质粒重组体构建中连接、转化时间的探讨

目的：探讨质粒重组体构建中，重组体连接反应的时间对转化与基因克隆结果的影响。方法：以ＥＢＶＢＨＲＦ１基因与ｐＢＶ２２１载体的连接为研究对象，对连接反应在３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ４个时段连接液的转化效果进行分析研究。结果：连接３ｈ、２４ｈ的转化菌平皿中均无细菌生长；连接１２ｈ的转化菌每平皿中仅有少数菌落生长（１．７）；连接６ｈ的转化菌每平皿中有大量菌落生长（１９），经质粒抽提酶切鉴定，１０个菌落中有９个均为重组体菌落。结论：在质粒载体与目的基因粘性末端连接的重组体构建中。

EB病毒BHRF_1基因聚合酶链反应扩增及其鉴定

目的：ＢＨＲＦ１的研究对于认识ＥＢＶ有关肿瘤和其它疾病的发病机理、寻找预防、治疗途径有十分重要的意义。方法：以Ｂ９５８细胞ＤＮＡ为模板，设计一对引物，用ＰＣＲ方法扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个限制性内切酶位点进行酶切鉴定。结果：扩增产物长５９２ｂｐ，与预期结果一致，两个酶所切下的四个片段长度也与理想值相符。结论：本研究首次采用ＰＣＲ方法，成功地获得完整的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因，从而为该基因的进一步研究和应用奠定基础。