医学院校学生学业课程全过程考核的实践与思考

改革当前的课程考核模式,建立全过程考核模式,成为本科教育教学亟须解决的重大课题。学校制定全过程考核总体方案,课程制定具体方案。在方案的指导下,从学校、院系和课程层面开展全过程考核。以过程性和终结性相结合的全过程考核模式具有可操作性,可以在实践中推广,但需要在转变教育观念、加强制度建设和采取多种措施减轻工作量方面提供保障和支撑。

科学可视化作品在药理学教学中的应用

目的本研究为提高《药理学》在本科生中的教学效果,采用将科学可视化(scientific visualization, SV)作品应用于不同的教学环节的新型教学模式。通过分析学生阶段测试成绩及调查问卷结果,评价该模式的教学效果。方法选取蚌埠医学院临床医学专业2018级医学二系共8个班级的学生(250人)进行《药理学》教学,采用随机数法将8个班级随机分为2组,每组4个班级共125人。对照组采用传统模式教学,观察组采用科学可视化作品辅助课前预习、课堂教学互动及课后复习的教学模式。结果观察组阶段性测试成绩为(81.21±15.30)分,对照组成绩为(66.00±21.70)分;观察组学生及格率为91.20%(114/125),对照组学生及格率为60.80%(76/125)。经分析,采用新教学模式的学生阶段测试成绩及及格率均高于对照组学生(均P<0.01)。在收回的125份有效调查问卷中,观察组中73.6%(92/125)的学生认为该组课堂教学气氛活跃,92.0%(115/125)的学生认为该模式能够帮助自己梳理知识点,86.4%(108/125)的学生认为该教学模式能够提高学习兴趣。结论合理利用科学可视化作品能够整合教学资源,激发学生的学习热情,强化学生对知识点的理解与记忆,提高教学效果。

线粒体融合与裂变在右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制

目的探讨右美托咪定(DEX)对小鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及线粒体融合与裂变在其中的作用。方法将雄性ICR小鼠随机分为假手术(sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、缺血/再灌注+右美托咪定(I/R+DEX)组、缺血/再灌注+右美托咪定+dorsomorphin(I/R+DEX+dorsomorphin)组。采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,于缺血前30 min腹腔注射DEX50μg/kg,缺血1 h,再灌注24 h;采用Longa五分法对小鼠进行神经行为学评分;TTC染色法检测小鼠脑梗死体积,并计算脑梗死体积百分率;透射电镜法观察线粒体形态变化;免疫印迹法检测磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2、线粒体裂变相关蛋白的表达变化。结果 DEX预处理降低了I/R组小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率,在使用DEX的基础上加用dorsomorphin后,小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率升高(P<0.01);电镜结果显示,DEX减轻了缺血再灌注导致的线粒体损伤(P<0.01),线粒体形态有所恢复。免疫印迹检测结果显示,DEX预处理增加了磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达,降低了线粒体裂变相关蛋白表达,而加用dorsomorphin后,磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达明显降低,线粒体裂变相关蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论 DEX预处理可以减轻I/R损伤,其机制可能与激活AMPK从而促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。

