结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定

目的克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性。方法采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒。重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通过镍柱纯化。Western blot鉴定表达蛋白,并使用HtpG重组蛋白经ELISA法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。结果成功构建了pET22b-HtpG重组质粒;在大肠埃希菌中表达出分子质量约73kDa的重组蛋白。Western blot鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ELISA法检测肺结核患者血清中存在特异性抗HtpG抗体。结论在大肠埃希菌内成功表达HtpG重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。