二甲双胍对佐剂关节炎大鼠炎症和滑膜细胞自噬的影响

目的探讨二甲双胍(Met)对佐剂关节炎(AA)大鼠炎症和滑膜细胞自噬的作用及机制。方法采用Freund完全佐剂诱导AA大鼠模型。采用足爪肿胀度评分评价Met对AA大鼠炎症的作用。取大鼠滑膜进行原代滑膜细胞培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测Met对滑膜细胞增殖的影响。采用蛋白质印迹检测Met及Compound C对自噬相关蛋白——自噬效应蛋白Beclin 1抗体、P62表达的影响。结果Met可改善AA大鼠的全身炎症反应,减轻足爪部肿胀,尤其是高剂量时效果更明显;Met可抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的大鼠滑膜细胞增殖,且呈时间剂量依赖性;Met可抑制TNF-α刺激的大鼠滑膜细胞自噬,而Compound C可降低Met抑制自噬的程度。结论Met可改善AA大鼠的全身炎症反应,且可在体外抑制TNF-α刺激的大鼠滑膜细胞增殖及自噬,其机制可能与Met激活AMP激活蛋白激酶信号通路相关。

艾司西酞普兰联合有氧运动对小鼠抑郁症的治疗作用

目的探究艾司西酞普兰联合有氧运动对抑郁模型小鼠的抗抑郁作用及其机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,采用慢性温和不可预知应激模型进行抑郁小鼠模型的制备,实验分为空白对照组(n=7)、模型组(n=7)、艾司西酞普兰组(n=7)、联合治疗组(艾司西酞普兰+有氧运动,n=7)。通过糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验、旷场实验评价小鼠抑郁样行为。利用高效液相仪检测各组小鼠海马脑区氨基酸水平。ELISA法检测各组小鼠外周血炎症因子水平。免疫荧光或蛋白质免疫印迹法检测小鼠海马脑区GFAP及焦亡相关蛋白GSDMD、Caspase-1表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠糖水偏好率、旷场实验运动总路线长度及海马脑区GFAP表达减少,强迫游泳实验及悬尾实验不动时间、外周血促炎因子含量,海马脑区牛磺酸、γ-氨基丁酸水平及GSDMD、Caspase-1成熟体表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,艾司西酞普兰组及联合治疗组小鼠糖水偏好率、旷场实验运动总路线及海马脑区GFAP表达增加,强迫游泳实验及悬尾实验不动时间、外周血促炎因子、海马脑区牛磺酸、γ-氨基丁酸含量及GSDMD、Caspase-1成熟体表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与艾司西酞普兰组相比,联合治疗组旷场实验总路线显著增加(P<0.05),小鼠糖水偏好率、海马脑区GFAP表达有增加趋势,强迫游泳实验及悬尾实验不动时间、外周血促炎因子、海马脑区牛磺酸、γ-氨基丁酸含量及GSDMD、Caspase-1成熟体表达显示减少趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论艾司西酞普兰联合有氧运动对抑郁模型小鼠焦虑行为的治疗作用优于艾司西酞普兰组,其机制可能与外周促炎因子水平及海马脑区星形胶质细胞焦亡有关。

SRC激酶抑制剂PP2通过上调Cx43蛋白表达降低肺癌A549细胞的侵袭和转移

目的观察SRC激酶抑制剂PP2对肺癌细胞A549侵袭转移能力的影响,并探讨相关机制。方法采用MTT法检测PP2对A549细胞的增殖抑制作用;利用细胞划痕实验和Transwell实验分别测定不同浓度PP2处理A549细胞24 h后的侵袭和转移能力;采用Western blot法检测SiRNA沉默Cx43基因、mRNA过表达Cx43基因和PP2处理后细胞内Cx43、MMP-2的表达。结果MTT法显示2、4、8、16、32μmol/L PP2显著抑制A549细胞的增殖,且在该范围内有浓度依赖性。采用1、2、4、8、16μmol/L PP2分别作用于A549细胞24 h,细胞的侵袭、转移能力也逐渐降低(P<0.05)。4μmol/L和8μmol/L PP2可以显著增加细胞Cx43蛋白水平,降低MMP-2蛋白水平。过表达Cx43蛋白后,PP2抑制细胞侵袭转移能力增强;沉默Cx43蛋白后,PP2抑制细胞侵袭转移能力降低(P<0.05)。结论 SRC激酶抑制剂PP2可以降低肺癌细胞A549的侵袭转移能力,该作用与细胞Cx43蛋白的表达有关。

代谢重编程在非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药中的作用

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFRTKI)能够有效地抑制EGFR基因突变驱动型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的生长,但NSCLC患者在经过长时间持续的EGFR-TKI治疗后往往会发生严重的耐药。研究表明肿瘤细胞能量代谢紊乱对EGFR-TKI耐药的产生具有重要的诱导作用。在药物、基因突变等多种因素的作用下肿瘤细胞会发生代谢重编程,上调肿瘤细胞的代谢速率和强度,促进肿瘤对糖、脂肪、谷氨酰胺等营养物质的摄入和利用,并形成有利于肿瘤生长的微环境,促进肿瘤细胞的旁路激活、表型转化、异常增殖等,从而抑制免疫细胞的活性和肿瘤细胞的凋亡,导致肿瘤细胞对EGFR-TKI产生耐药性。