右美托咪定通过调控Nrf2减轻HT22细胞缺氧/复氧引起的铁死亡

目的基于铁死亡探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对HT22细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及机制。方法采用HT22细胞制备H/R损伤模型。为了探究DEX对细胞H/R损伤的保护作用的最适浓度,HT22细胞分为5组:对照组(Control)、缺氧复氧组(H/R)、低浓度DEX组(H/R+DEX_(2.5),2.5μmol·L^(-1))、中浓度DEX组(H/R+DEX_(5),5μmol·L^(-1))、高浓度DEX组(H/R+DEX_(10),10μmol·L^(-1)),MTT法检测细胞的存活率。为了探讨DEX对HT22细胞H/R保护作用机制,将HT22细胞分为4组:Control组、H/R组、H/R+DEX_(5)组、H/R+DEX_(5)+ML385(Nrf2抑制剂)组。MTT法检测细胞的存活率;使用FerroOrange荧光探针检测细胞内Fe^(2+)水平的变化;C11 BODIPY 581/591检测细胞中Lipid ROS的变化;使用丙二醛和还原型谷胱甘肽试剂盒检测细胞中MDA及GSH含量。蛋白免疫印记法检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)和胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的表达。结果与Control组相比,H/R损伤后细胞的存活率、GSH含量、Nrf2、GPX4和SLC7A11蛋白表达明显降低(均P<0.05),Lipid ROS、MDA、Fe^(2+)含量和TFR1蛋白表达明显升高(均P<0.01);与H/R组相比,低、中、高浓度DEX均可使H/R损伤后细胞的存活率、GSH含量、Nrf2、GPX4和SLC7A11蛋白表达明显升高(均P<0.05),Lipid ROS、MDA、Fe^(2+)含量和TFR1蛋白表达明显降低(均P<0.05);在DEX的基础上使用ML385后,与H/R+DEX 5组相比,细胞存活率、GSH的含量、Nrf2、GPX4和SLC7A11蛋白表达明显降低(均P<0.05),Lipid ROS、MDA、Fe^(2+)含量和TFR1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。结论DEX可通过抑制铁死亡减轻HT22细胞H/R损伤,这种保护作用可能与其促进Nrf2的表达有关。

右美托咪定通过抑制铁死亡发挥对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:脑卒中是危害人类生命健康的重大疾病之一,其中缺血性脑卒中的发病率占脑卒中的70%以上。缺血性脑卒中引起的脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的发生机制极为复杂。右美托咪定作为临床上常用的麻醉辅助用药,其在对抗脑IR损伤中的作用近年来被广泛研究,但具体作用机制尚未阐明。因此,本研究基于铁死亡探讨右美托咪定对抗小鼠脑IR损伤的作用及机制。方法:采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。将雄性ICR小鼠随机分成:假手术(sham)组、IR组、IR+D1组(给予IR和25μg/kg的右美托咪定)、IR+D2组(给予IR和50μg/kg的右美托咪定)、IR+D3组(给予IR和100μg/kg的右美托咪定)、IR+D2+ML385组(给予IR、50μg/kg的右美托咪定和30 mg/kg的ML385)。采用Longa五分法进行小鼠神经行为学评分;2,3,5-三苯基四唑氮(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测小鼠脑梗死体积;蛋白质印迹法检测小鼠脑组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白质的表达水平。使用透射电镜观察线粒体形态。检测小鼠脑组织中MDA、GSH和Fe^(2+)的含量。结果:与sham组相比,IR组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积、MDA和Fe^(2+)含量明显增加,TFR1蛋白质表达水平明显升高,GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白质表达水平显著降低(均P<0.05),脑组织神经细胞中的线粒体皱缩,嵴减少,膜密度增加;使用右美托咪定预处理后,相较于IR组,小鼠神经学行为评分、MDA和Fe^(2+)含量、TFR1蛋白质表达水平显著降低,脑梗死体积明显缩小,GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白质表达水平显著升高(均P<0.05),线粒体受损情况显著改善;而在用右美托咪定预处理的基础上使用ML385后,与IR+D2组相比,小鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、MDA和Fe^(2+)含量明显增加,TFR1蛋白质表达水平明显升高,GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白质表达水平显著降低(均P<0.05),线粒体再次出现明显受损。结论:右美托咪定对脑IR损伤小鼠的保护作用与抑制铁死亡有关,其对铁死亡的抑制作用可能是通过调控Nrf2的表达实现的。

JAK2/STAT3信号通路在右美托咪定抗小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨JAK2/STAT3信号通路在右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)抗小鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法将ICR小鼠随机分为4组:假手术(sham)组、I/R组、I/R+DEX组、I/R+DEX+JAK2/STAT3抑制剂AG490(I/R+DEX+AG490)组。采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1 h,再灌注24 h;采用Longa五分法对小鼠进行神经行为学评分;TTC染色法检测小鼠脑梗死体积,并计算脑梗死体积百分比;TUNEL染色法检测小鼠大脑皮层组织细胞凋亡情况;免疫印迹法检测脑组织中p-STAT3、STAT3、Bax、Bcl-2蛋白的表达变化。结果与sham组相比,I/R组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、TUNEL染色阳性率、p-STAT3/STAT3及Bax/Bcl-2比值均增加;与I/R组相比,I/R+DEX组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、TUNEL染色阳性率、Bax/Bcl-2比值均明显降低,p-STAT3/STAT3明显增加;在使用DEX的基础上使用AG490抑制JAK2/STAT3信号通路后,与I/R+DEX组相比,小鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、TUNEL染色阳性率、Bax/Bcl-2比值显著增加,p-STAT3/STAT3降低。结论右美托咪定抗脑缺血/再灌注损伤的作用可能与JAK2/STAT3信号通路介导的细胞凋亡有关。

