CRISPR/Cas应用于核酸特异性检测及其在检测SARS-Cov-2病毒中的应用

CRISPR/Cas系统是细菌体内的获得性免疫系统,用来对抗侵略细菌的外源DNA、质粒、病毒和噬菌体等,以此维持内环境的稳定。现该系统被广泛应用于基因编辑领域,主要用以完成真核、原核细胞型生物基因组的切割、修复和编辑。随着Cas蛋白家族新成员衍生体被陆续发现,赋予CRISPR/Cas系统新的功能,例如其在分子诊断领域中的应用。本文就CRISPR/Cas系统在分子诊断领域内的研究进展进行综述,并详细分析其在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染检测中的应用价值,为进一步完善我国核酸检测体系,提升新型冠状病毒肺炎疫情防控能力提供参考和依据。

组蛋白乳酸化在疾病中作用的研究进展

在染色质表观遗传调控的背景下,细胞辅因子和代谢产物通过不同的表观遗传修饰参与基因表达调控。最新研究发现糖酵解代谢产生的乳酸可通过组蛋白乳酸化表观遗传修饰对转录进行调控。Warburg效应代谢特征是有氧条件下的糖贪婪和过量乳酸的产生。Warburg效应在疾病的发生发展中发挥重要作用。本文对乳酸介导的组蛋白乳酸化及组蛋白乳酸化在Warburg效应及相关疾病如肿瘤、免疫系统和呼吸系统疾病中的最新研究进展进行综述。

干扰素刺激基因15在原发性肝癌中的表达及与患者预后的关系

目的通过对肿瘤芯片数据库(Oncomine)和生存分析数据库(Kaplan-Meier Plotter)和蛋白-蛋白相互作用数据库(STRING)进行数据挖掘,探讨干扰素刺激基因15(ISG15)在原发性肝癌中的表达情况及其与患者预后的关系。方法分别对Oncomine数据库、Kaplan-Meier Plotter数据库和STRING数据库进行肝癌中ISG15基因表达的相关研究检索,探讨ISG15基因在肝癌组织和对应正常组织中的表达情况,绘制ISG15基因表达与肝癌患者总体生存时间的生存曲线。构建ISG15相互作用蛋白网络树状图,并对ISG15及其相关蛋白基因进行功能富集分析。结果通过检索Oncomine数据库发现,有5个研究结果显示肝癌组织中ISG15呈高表达(包括细胞系),有2项研究结果显示ISG15在肝癌组织中的表达水平显著高于正常肝组织(P<0.05)。通过对Kaplan-Meier Plotter数据库进行检索分析发现,在病毒性肝炎、饮酒的肝癌患者中,ISG15高表达患者的总体生存时间明显短于ISG15低表达患者(P<0.05)。通过STRING数据库搜索ISG15基因相关蛋白发现,ISG15基因相互作用蛋白有10种;生物过程富集分析结果显示,上述蛋白主要富集在病毒防御和病毒基因组复制的负调控通路。结论ISG15在肝癌组织中高表达,且可能与病毒性肝炎、酒精性肝癌患者的预后密切相关。

慢性乙型肝炎肝组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的表达与肝窦及窦间隙病理病变的相关性研究

目的探讨慢性乙型病毒性肝炎(CHB)肝组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的表达与肝窦病变的关系。方法随机选择2013年7月至2016年12月蚌埠医学院第一附属医院慢性乙型病毒性肝炎(CHB)60例肝脏组织标本,另选择10例正常人肝组织标本,全部肝组织标本皆采取苏木素-伊红(HE)及免疫组化CD4^+、CD8^+染色。光镜观察CD4^+、CD8^+免疫组化染色阳性结果与肝窦及窦周间隙病变的关系。结果肝窦及窦周间隙病变可表现为肝窦阻塞、狭窄、毛细血管化等。CD4^+、CD8^+阳性表达与肝窦及窦周间隙病变积分密切相关。肝窦病变积分0-1分,少数CHB患者CD4^+、CD8^+阳性;肝窦病变积分1-2分,多数肝组织CD4^+、CD8^+淋巴细胞表达阳性;肝窦病理病变积分2-3分,其肝组织CD4^+、CD8^+淋巴细胞表达阳性或强阳性。CD4^+、CD8^+细胞表达加强,肝内血管病变随之加重,CD4^+与CD8^+阳性表达率与肝窦病变的积分组间相关性比较均有统计学差异(P<0.01)。结论肝组织内CD4^+、CD8^+阳性表达与肝窦及窦周间隙病变积分呈正相关。

硬脂酸对血管平滑肌细胞L-型钙通道功能的影响

目的 高脂影响心血管健康,但机制不明。本研究旨在探讨高脂诱导的硬脂酸对血管平滑肌细胞(VSMCs)L-型钙通道(LTCCs)功能的影响。方法 将12只4周龄SD大鼠编号后采用抽签方法进行随机分组:对照组(6只)和高脂组(6只),分别予正常和高脂饲料喂养12周。采用游离脂肪酸试剂盒和股动脉插管分别检测大鼠血游离脂肪酸和血压;利用膜片钳技术检测大鼠肠系膜VSMCs钙电流。结果 与对照组比较,高脂饮食可增加大鼠血游离脂肪酸[(0.667±0.027)mmol/L vs.(0.468±0.012)mmol/L,t=6.841,P<0.001]、收缩压[(136.50±2.19)mmHg vs.(121.20±3.78)mmHg,t=3.507,P=0.006]及舒张压[(87.10±2.42)mmHg vs.(73.70±2.74)mmHg,t=3.660,P=0.004]。与对照组比较,高脂组大鼠肠系膜动脉VSMCs膜上的钙电流显著增加(膜电位在10 mV时pA/pF的比值,对照组为-16.86±2.58,高脂组为-23.80±2.15,t=4.449,P<0.001)。硬脂酸可显著增加VSMCs钙通道电流膜电位(10 mV的pA/pF,硬脂酸0μmol/L:-12.93±2.58,硬脂酸30μmol/L:-18.10±2.15,t=4.097,P=0.001),但不影响其失活和激活。结论 高脂饮食诱导产生的硬脂酸可影响肠系膜血管VSMCs膜上L-型钙通道功能。

肝癌细胞PI3K/Akt信号通路在干扰素2α上调ISG15表达中的作用

目的探讨肝癌细胞中干扰素2α(IFN-2α)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路上调ISG15表达的机制。方法向培养的肝癌细胞HepG2细胞系中加入IFN-2α和/或PI3K抑制剂(LY294002)。采用蛋白免疫印迹检测各组Akt、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)和干扰素刺激基因15(ISG15)的蛋白表达水平;采用免疫荧光分析p-Akt和ISG15表达情况。多组间比较采用单因素方差分析。结果 Western印迹分析表明,IFN-2α组中的ISG15表达水平较对照组明显增加,IFN-2α+LY294002组中的ISG15表达水平较IFN-2α组明显降低;免疫染色分析显示,IFN-2α组ISG15荧光强度显著高于对照组和IFN-2α+LY294002组。Western印迹分析显示,和对照组比较,IFN-2α组的p-Akt(Ser473)水平显著降低,而p-Akt(Thr308)水平明显增加;免疫荧光结果显示IFN-2α组中p-Akt(Thr308)的荧光强度显著高于对照组和IFN-2α+LY294002组。结论在HepG2细胞中,IFN-2α通过增加PI3K/Akt通路中的p-Akt(Thr308)上调ISG15的表达。