胞,分别采用MTT,Annexin V-FITC/PI双染,Transwell迁移实验等方法检测GSPE对As PC-1细胞的增殖抑制、诱导凋亡及抑制细胞迁移的作用;mi RNA real-time RT-PCR和Western印迹检测GSPE对As PC-1细胞mi R-27a及其下游基因FOXO1表达的影响。转染mi R-27a抑制剂,检测GSPE通过下调mi R-27a调控As PC-1细胞生长、迁移的作用。结果:不同浓度(25,50,75,100μg/m L)GSPE对As PC-1细胞的增殖抑制率分别为8.36%,17.36%,50.42%和60.73%,GSPE≥50μg/m L时,增殖抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。对照组及25,50,75μg/m L GSPE组的细胞早期凋亡率依次分别为2.5%,20.0%,42.3%,64.3%。75μg/m L GSPE组的细胞迁移率低于对照组,细胞内mi R-27a的表达亦显著低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,mi R-27a抑制剂组、GSPE组、mi R-27a抑制剂+GSPE组的细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.01),细胞迁移能力均显著降低(P<0.01),FOXO1蛋白表达增加;且共同处理组上述作用最明显,高于两者单独处理组。结论:GSPE可能通过下调mi R-27a表达来抑制胰腺癌As PC-1细胞生长和迁移。

化疗抑制下骨髓BMP4对造血干/祖细胞周期、凋亡的调控及其机制

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的骨髓抑制或应激造血条件下骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein4,BMP4)对造血干/祖细胞(HSPC)的周期、凋亡调控的作用及其相关机制。方法:设计构建BMP4过表达的C57BL/6转基因小鼠(transgenec group),选取周龄、性别、体重相匹配的野生型(WT)雌鼠为对照组,各实验重复3次。5-FU以150mg/kg的剂量诱导骨髓抑制模型,提取骨髓有核细胞。通过c-kit/Sca-1荧光抗体双标HSPC,分别用AnnexinV/PI和Ki-67/DAPI双染法观察其凋亡和细胞周期的变化。RT-g-PCR检测周期相关的造血调控因子,探讨BMP4调控HSPC细胞周期的分子机制。结果:生理状态下,野生型组和转基因组HSPC细胞周期和凋亡率无明显差异。骨髓抑制后,BMP4过表达小鼠骨髓中HSPC的G0期比例明显降低(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.05)。BMP4过表达小鼠骨髓基质中维持HSPC静息的低氧诱导因子Hif-1α和趋化因子CXCL12水平明显下调(P<0.01)。结论:在造血应激或骨髓抑制等非生理条件下,BMP4蛋白上调能促进HSPC进入细胞周期,促进其凋亡,且可能通过直接或间接下调Hif-1α和CXCL12表达来发挥对HSPC的周期调控功能。