基于铁死亡探讨AMPK抗小鼠脑缺血/再灌注损伤的作用及机制

目的基于铁死亡探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)减轻小鼠脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的作用及机制。方法将ICR小鼠随机分为3组:假手术(Sham)组、脑I/R组和脑I/R+AMPK激活剂AICAR(I/R+AICAR)组。采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,Longa 5分法进行小鼠的神经行为学评分,TTC染色法检测小鼠的脑梗死体积,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒和Fe^(2+)试剂盒检测脑组织中MDA和Fe^(2+)水平,透射电子显微镜观察脑组织中线粒体形态变化,免疫印迹法检测小鼠脑组织中AMPK、p-AMPK及铁死亡相关蛋白TFR1、SLC7A11、GPX4的表达变化。结果相较于Sham组,I/R组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积、MDA及Fe^(2+)水平、TFR1蛋白表达显著增高,脑组织中线粒体损伤明显,p-AMPK/AMPK、SLC7A11和GPX4表达显著降低;相较于I/R组,I/R+AICAR组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积、MDA及Fe^(2+)水平、TFR1表达显著性降低,脑组织中线粒体损伤减轻,p-AMPK/AMPK、SLC7A11和GPX4表达显著增高。结论激活AMPK抗小鼠脑I/R损伤的作用可能与其抑制铁死亡有关。

Pannexin1,2在小鼠睾丸癌I-10细胞和睾丸间质细胞TM3中的表达及通道功能调控

目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控。方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100μmol/L的甘珀酸(CBX)、200μmol/L的丙磺舒(PBN)作用于I-10细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力;化学发光法检测细胞外ATP浓度;分别干扰(shRNA)和过表达(m Panx-1) Panx-1基因,调控Panx-1蛋白的表达及功能。结果:Western印迹结果显示,与TM3细胞相比,I-10细胞中Panx-1和Panx-2的表达量分别增加(289. 5±55. 8)%(P <0. 05)和(264. 5±24. 6)%(P <0. 05);采用CBX和PBN处理后,实时荧光实验和化学发光法结果显示,与对照组相比,CBX组和PBN组平均荧光物质转运量下降(87. 5±17. 7)%和(89. 3±14. 3)%(P<0. 01),细胞外ATP水平在8、16、24 h时分别下降(57. 3±7. 2)%、(56. 4±9. 6)%,(63. 4±6. 4)%、(61. 7±2. 5)%,(35. 8±1. 6)%、(13. 5±8. 3)%(P <0. 01); shRNA和m Panx-1处理后,Western印迹结果显示,与阴性对照组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-1的表达量下降(38. 3±5. 2)%和(31. 8±5. 1)%(P <0. 01),m Panx-1组Panx-1的表达量增加(128. 4±7. 5)%(P <0. 01),且实时荧光实验和化学发光法结果显示,shRNA组荧光物质转运量下降(72. 4±39. 4)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别下降(14. 7±0. 1)%、(13. 7±0. 3)%、(13. 1±0. 3)%(P <0. 01); m Panx-1组荧光物质转运量增加(122. 5±. 17. 1)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别增加(886. 1±82. 1)%、(885. 8±83. 3)%、(841. 5±21. 8)%(P <0. 01)。结论:Panx-1和Panx-2在小鼠睾丸癌I-10细胞中表达增多,CBX和PBN及shRNA抑制Panx通道后,睾丸癌I-10细胞荧光传递能力减弱和细胞外ATP水平下降。

