前列腺素D2调控自噬影响胃癌干细胞的干性

目的:探究前列腺素D2(Prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)干性的影响及机制。方法:通过无血清培养法富集7901‐GCSCs;然后通过流式细胞术检测无血清培养的7901‐GCSCs干性标志物CD44的阳性率;通过干细胞成球实验检测不同浓度PGD2(2.5、5、10)μg/mL刺激后的成球能力,并采用Western blot实验检测不同浓度PGD2刺激后干性相关指标(OCT4、CD44)和自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)的表达。采用Western blot实验检测不同浓度CQ(2.5、5、10)μmol/L刺激后自噬相关蛋白的表达。通过Western blot实验检测PGD2以及PGD2+CQ处理后自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)和干性相关指标(OCT4、CD44)的蛋白表达。结果:流式细胞术结果显示,与胃癌细胞SGC‐7901相比,无血清培养的7901‐GCSCs中CD44阳性率表达增加(P<0.05)。干细胞成球实验结果表明,与DMSO组相比,PGD2组中7901‐GCSCs的成球能力明显减弱(P<0.05)。Western blot结果显示,与DMSO组相比,PGD2组中7901‐GCSCs的干性相关指标(OCT4、CD44)蛋白表达下调(P<0.05),而自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)表达增加(P<0.05)。与DMSO组相比,CQ组中自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)表达降低(P<0.05)。Western blot结果还显示,与DMSO组相比,PGD2+CQ组中细胞自噬相关蛋白以及干性相关指标表达并无明显变化,提示CQ可阻断PGD2对7901‐GCSCs的干性抑制作用。结论:PGD2可能通过调控自噬影响7901‐GCSCs的干性。

泛素化连接酶c-Cbl对急性髓系白血病细胞增殖分化能力的影响

目的:探讨泛素化连接酶c-Cbl对急性髓系白血病细胞株THP-1细胞(人急性单核细胞白血病细胞)增殖分化能力的影响。方法:构建并筛选出稳定转染HBLV-h-CBL-ZsGreen-PURO敲低和HBLV-h-CBL-HA-BSD过表达病毒载体的THP-1细胞,分为4组:NC组(c-Cbl敲低组对照)、S3组(c-Cbl敲低组)、EV组(c-Cbl过表达组对照)、c-Cbl组(c-Cbl过表达组)。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)和细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒检测稳转细胞的增殖和凋亡。采用蛋白免疫印迹技术检测基因敲低或过表达细胞的凋亡相关蛋白(Bcl-2、caspase-9、cleaved-caspase-9)的表达情况。采用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、瑞氏吉姆萨染色、流式细胞术检测表面分化抗原CD11b表达差异。采用蛋白免疫印迹技术检测PU.1蛋白表达情况来研究稳转细胞的分化能力。结果:转染慢病毒后,与NC组相比,S3组中c-Cbl基因的蛋白表达水平下降;与EV组相比,c-Cbl组中c-Cbl基因的蛋白表达水平上升。CCK8和流式细胞术结果表明c-Cbl能够促进THP-1的增殖(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果表明c-Cbl能够抑制凋亡蛋白的表达,并且促进Bcl-2蛋白表达。NBT还原实验结果表明c-Cbl敲除后NBT阳性细胞增多,c-Cbl过表达后阳性细胞减少(P<0.01)。瑞氏吉姆萨染色结果显示,c-Cbl敲低后细胞核分化成肾型、蚕豆型。流式细胞术结果表明c-Cbl敲除后CD11b表达增多,过表达后CD11b表达减少。蛋白免疫印迹结果也显示c-Cbl敲除后PU.1蛋白表达增多,过表达后减少。结论:c-Cbl能够促进THP-1细胞的增殖,抑制其凋亡和分化。