miRNA干扰乙酰肝素酶基因对胆囊癌细胞侵袭、迁移的影响

目的观察miRNA干扰沉默乙酰肝素酶（HPA）基因表达对人胆囊癌GBC—SD细胞侵袭和迁移的影响。方法根据人HPA基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA，同时合成1对阴性对照质粒表达载体。采用阳离子脂质体转染法将以上质粒转染人人胆囊癌GBC—SD细胞，采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染前后HPAmRNA表达的变化，选出对HPA沉默效果最佳的质粒，使用抗生素Blasticidin2ms／L加压筛选阳性克隆并扩增培养传代，获得稳定表达细胞株，供下一步实验。通过划痕损伤实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验检测干扰沉默HPA表达后对人胆囊癌GBC．SD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果质粒pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR-HPA-2沉默人胆囊癌GBC—SD细胞HPAmRNA表达的效果最好。pcDNA6．2-GW／EmGFP-miR-HPA-2组中穿过Transwell小室基质的胆囊癌GBC—SD细胞数明显低于阴性对照组（P〈0．05）和空白对照组。胆囊癌GBC—SD细胞的迁移距离在0、12、24hpcDNA6．2-GW／EmGFP—miR—HPA-2组明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论miRNA干扰沉默人胆囊癌GBC—SD细胞中HPAmRNA表达，从而抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭和迁移能力。