拮抗P2X7受体在保护大鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨拮抗P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)在保护大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及其机制。方法:采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型;随后对其进行缺血2 h再灌注24 h处理,完成大鼠大脑局灶性脑I/R损伤模型的制备。采用Longa五分法对大鼠进行神经行为学评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠大脑梗死体积的变化;Western印迹检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK),磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase,p-ERK),缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43),Bax,Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白表达的变化。结果:Longa五分法与TTC染色法结果显示:与假手术组比较,I/R组大鼠神经行为学评分(P<0.05)和大脑梗死体积(P<0.01)均明显增加。与I/R组大鼠相比,P2X7R拮抗剂明亮蓝(brilliant blue G,BBG)或ERK抑制剂PD98059均可明显降低大鼠神经行为学评分(P<0.01)和大鼠大脑梗死体积(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,大鼠神经行为学评分和大脑梗死体积进一步降低(P<0.05);Western印迹结果显示:BBG或PD98059均可降低p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白表达量(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及cleaved caspase-3等蛋白表达量进一步降低(P<0.05)。结论:拮抗P2X7R可减轻大鼠脑I/R损伤,其机制可能与抑制ERK激活,进而降低Cx43和cleaved caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2比值有关。

原花青素防治中枢神经系统退行性疾病研究进展

近年来,随着人们生活水平的改变和老龄化现象日趋严重,中枢神经系统退行性疾病的发病率愈来愈高,其病因尚不明确,严重影响患者的生活质量,增加社会和患者家庭的经济负担。因此,寻找一种新药治疗该类疾病已成为研究热点。原花青素(procyanidins,PCs)具有抗氧化、抗凋亡、抗炎、抗癌以及神经保护等作用,提示PCs具有多靶点的药理作用。正因如此,PCs作为一种天然抗氧化剂引起了广泛的关注,并且已应用于神经系统疾病动物模型的治疗。现基于国内外学者对PCs药理作用的研究现状,本文综述了PCs在防治中枢神经系统退行性疾病中的作用及机制的研究进展,提出了PCs治疗中枢神经系统退行性疾病可能与抑制铁死亡有关的观点。

AMPK介导线粒体融合与裂变在丁苯酞抗小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的:脑缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)是缺血性卒中发生后的一种复杂的病理过程。目前,治疗脑I/R损伤的药物疗效尚不理想。我国Ⅰ类新药丁苯酞(dl-3-N-butylphthalide,NBP)被批准用于治疗缺血性脑卒中,有研究报道,NBP具有减轻脑I/R损伤的作用,但其确切机制仍有待进一步研究。本研究从线粒体融合与裂变的角度探讨NBP抗小鼠脑I/R损伤的作用及机制。方法:将ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、I/R组、I/R+NBP组、I/R+NBP+dorsomorphin组。采用线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。Longa五分法评定小鼠神经功能损伤情况;TTC染色法检测脑梗死体积;透射电镜观察线粒体形态;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、线粒体裂变相关蛋白(Drp1,p-Drp1)的表达。结果:与Sham组相比,I/R组小鼠发生线粒体损伤,表现出线粒体裂变的典型特征,小鼠神经行为学评分、脑梗死体积增加(均P<0.01),p-Drp1/Drp1比值增加(P<0.05),p-AMPK/AMPK比值、Mfn2蛋白表达降低(均P<0.01);在I/R组的基础上使用NBP后,小鼠线粒体损伤有所改善,小鼠神经行为学评分、脑梗死体积降低(均P<0.01),p-Drp1/Drp1比值降低(P<0.01),p-AMPK/AMPK比值和Mfn2蛋白表达增加(均P<0.01),而dorsomorphin(AMPK抑制剂)可明显降低NBP的上述保护作用。结论:NBP具有减轻小鼠脑I/R损伤的作用,其作用机制可能与通过AMPK调节线粒体融合与裂变有关。

干细胞在皮肤光老化治疗方面的研究进展

皮肤作为机体天然屏障,不仅影响机体健康,在外貌、美容等方面同样重要,但随着时间的推移以及外界环境因素尤其紫外线辐射影响,会诱发多种皮肤损伤问题,如氧化应激、皮肤老化、炎症反应、色素沉积甚至癌变。干细胞是一类具有自我复制能力及多向分化潜能的细胞,其强大的旁分泌功能,在抗皮肤光损伤中发挥重要保护作用。本文就紫外线引起的皮肤光老化问题综述干细胞对皮肤的光保护作用及机制,可为临床皮肤病的治疗提供更多可靠依据。