雌激素受体阳性的乳腺癌细胞缝隙连接的调控对阿霉素抗肿瘤作用的影响

目的在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7中观察缝隙连接(GJ)功能的调控对阿霉素抗肿瘤作用的影响。方法采用MTT法检测0~24.0μmol/L阿霉素对细胞存活率的影响;Western blot和细胞免疫荧光法分别检测细胞中Cx43总蛋白和膜蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞缝隙连接功能;采用维甲酸增强细胞GJ功能,油酸酰胺和18-alpha-甘草次酸(18-α-GA)抑制细胞GJ功能;Cx43si RNA沉默细胞中Cx43基因。结果雌激素受体阳性(ER+)细胞中Cx43表达水平及GJ功能显著强于雌激素受体阴性ER(-)细胞,阿霉素显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01),维甲酸可以通过增加细胞GJ功能从而增强阿霉素的细胞毒性(P<0.01),油酸酰胺和18-α-GA可通过抑制细胞GJ功能而降低阿霉素的细胞毒性(P<0.01);采用si RNA沉默细胞Cx43基因,胞内Cx43总蛋白和膜蛋白表达下降,GJ功能降低,阿霉素对MCF-7的细胞毒性降低(P<0.01)。结论 ER(+)细胞中Cx43表达水平及GJ功能显著强于ER(-)细胞;维甲酸可以通过增强细胞GJ功能而增加阿霉素细胞毒性,油酸酰胺和18-α-GA通过抑制细胞GJ功能降低阿霉素细胞毒性,Cx43si RNA能沉默MCF-7中Cx43表达,并抑制由其形成的GJ功能,降低阿霉素的细胞毒性。

睡眠剥夺对海马区单胺类神经递质、氨基酸代谢及小鼠行为的影响

目的 研究短期睡眠剥夺对小鼠海马脑区代谢的影响。方法 采用改良多平台水环境法建立睡眠剥夺模型。小鼠随机分为3组,每组10只,分别为正常对照组、睡眠剥夺24 h组和睡眠剥夺48 h组。采用旷场实验评价小鼠焦虑样行为,采用糖水偏好实验、强迫游泳和悬尾实验评价小鼠的抑郁样行为;应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)对小鼠海马脑区5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、γ-氨基丁酸(GABA)、二羟基苯乙酸(5-DOPAC)、高香草酸(HVA)6种单胺类神经递质及谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、牛磺酸(Tau)4种氨基酸的含量进行测定;采用免疫荧光染色技术检测每组小鼠海马脑区胶质细胞表达量。主要指标为单胺类神经递质与氨基酸含量的测定。结果 行为学结果表明与对照组相比,睡眠剥夺24 h组糖水偏好率上升,强迫游泳不动时间、悬尾不动时间显著缩短,旷场总运动距离增加;睡眠剥夺48 h组糖水偏好率下降、强迫游泳及悬尾不动时间延长,旷场总运动距离降低。单胺类递质HPLC检测结果表明,与对照组相比,睡眠剥夺24 h组小鼠海马区,DA含量升高(P<0.001)、NE含量升高(P<0.01),GABA含量降低(P<0.05),5-HT、5-DOPAC和HVA含量较对照组差异无统计学意义;睡眠剥夺48 h小鼠海马区5-HT、NE含量降低(P均<0.05),DA含量降低(P<0.01),GABA含量升高(P<0.01),5-DOPAC和HAV差异无统计学意义。氨基酸类递质HPLC检测结果显示,较对照组,睡眠剥夺24 h组Tau及Glu水平均升高(P均<0.05),Asp及Ser差异无统计学意义。睡眠剥夺48 h组海马脑区Glu及Tau含量较睡眠剥夺24 h组下降,差异有统计学意义(P均<0.05)。免疫荧光结果显示,睡眠剥夺24 h组GFAP阳性数较对照组差异无统计学意义,睡眠剥夺48 h组,GFAP阳性数较对照组降低(P<0.05)。结论 睡眠剥夺24 h可能通过激活小鼠海马脑区胶质细胞,上调5-HT、DA、NE含量,同时Glu、Tau水平升高,引起小鼠行为学焦虑样的改变;睡眠剥夺48 h可能通过抑制小鼠海马脑区胶质细胞激活,反向调节海马脑区上述单胺类神经递质、氨基酸,引起小鼠行为学抑郁样的改变。

SRC激酶在人乳腺癌细胞对阿霉素耐药及侵袭转移中的作用

目的探讨SRC激酶抑制剂PP2在乳腺癌细胞对阿霉素(adriamycin,ADM)耐药及侵袭转移过程中的作用。方法采用MTT法检测不同浓度ADM对乳腺癌细胞敏感株(MCF-7)和耐药株(MCF-7/ADM)细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)及耐药指数(resistance index,RI);Western blot检测MCF-7和MCF-7/ADM细胞内多药耐药蛋白MDR1、SRC及缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达;Transwell和细胞划痕实验检测MCF-7、MCF-7/ADM细胞、不同浓度PP2(1、2、4μmol/L)预处理MCF-7/ADM24h细胞的侵袭和迁移能力;采用标准集落形成分析法观察4μmol/L PP2预处理对ADM细胞毒性的影响。结果ADM对MCF-7的增殖抑制作用大于MCF-7/ADM细胞(P<0.01);ADM对MCF-7细胞IC50为24.55μmol/L,对MCF-7/ADM细胞IC50为770.57μmol/L,RI为31;与MCF-7细胞比较,MCF-7/ADM细胞MDR1、SRC蛋白表达增高(P<0.01),且MCF-7/ADM细胞具有更强的侵袭迁移能力(P<0.01),采用SRC抑制剂后,MCF-7/ADM细胞侵袭转移能力被抑制(P<0.01),细胞集落形成率下降,即对ADM的敏感性提高(P<0.01)。结论人乳腺癌细胞MCF-7在对ADM耐药的过程中伴随着SRC蛋白表达增多,SRC抑制剂可以降低细胞耐药性以及侵袭转移能力。