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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价
被引量:
4
1
作者
王雪梅
王英
+5 位作者
薛玉芹
陈勇
陶志勇
夏惠
唐洁
方强
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期945-950,共6页
目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-...
目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。
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关键词
结核分枝杆菌
ESAT-6
DNA疫苗
细胞免疫
体液免疫
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职称材料
题名
结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价
被引量:
4
1
作者
王雪梅
王英
薛玉芹
陈勇
陶志勇
夏惠
唐洁
方强
机构
蚌埠医学院
病原生物
学
教研室
蚌埠医学院
安徽省感染与
免疫
重点实验室
蚌埠医学院蚌埠医学院免疫学教研室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期945-950,共6页
基金
国家自然科学基金(30600518)
安徽省高等学校省级自然科学研究项目(KJ2013A185)
安徽省高等学校省级自然科学研究项目(KJ2011Z248)~~
文摘
目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。
关键词
结核分枝杆菌
ESAT-6
DNA疫苗
细胞免疫
体液免疫
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
ESAT-6
DNA vaccine
cellular immunity
humoral immunity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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被引量
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1
结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价
王雪梅
王英
薛玉芹
陈勇
陶志勇
夏惠
唐洁
方强
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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