芦丁激活腺苷酸活化蛋白激酶α蛋白表达减轻全氟辛酸染毒小鼠肝脏损伤

目的研究芦丁(rutin)对全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)染毒小鼠肝脏损伤的保护效应及机制。方法将24只雄性ICR小鼠随机分成3组,每组8只:对照组(双蒸水),PFOA组[PFOA 20 mg/(kg·d)],芦丁干预组[PFOA 20 mg/(kg·d)+rutin 20 mg/(kg·d)],正常饮食,经口灌胃,每日观察、称重、记录。14天后采血、处死后迅速剥离肝脏并称重。部分肝脏组织固定于4%多聚甲醛后苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色及糖原过碘酸希夫(periodic acid-schiff, PAS)染色;检测血清样品中谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase, GPT)活性,以及肝脏组织匀浆中甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、丙二醛(malondialhyde, MDA)等含量和相关酶的活性等;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinase, AMPKα)及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(phospho-AMP-activated protein kinaseα, p-AMPKα)的蛋白表达水平。结果 PFOA导致小鼠体重明显降低、肝脏重量与肝脏相对体重系数均显著性升高(P<0.05);肝细胞索解离,肝细胞肿胀、溶解,有明显损伤,PAS染色阳性细胞明显减少;PFOA组GPT活性为(204.63±11.26)U/L,与对照组(28.80±4.51)U/L相比显著升高(P<0.05);小鼠肝脏组织中TG、TC和MDA的含量分别为(4.89±0.51)mmol/g prot、(8.06±0.84)mmol/g prot和(315.38±60.79)nmol/mg prot,与对照组相比均明显增多(P<0.05);T-SOD活性为(4175.56±334.96)U/mg prot,与对照组比显著降低(P<0.05);芦丁干预后,与PFOA暴露组比较,小鼠体重没有显著性变化(P>0.05),但是肝重和肝脏相对体重系数显著降低(P<0.05),小鼠肝细胞肿胀情况好转,肝细胞索结构尚清,PAS染色阳性细胞明显增多,芦丁干预组GPT活性为(168.75±18.32)U/L,与PFOA组比显著下降(P<0.05);小鼠肝脏组织中TC和MDA含量分别为(4.25±0.77)mmol/g prot和(211.27±44.44)nmol/mg prot,与PFOA组比显著减少(P<0.05);T-SOD活性为(7368.88±673.09)U/mg prot,与PFOA组比显著升高(P<0.05)。三组肝脏组织中AMPKα蛋白表达无明显差异,与PFOA组相比,PFOA+rutin组的p-AMPKα蛋白表达显著上调。结论 PFOA暴露可导致小鼠肝脏损伤,引起脂质堆积。而芦丁对该损伤有一定的保护效应,这可能与芦丁激活AMPKα蛋白表达从而有效纠正TG水平以及增强抗氧化酶类的活性有关。

双酚A暴露诱导活性氧水平升高对肝脏脂质代谢的影响

目的探索双酚A(bisphenol A,BPA)对肝脏脂质代谢的影响。方法﹐采用BPA染毒大鼠体内实验,结合人肝细胞系HL-7702体外染毒实验研究双酚A对肝脏脂质代谢的影响。将28只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组及BPA亚急性染毒低[1 mg/(kgd)]、中[5 mg/(kg·d)]和高[25 mg/(kg·d)]剂量组,14d后从大鼠体重、肝脏脏器系数,肝脏病理组织切片、血清生化指标等方面评价BPA对肝脏的毒性效应。将人肝细胞系HL-7702,分为对照组及BPA低(0.16 μmol/L)、中(4 μmol/L)和高(100 μmol/L)浓度处理组,染毒24 h后检测细胞内甘油三酯和总胆固醇(totalcholesterol,TC)含量,活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,并通过荧光定量PCR检测脂代谢及氧化应激相关基因的转录水平。结果BPA 14 d亚急性染毒后,大鼠体重和肝脏脏器系数无明显变化,但肝脏病理切片发现BPA染毒可损伤肝脏的组织结构。血清生化指标中总胆汁酸在高剂量组显著降低,为(4.75±0.33)μmol/L;肌酐在中﹑高剂量组显著升高,分别为(18.00±0.76)和(18.83±0.75)μmol/L;TC,高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇在中,高剂量组均显著降低(P<0.05),分别为(1.44±0.10)、(1.14±0.10)mmol/L,(0.84±0.04)、(0.63±0.07)mmol/L和(0.21±0.04),(0.16±0.05)mmol/L。BPA染毒可使人肝细胞系HL-7702细胞内TC含量显著降低(P<0.05),ROS水平显著增加;PPARα及FABP1转录水平在高浓度处理组中显著升高;SOD1在中,高浓度处理组中均显著降低(P<0.05)。结论BPA可能通过诱导肝脏细胞内产生过量的ROS,导致肝脏损伤和体内脂质代谢紊乱,从而表现出肝脏毒性。

全氟辛酸对大鼠肝细胞BRL-3A脂质蓄积的影响

目的探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对大鼠肝细胞BRL-3A细胞活力及对转录因子核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和精氨酸琥珀酸合酶(arginosuccinate synthase 1,Ass1)表达的影响。方法培养大鼠肝细胞BRL-3A,分为对照组(0μmol/L PFOA)、低剂量组(6.25μmol/L PFOA)、中剂量组(25μmol/L PFOA)和高剂量组(100μmol/L PFOA)。分别于染毒48 h后,用噻唑蓝比色法检测细胞活力,自由基指示剂2′,7′-二氯氢化荧光素乙二酯检测活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测氧化应激相关酶活性;荧光免疫细胞化学、Western blot检测Nrf2、Ass1蛋白表达水平。结果与对照组比较,随着PFOA染毒浓度的增高,中、高剂量组的细胞活力有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞内的ROS含量升高,中、高剂量组增高显著(P<0.05),平均荧光强度分别为(5417.66±161.09)和(5725.50±166.83)。与对照组相比,低、中剂量组细胞内甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量无明显变化,高剂量组TG、TC和MDA含量显著升高(P<0.05),分别为(0.21±0.05)mmol/L、(14.5±6.07)mmol/L和(1.23±0.33)nmol/mL。荧光免疫细胞化学检测法、Western blot结果显示,Nrf2蛋白的表达水平在高剂量组显著增高(P<0.05),Ass1蛋白的表达水平在低剂量组显著增高(P<0.05)。结论 PFOA染毒可以导致BRL-3A细胞内ROS的积累,Nrf2和Ass1在PFOA导致的大鼠肝脏细胞氧化损伤刺激下通过增加表达发挥清除ROS和氨解毒作用。